生物性檢材的個(gè)人識別

1、各種生物檢材各種生物檢材 血液血液 血痕血痕 精斑精斑 唾液唾液 軟組織軟組織 硬組織（骨、牙）硬組織（骨、牙） 毛發(fā)毛發(fā) 指甲指甲 血痕檢驗(yàn)血痕檢驗(yàn)（Bloodstains Test） 血痕檢驗(yàn)的目的： 1是否血痕 2是人血還是動物血 3血痕的個(gè)人識別 4與案情有關(guān)的其他問題 血痕檢驗(yàn)的程序： 1肉眼檢驗(yàn) 2預(yù)試驗(yàn) 3確正試驗(yàn) 4種屬鑒定 5遺傳標(biāo)記測定 6其他檢驗(yàn)肉眼檢驗(yàn)預(yù)試驗(yàn) 陰性不是血痕或被壞 陽性可能是血痕確證試驗(yàn)（有時(shí)可省） 陰性不是血痕或量太少或被破壞 陽性肯定是血痕種屬試驗(yàn) 陰性不是人血或量太少或被破壞 陽性肯定是人血痕各種動物 血鑒定個(gè)人識別非遺傳標(biāo)記測定出血部位出血時(shí)間出血

2、量出血者年齡出血性別一人血或多人血遺傳標(biāo)記測定紅細(xì)胞血型 血清型 紅細(xì)胞酶型 HLA DNA多態(tài)性ABO MN P Rh Hp Gc Tf Gm PGM EsD GLOI EAP A B DR DQ DNA指紋 VNTR STR RAPD 第一節(jié)第一節(jié) 肉眼檢驗(yàn)肉眼檢驗(yàn)一血痕的部位二血痕的顏色三血痕的形狀1滴狀2流注狀3擦拭狀4噴濺狀5血印痕6血泊7血水8隱性血痕9其他四血痕的范圍 第二節(jié)第二節(jié) 預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)（Preliminary Test）預(yù)試驗(yàn)即篩選試驗(yàn)，要求：1是血痕一定呈陽性反應(yīng)， 預(yù)試驗(yàn)陰性即可認(rèn)定不是血痕或血痕已被破壞。2所需的檢材量少，靈敏度高，即使肉眼看不見，也呈陽性反應(yīng)。3

3、操作簡便快速。 血痕Hb或正鐵血紅素過氧化物酶活性過氧化氫水新生態(tài)氧無色化學(xué)物質(zhì)有色物質(zhì)氧化血痕預(yù)試驗(yàn)的基本原理：一 聯(lián)苯胺試驗(yàn)1 原理2 試劑：冰醋酸 聯(lián)苯胺無水乙醇飽和溶液 3%過氧化氫3 操作：血痕少許，置與濾紙上冰醋酸1滴聯(lián)苯胺無水乙醇飽和溶液1滴3%過氧化氫1滴1-2分種不出現(xiàn)蘭色反應(yīng)立即出現(xiàn)蘭色反應(yīng) 陽性不出現(xiàn) 陰性4 注意事項(xiàng) 二 酚酞試驗(yàn)1 原理2 試劑3 操作三 魯米諾試驗(yàn)1 原理：魯米諾的堿性溶液，在過氧化氫存在下， 與血紅素反應(yīng)發(fā)出強(qiáng)熒光。2 試劑：3 操作：4 注意：四 其他預(yù)試驗(yàn) 鄰聯(lián)甲苯胺試驗(yàn) 孔雀綠試驗(yàn) 氨基比林試驗(yàn)第三節(jié) 確證試驗(yàn)(Conclusive Test

4、) 血痕確證試驗(yàn)檢驗(yàn)的物質(zhì)是血紅蛋白及其衍生物，確證試驗(yàn)陽性，表明檢材中含有血紅蛋白或其衍生物，可以判定為血痕。確證試驗(yàn)靈敏度一般不太高。常用方法：1 結(jié)晶試驗(yàn) 2 顯微分光鏡檢查：光譜檢查一 血色原結(jié)晶試驗(yàn)1 原理： 血紅蛋白在堿性溶液中分解為正鐵血紅素和變性 珠蛋白，在還原劑作用下，正鐵血紅素還原為血 紅素，后者與變性珠蛋白或其他含氮化合物（如 吡啶 煙堿）等，結(jié)合，形成血色原結(jié)晶。2 試劑： 高山氏試劑 10% NaOH 3ml 混合置棕色瓶中 30% 葡萄糖 10ml 吡啶 3ml 試劑配置好第二日天使用較好，久置則反應(yīng)緩慢， 甚，至失效。3 操作4 結(jié)果 桃紅色的星狀 菊花狀或針狀結(jié)

