第二章連接酶及其他(二)

1、第二節(jié)第二節(jié) DNADNA連接酶連接酶一、一、DNADNA連接酶的基本性質(zhì)連接酶的基本性質(zhì)1.1.修復(fù)雙鏈修復(fù)雙鏈DNADNA上切口處的磷酸二酯鍵上切口處的磷酸二酯鍵2.2.修復(fù)與修復(fù)與RNARNA鏈結(jié)合的鏈結(jié)合的DNADNA鏈上鏈上切切口處的磷酸口處的磷酸 二酯鍵二酯鍵一、一、DNADNA連接酶的基本性質(zhì)連接酶的基本性質(zhì)一、一、DNADNA連接酶的基本性質(zhì)連接酶的基本性質(zhì)3.3.連接多個平頭雙鏈連接多個平頭雙鏈DNADNA分子：分子：注意注意：（1 1）DNADNA連接酶連接酶只能只能連接相鄰核苷酸之間的連接相鄰核苷酸之間的切口切口 （nicknick）；（2 2）如果是缺少一個或幾個核苷酸

2、的）如果是缺少一個或幾個核苷酸的裂口裂口 （gapgap），DNADNA連接酶是連接酶是無法無法連接的；連接的；（3 3）DNADNA連接酶不能連接兩條單鏈連接酶不能連接兩條單鏈DNADNA分子或分子或 環(huán)化的單鏈環(huán)化的單鏈DNADNA分子，被連接的分子，被連接的DNADNA鏈必鏈必須須 是雙螺旋是雙螺旋DNADNA分子的一部分；分子的一部分；（4 4）DNADNA連接酶催化的連接反應(yīng)是需要能量連接酶催化的連接反應(yīng)是需要能量 的：在大腸桿菌或其他細(xì)菌中，利用的：在大腸桿菌或其他細(xì)菌中，利用NAD+NAD+ （煙酰胺腺嘌呤二核苷酸），在動物細(xì)胞（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸），在動物細(xì)胞 中及噬菌體中，

3、利用中及噬菌體中，利用ATPATP（腺苷三磷酸（腺苷三磷酸）。）。注意：注意： T4噬菌體噬菌體DNA連接酶連接酶 大腸桿菌大腸桿菌DNA連接酶連接酶 T4噬菌體噬菌體RNA連接酶連接酶二、二、DNADNA連接酶的種類連接酶的種類 T4T4噬菌體噬菌體DNADNA連接酶連接酶 該酶最早是從該酶最早是從T4噬菌體感染的大腸桿菌中提噬菌體感染的大腸桿菌中提取的，是取的，是T4噬菌體基因噬菌體基因30編碼的產(chǎn)物，分子量編碼的產(chǎn)物，分子量為為68ku，需要，需要ATP作為輔助因子。作為輔助因子。兩個帶有互補(bǔ)粘性末端的雙鏈兩個帶有互補(bǔ)粘性末端的雙鏈DNA分子分子一條帶有切口的雙鏈一條帶有切口的雙鏈DNA

4、分子分子兩個帶有平頭末端的雙鏈兩個帶有平頭末端的雙鏈DNA分子分子DNA-RNA雜合體分子中切口雜合體分子中切口該該酶酶可可連連接接 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA連接酶連接酶 該酶是從正常的大腸桿菌中提取的，由大該酶是從正常的大腸桿菌中提取的，由大腸桿菌基因組中腸桿菌基因組中l(wèi)ig基因編碼，分子量為基因編碼，分子量為75ku，需要需要NAD+作為輔助因子。作為輔助因子。 具有同源互補(bǔ)粘性末端的不同具有同源互補(bǔ)粘性末端的不同DNA分子分子 一條帶有切口的雙鏈一條帶有切口的雙鏈DNA分子分子該酶可連接該酶可連接但但, ,該酶幾乎不能催化兩個平頭末端該酶幾乎不能催化兩個平頭末端DNADNA分子的連接

5、分子的連接T4噬菌體噬菌體DNA連接酶連接酶 該酶在該酶在DNA體外重組中體外重組中比比大腸桿大腸桿菌菌DNA連接酶連接酶應(yīng)用應(yīng)用廣泛廣泛(既能連接粘既能連接粘性末端性末端,也能連接平頭末端也能連接平頭末端).兩兩種種酶酶各各自自的的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)大腸桿菌大腸桿菌DNADNA連接酶連接酶: : 該酶的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化細(xì)菌后該酶的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化細(xì)菌后, ,假陽假陽性背景低性背景低( (由于它對由于它對DNADNA末端的要求比末端的要求比較嚴(yán)格較嚴(yán)格-互補(bǔ)粘性末端互補(bǔ)粘性末端).).52 T4T4噬菌體噬菌體RNARNA連接酶連接酶 T4噬菌體噬菌體RNA連接酶由連接酶由T4噬菌體基因噬菌體基因63編編碼碼,

