槐米中蘆丁的提取和精制(2010)實驗報告

1、實驗一、槐米中蘆丁的提取、精制和鑒定（一）實驗目的要求1. 制備蘆丁，供藥用。2. 通過蘆丁的制備，掌握黃酮類化合物的提取分離的原理和操作。3. 熟悉重結晶技巧。4. 了解和掌握黃酮類化合物的一些主要性質(zhì)和鑒定方法。（二）實驗的基本原理1. 蘆丁的提取原理利用蘆丁結構中含有多個酚羥基，呈酚酸性，能在堿水中溶解的性質(zhì)，可用堿性溶劑進行提取，提取液加酸后可沉淀析出（堿溶酸沉法）。也可利用蘆丁在冷水中溶解度小，在熱水中溶解度大的性質(zhì)進行提取。2. 蘆丁的分離原理利用蘆丁結構在冷乙醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大，以及在熱水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性質(zhì)分離。蘆丁用溶劑加熱溶解后，趁熱抽濾，濾液放

2、冷后能析出而達到分離的目的（如不純可再重復操作進行分離）。也可采用醇溶水沉法進行精制。3. 蘆丁的鑒定原理（1）利用吸附薄層色譜的分離原理，蘆丁與蘆丁對照品在同一條件下進行展開，顯色，以達到鑒定蘆丁的目的。（2）通過專屬的化學顯色反應（如三氯化鋁顯色反應），確定蘆丁的成分類型（黃酮類）。(三)實驗內(nèi)容1.用堿提法、水提法、醇提法提取槐米中蘆丁。2.用酸沉法和冷卻過飽和法分離蘆丁。3.溶劑重結晶精制蘆丁。4.薄層色譜法和顯色反應鑒定蘆丁(四) 實驗藥材儀器與試劑1. 實驗藥材 槐米20g。2. 儀器：磁力加熱攪拌器、旋轉蒸發(fā)儀、粉碎機、500ml燒杯，1000ml燒杯，50ml燒杯，250ml園

3、底燒瓶、500ml園底燒瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml錐形瓶、50ml錐形瓶、研缽、移液管、減壓過濾裝置，布氏漏斗，抽濾瓶、層析缸等。3. 試劑：硼砂、氧化鈣、 hci、三氯化鋁、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、濾紙、ph試紙等。（五）實驗步驟1.提取（水提取法）稱取槐米粗粉20g，在研缽中研碎后放入500ml燒瓶中，加水200ml，用磁力加熱攪拌器加熱煮沸30min，趁熱過濾。殘渣同法操作一次，合并兩次濾液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，減壓抽濾，用少量蒸餾水洗滌蘆丁結晶，抽干，得粗制蘆丁，干燥，稱重，計算得率。2.精制（醇-水重結晶法）取粗制蘆丁1g，置于250ml園底燒瓶中，

4、加80%乙醇30ml加熱回流15分鐘，趁熱抽濾。濾液置250ml燒杯中，向濾液中加蒸餾水（約34倍量）至溶液呈明顯混濁，室溫放置，抽濾得精致蘆丁。用少量蒸餾水洗滌蘆丁結晶，晾干，稱重。(六) 過程與現(xiàn)象記錄 day 1 （2011-05-07）1.提取 稱取研碎的粗槐米20.02g，組裝儀器。 原料放入500ml燒瓶中加水200ml（1-2），磁力攪拌加熱。燒瓶中為咖啡色懸浮液，有甘苦氣味，沸騰前不斷產(chǎn)生小氣泡上，液體中有明顯漩渦（1-3）。102沸騰，產(chǎn)生大量氣泡，藥渣翻滾，漩渦被氣泡遮蓋（1-4）。加熱過程中時常停止沸騰，續(xù)略升溫23。隨著時間的延長，液體顏色加深。煮沸規(guī)程中應控制液量，過

5、少難以提出藥品，過多容易噴出瓶口。最初用抽濾法分離殘渣（1-5），但是溶液很稠且含糖分較多，難以流下（1-6），并且易阻塞和沖破濾紙，還漸漸冷卻。后改用離心法，5000r,15min(1-7)，效果略好，但是溶液還是冷卻，溶解的提取物較少。濾液為深黃色色，粘稠，氣味濃厚甘甜。再次將濾渣至于放入500ml燒瓶中加水200ml磁力攪拌加熱30min，液體顏色略比第一次深。將兩次得到的浸液（約300ml）收集放入冰箱備用。day 2 （2011-05-08）2精制1.將粗提物抽濾（1-7）（1-8）（1-9），干燥得粗制蘆丁（1-10）。2.取粗制蘆丁1.008g，置于250ml園底燒瓶中，加80%

6、乙醇30ml，加熱回流15分鐘（1-11），加熱前沒有充分分散固體粗提物，趁熱抽濾（1-12），得到黃色油狀液體（1-13）。2.另旋轉蒸發(fā)粗提物的濾液（1-14），沒有產(chǎn)物。 day 3（2011-05-14） 3.鑒定（1）點滴顯色反應 從放置一周的粗提物中取蘆丁的甲醇溶液（供試液）分別點在濾紙上，揮去溶劑，紫外照射，光吸收明顯（1-15），然后分別添加供試液蘆丁的甲醇溶液和顯色劑2%三氯化鋁乙醇溶液，顯黃色（1-16），在紫外燈下365nm觀察有明顯亮斑（1-17）。（2）薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠gf254薄層板（5.0cm x 10.0cm）。樣 品：自制蘆?。ㄓ眉状既芙猓瑵舛燃s1mg

7、/ml）對照品：蘆丁對照品的甲醇溶液。展開劑：三氯甲烷-甲醇-甲酸（730.5）顯 色：a.先在可見光下觀察，然后在紫外光下觀察，有明顯紫外吸收。（365nm紫外燈下觀察）b.遮擋硅膠板左側噴三氯化鋁試劑（1-18）， 365nm紫外燈下觀察，右側有顯色劑呈黃色，左側有明顯紫外吸收（1-19）。4 .注意事項(1) 硼砂因能與蘆丁中的鄰二酚羥基結合，起保護鄰二酚羥基，不被氧化破壞的作用。實驗證明，提取時加入硼砂，產(chǎn)品的質(zhì)量會好些。(2) 石灰乳既能達到堿溶解提取蘆丁的目的，還可以除去槐米中大量的粘液質(zhì)和酸性樹脂（形成鈣鹽沉淀），但ph不能過高和長時間煮沸，因為會導致蘆丁的水解而開環(huán)和形成鈣鰲合

8、物，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率。(3) ph過低（酸性太強）會使蘆丁形成洋鹽而收率降低。(4) 稱量蘆丁時，先將帶濾紙的漏斗稱重，再將盛樣品的帶濾紙的漏斗稱重，差重即為樣品的重量。（七）結果計算及分析產(chǎn)率 小漏斗+濾紙重29.69g抽濾后小漏斗+濾紙+樣品重30.20g樣品凈重0.51g產(chǎn)率=（0.51/1.008）×100%=50.60%比移值 rf=3/5.75=0.522分析：1、水提法不能充分溶解蘆?。?2、精制時粗提物聚集成固體顆粒，沒有充分溶解； 3、抽濾、轉移等過程的損失。（八）心得體會第一次做這樣長時間的實驗，漸漸喜歡上了實驗室這樣安靜的氣氛，在這里做實驗，只需要關注操作和實驗過程，思考、分析反應機理和得到某個結果的原因，不需要考慮實驗之外的那些世