5、晶二 氯化血紅素結(jié)晶試驗(yàn)1 原理：在酸的作用下，血紅蛋白分解為正鐵血紅素， 后者與氯離子反應(yīng)生成氯化血紅素結(jié)晶。2 試劑：10%NaCl 2ml 冰醋酸 10ml 無水乙醇 5ml3 操作4 結(jié)果: 冷卻后鏡檢出現(xiàn)菱形或瓦片狀褐色結(jié)晶。5 注意：加熱須小心，若加熱超過142度，血紅素被破 壞不能形成結(jié)晶。 三 顯微分光鏡檢查1 原理：有色物質(zhì)能吸收一定波長的光，當(dāng)日光通過有色 物質(zhì)時(shí)，再經(jīng)過分光鏡時(shí)，因其中某些波長的光 被吸收，便會在光譜上相應(yīng)波長區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)黑色 吸收線。血紅蛋白及其衍生物均系有色物質(zhì)，具 很強(qiáng)的選擇性吸收光線的性質(zhì)，再分光鏡下檢查 是否有特定的吸收線，可確定是否是血痕 。2

6、方法 第四節(jié) 種屬鑒定（Spscies Identification)種屬鑒定 環(huán)狀沉淀反應(yīng) 沉淀反應(yīng) 免疫擴(kuò)散試驗(yàn)血清學(xué)方法 對流電泳 抗球蛋白消耗試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)細(xì)胞學(xué)方法生化方法 血紅蛋白等電聚焦 一 沉淀反應(yīng) 1 原理 用異種動物學(xué)清蛋白作為抗原，免疫動物，可刺激動 物產(chǎn)生血清抗體，后者能與相應(yīng)的血清抗原發(fā)生特意 性沉淀反應(yīng)，而與不相應(yīng)的血清蛋白則不發(fā)身生反映。 用已知抗血清與被檢血痕的生理鹽水寢液反應(yīng)，確定 血痕的種屬。2 抗血清：抗人血紅蛋白血清 抗人血清蛋白血清 （1）要求 （1） 特異性好。 （2）效價(jià)達(dá)10000倍以上，10分鐘內(nèi)出現(xiàn)明顯沉淀。 （3）澄清透明。（2）抗

7、血清的種屬特異性： a 近緣反應(yīng): b 抗血清交叉反映的消除： 以純化的抗原免疫動物，獲得特異性血清。 用吸收法除去血清中的交叉反應(yīng)抗體。 稀釋抗原條整抗原抗體比例，消除抗血清的交叉反映。（3）抗血清的器官特異性 3 檢材處理4影響沉淀反應(yīng)的因素5 方法 （1） 環(huán)狀沉淀反應(yīng) （2） 瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn) （3）對流免疫電泳二 抗人球蛋白消耗試驗(yàn)1 原理： 人血痕浸液與抗人球蛋白血清相遇時(shí)，血痕浸液中 的球蛋白就會與抗球蛋白特異性結(jié)合，抗人球蛋白 血清的效價(jià)就會減少或喪失。再用經(jīng)不完全抗D （球蛋白）致敏的紅細(xì)胞做指示劑，觀察經(jīng)吸附后的 抗人球蛋白血清的效價(jià)是否下降或消逝。如已消耗， 則指示細(xì)胞呈現(xiàn)凝

8、集抑制，即為陽性反應(yīng)。本試驗(yàn) 是檢測人血清的球蛋白，此球蛋白在人體液或分泌液 中存在極少，對抗人球蛋白血清無抑制作用。2 方法（1）紅細(xì)胞致敏（2）抗人球蛋白血清的標(biāo)化（3）抗人球蛋白血清浸泡血痕（4）測定吸收后抗人球蛋白血清的效價(jià)三 薄層凝膠等電聚焦四 其他方法第五節(jié) 血痕的血型測定一 血痕的紅細(xì)胞血型測定（一）血痕的ABO血型測定 1. 凝集素的測定 2 凝集原的測定 A.B.H血型物質(zhì)是一種多糖體，對干燥和高 溫有較強(qiáng)的抵抗力，當(dāng)紅細(xì)胞變形或細(xì)胞膜 碎裂，其上血型物質(zhì)仍能保持與相應(yīng)凝集素 特異結(jié)合的能力。應(yīng)此， A.B.H血型物質(zhì)的 檢測就成為血痕ABO血型鑒定的重點(diǎn)。 A 吸收試驗(yàn) 原

9、理：血痕中的血型物質(zhì)可以從抗血清中吸收相應(yīng)的凝集素， 如 A 型物質(zhì)可以吸收A 凝集素,B型物質(zhì)可以吸收B 凝 集素。將被檢血痕分別與已知效價(jià)的抗血清進(jìn)行反應(yīng)， 血痕中的血型物質(zhì)與相應(yīng)的凝集素特異性結(jié)合，使抗 血清中該凝集素效價(jià)減低或消失。吸收后再用相應(yīng)紅 細(xì)胞測定其效價(jià)，看其效價(jià)的變化，便可判斷血痕的 血型。 分泌物獲得檢材獲得檢材中細(xì)胞中細(xì)胞經(jīng)物理經(jīng)物理化學(xué)作化學(xué)作用釋放用釋放DNADNA經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)操作及經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)操作及儀器分析得到分型結(jié)果儀器分析得到分型結(jié)果應(yīng) 用應(yīng) 用 P C RP C R反應(yīng)的對反應(yīng)的對D N AD N A 進(jìn) 行進(jìn) 行幾何級數(shù)幾何級數(shù)放大放大統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算統(tǒng)計(jì)學(xué)

10、計(jì)算得出結(jié)論得出結(jié)論 DNADNA分型的應(yīng)用分型的應(yīng)用以人找物以人找物 發(fā)現(xiàn)犯罪嫌疑人在先發(fā)現(xiàn)犯罪嫌疑人在先，獲取證獲取證實(shí)及犯罪事實(shí)的物證再后。實(shí)及犯罪事實(shí)的物證再后。以物找人以物找人 發(fā)現(xiàn)證實(shí)犯罪的物證在先發(fā)現(xiàn)證實(shí)犯罪的物證在先，獲獲取犯罪嫌疑人再后。取犯罪嫌疑人再后。以物找物以物找物 對發(fā)生在不同時(shí)間、不同地點(diǎn)對發(fā)生在不同時(shí)間、不同地點(diǎn)的案件所獲取的犯罪物證進(jìn)行串并。（如精斑、的案件所獲取的犯罪物證進(jìn)行串并。（如精斑、血跡、毛發(fā)等檢材的串并）血跡、毛發(fā)等檢材的串并）以人找人以人找人 尸源的尋找與認(rèn)定。（如無名尸源的尋找與認(rèn)定。（如無名尸、碎尸、空難、焚尸等的認(rèn)定）尸、碎尸、空難、焚尸等的

11、認(rèn)定） 精斑檢驗(yàn) SEMINAL STAIN TEST案情 強(qiáng)奸 猥褻 非法性關(guān)系 離婚檢材 褲頭 衛(wèi)生紙 床單 毛巾 陰道拭子 新鮮精液鑒定 是否精斑 個(gè)人識別 生育能力鑒定一、精液的組成 精子 精漿 精漿水 90 % 有機(jī)物 精素 黃素 膽堿 卵磷脂 蛋白質(zhì) 氨基酸 酶離子 Na+ K+ Ca+ P+Cl- Zn+ SO4=特有蛋白 P30 MSP SM 2 SGP 血型物質(zhì) ABH Gc Tf Gm Km Acp PGM1 DIA3 二、檢材處理 精液 4度保存 晾干制成精斑 精斑 提取 晾干 紙袋保存 對照檢材 唾液 血液（血痕） 女子、丈夫、嫌疑人。 三、精液檢驗(yàn) 一般性狀 乳白色，

12、粘稠狀液體, PH7.2PH7.28.98.9 比重：比重：1.0211.0211.0401.040，滲透壓：，滲透壓：0.550.550.580.58 數(shù)量數(shù)量 2-2.5 ml/2-2.5 ml/次，次，1-1.5 1-1.5 億個(gè)億個(gè)/ml/ml，總數(shù)，總數(shù) 4-6 4-6 億個(gè)億個(gè) 形態(tài)、活動度。形態(tài)、活動度。 頭、體、尾，頭、體、尾，50-60um。 不正常的標(biāo)準(zhǔn) 數(shù)量 ： 0.6億/ml ， 總數(shù) 1億 總量 40% 畸型精子 15% 四、精斑檢驗(yàn) 一）肉眼檢查 二）預(yù)實(shí)驗(yàn) 三）確證實(shí)驗(yàn) 四）血型測定 一）肉眼檢查 顏色 形態(tài) 數(shù)量 分布 陳舊度 二）精斑預(yù)示驗(yàn)1.紫外線檢查原理：

13、 紫外線 黃素 銀白色熒光 400-500nm方法及結(jié)果特點(diǎn)： 簡單、快速，不破壞檢材； 確定精斑的分布，范圍。 特異性差。2.Acp實(shí)驗(yàn)原理 Acp 磷酸苯二鈉 萘酚 + 氨基安替比林結(jié)果 鐵氫化鉀 紅色醌類試劑 緩沖液 枸櫞酸 1.4g 1N氫氧化鈉 12.5ml 磷酸苯二鈉 0.2g 4-甲基安替筆林 0.6g 加蒸餾水至 100ml 顯色液 1N氫氧化鈉 17.7ml 碳酸氫鈉 1.4g 鐵氰化鉀 3.6g 加蒸溜水至 100ml 方法： 檢材+緩沖液 37 ，5min。 顯色液 深紅色 + 淡黃色三）其他方法碘化碘甲結(jié)晶實(shí)驗(yàn) 膽堿+碘 碘膽堿結(jié)晶苦味酸結(jié)晶實(shí)驗(yàn) 精素+苦味酸 精素苦味

14、酸結(jié)晶鋅的檢出 精液中鋅的含量最高三、精斑的確證實(shí)驗(yàn) 一）形態(tài)學(xué)檢查 精子的檢出 二）免疫學(xué)檢驗(yàn) 抗人精沉淀實(shí)驗(yàn) 抗P30沉淀實(shí)驗(yàn) 其他 三）生化檢驗(yàn) LDHX GDDAP 一）精子的檢出方法結(jié)果 HE染色 頂部不著色 藍(lán)頸 紅 尾 品紅-美藍(lán) 紅頭 藍(lán)尾 藻紅染色 紅色確證標(biāo)準(zhǔn) 一個(gè)完整的精子 數(shù)個(gè)典型的精子頭二）免疫學(xué)方法抗人精血清沉淀實(shí)驗(yàn)抗P30血清沉淀實(shí)驗(yàn) 高度的種屬特異性與器官特異性 無精子的精斑亦可為陽性 P30性質(zhì)穩(wěn)定 檢出時(shí)間長其他 抗 微精蛋白沉淀實(shí)驗(yàn) 抗P30單克隆抗體ELISA法方法 環(huán)狀沉淀 免疫擴(kuò)散 酶標(biāo)抗體單向擴(kuò)散雙向擴(kuò)散三）生化檢驗(yàn)1、 LDHX帶檢測 LDH1

15、LDH2 LDH3 LDHX LDH4 LDH5 m w2、GPDAP （甘氨酰脯氨酰二肽基氨肽酶）1）GPDAP活性； 精液4171Iu/L平均。 陰道液、初乳、血清、唾液、 尿液等 100 Iu/L2）電泳區(qū)帶精液陰道液初乳血清 五、血型測定 ABO血型 酶型 DNA一）ABO血型測定 中和實(shí)驗(yàn) ELISA法二）酶型蛋白型測定 PGM1 Fu GLO1 G6PD AK PePA ORM1 Gc Gm Km DIA3 r GGT精液Fu等電聚焦分型 1-1 2-1 2-2精斑ORM1等電聚焦分型 1-1 2-1 2-2 精斑DIA3電泳分型 1-1 2-1 2-2精斑r-GGT電泳分型 1-

16、1 2-1 2-1三）DNA分型 混合斑（精子、陰道上皮細(xì)胞 SDS、蛋白酶K完整精子 DNA（陰道上皮細(xì)胞） DDT二次消化 SDS、蛋白酶DNA（精子）三 顯微分光鏡檢查1 原理：有色物質(zhì)能吸收一定波長的光，當(dāng)日光通過有色 物質(zhì)時(shí)，再經(jīng)過分光鏡時(shí)，因其中某些波長的光 被吸收，便會在光譜上相應(yīng)波長區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)黑色 吸收線。血紅蛋白及其衍生物均系有色物質(zhì)，具 很強(qiáng)的選擇性吸收光線的性質(zhì)，再分光鏡下檢查 是否有特定的吸收線，可確定是否是血痕 。2 方法 分泌物獲得檢材獲得檢材中細(xì)胞中細(xì)胞經(jīng)物理經(jīng)物理化學(xué)作化學(xué)作用釋放用釋放DNADNA經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)操作及經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)操作及儀器分析得到分型結(jié)果儀器分析得到分型結(jié)果應(yīng) 用應(yīng) 用 P C RP C R反應(yīng)的對反應(yīng)的對D N AD N A 進(jìn) 行進(jìn) 行幾何級數(shù)幾何級數(shù)放大放大統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算得出結(jié)論得出結(jié)論 三、精液檢驗(yàn) 一般性狀 乳白色，粘稠狀液體, PH7.2PH7.28.98.9 比重：比重：1.0211.0211.0401.040，滲透壓：，滲透壓：0.550.550.580.58 數(shù)量數(shù)量 2-2.5 ml/2-2.5 ml/次，次，1-1.5 1-1.5 億個(gè)億個(gè)/ml/ml，總數(shù)