6、需要需要ATP作為輔助因子作為輔助因子. 連接反應(yīng)連接反應(yīng): 主要用途主要用途: : 對對RNARNA進(jìn)行進(jìn)行3 3 末端標(biāo)記末端標(biāo)記, ,即將即將3232P P標(biāo)記的標(biāo)記的3 3 ,5,5 - -二磷酸單核苷加到二磷酸單核苷加到RNARNA的的3 3 端端. . 該酶可催化單鏈該酶可催化單鏈DNADNA或或RNARNA的的5 5 磷酸與相鄰磷酸與相鄰的的3 3 羥基、單核苷酸共價連接羥基、單核苷酸共價連接. .53第三節(jié)第三節(jié) DNADNA聚合酶聚合酶一、一、DNADNA聚合酶的分類聚合酶的分類根據(jù)根據(jù)DNA聚合酶所使用模板的不同聚合酶所使用模板的不同,可分為可分為:依賴于依賴于DNADNA

7、的的DNADNA聚合酶聚合酶依賴于依賴于RNARNA的的DNADNA聚合酶聚合酶大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶KlenowKlenow大片段酶大片段酶T4T4噬菌體噬菌體 DNADNA聚合酶聚合酶T7T7噬菌體噬菌體 DNADNA聚合酶聚合酶TaqTaq DNA DNA聚合酶聚合酶逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶55 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶1.DNA1.DNA聚合酶的分類聚合酶的分類 目前目前, ,從大腸桿菌中已分離出從大腸桿菌中已分離出3 3種種DNADNA聚聚合酶合酶, ,分別為分別為: :DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA聚合酶聚合酶 : : 與與D

8、NADNA復(fù)制有關(guān)復(fù)制有關(guān)主要參與主要參與DNA的修復(fù)的修復(fù)分子克隆中常用分子克隆中常用DNADNA聚合酶聚合酶2.2.大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶的性質(zhì)的性質(zhì) 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶是是KronbergKronberg等等19561956年年發(fā)現(xiàn)的第一個發(fā)現(xiàn)的第一個DNADNA聚合酶聚合酶, ,故也稱為故也稱為KronbergKronberg酶酶. . 5 3 DNA聚合酶活性聚合酶活性 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶(DNApol) )發(fā)揮聚合發(fā)揮聚合酶活性需要酶活性需要: :DNADNA模板、引物、模板、引

9、物、dNTP和和Mg2+2+。572.2.大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶的性質(zhì)的性質(zhì) 3 5 核酸外切酶活性核酸外切酶活性 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶 該活性識別單鏈，能將復(fù)制過程中該活性識別單鏈，能將復(fù)制過程中3 3 端的端的錯配堿基切除，從而保證錯配堿基切除，從而保證DNADNA復(fù)制的高保真度，復(fù)制的高保真度，也稱為校對功能。也稱為校對功能。DNADNApolpol5 5 3 3 5 5 58 5 3 核酸外切酶活性核酸外切酶活性 大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶2.2.大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶的性質(zhì)的性質(zhì)535355335355335533

10、5 -P53535353553355335 -P5 3 外切核酸酶活性的水解作用有外切核酸酶活性的水解作用有3 3個特征個特征： 待切除的核酸分子待切除的核酸分子必須必須具有具有5 5 端磷酸基團(tuán)端磷酸基團(tuán)。 核苷酸分子被切除核苷酸分子被切除前前位于位于已配對已配對的的DNADNA雙螺雙螺 旋區(qū)段上。旋區(qū)段上。 被切除的核苷酸既可以是被切除的核苷酸既可以是DNA也可以是也可以是RNA. 5 3 核酸外切酶活性核酸外切酶活性2.2.大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶的性質(zhì)的性質(zhì)2.2.大腸桿菌大腸桿菌DNADNA聚合酶聚合酶的用途的用途 合成合成ds-cDNAds-cDNA第二鏈（第二鏈（

11、Double stranded)Double stranded) 雜交探針的制備雜交探針的制備 DNADNA序列分析序列分析在在DNA聚合反應(yīng)體系中，如果加入聚合反應(yīng)體系中，如果加入放射性核素放射性核素標(biāo)記標(biāo)記的的核苷酸核苷酸，則這些標(biāo)記的核苷酸將取代原，則這些標(biāo)記的核苷酸將取代原來的核苷酸殘基，產(chǎn)生來的核苷酸殘基，產(chǎn)生帶標(biāo)記的帶標(biāo)記的DNA分子分子，這，這就是所謂的就是所謂的DNA分子雜交探針分子雜交探針( (書書P36P36）。雜交探針的制備過程雜交探針的制備過程: :3 5 5 3 3 5 5 3 3 5 5 3 3 * * * * * * * * * *5 5 3 * * * * *D

12、NAaseE.Coli DNA pol*dNTP圖圖切切口口平平移移反反應(yīng)應(yīng)原原理理62 Klenow 片段片段1 1. Klenow 片段的由來片段的由來E.coli DNA pol 蛋白酶蛋白酶較小片段較小片段較大片段較大片段(Klenow片段片段)5 3 3 5 聚聚 外外合合 切切酶酶 酶酶活活 活活性性 性性性質(zhì)性質(zhì)5 3 外切酶活性外切酶活性1. Klenow 片段的由來片段的由來 通常所用的通常所用的Klenow片段片段是由是由枯草枯草桿菌蛋白酶桿菌蛋白酶切割切割完整完整的的DNA聚合酶片聚合酶片段段而成而成, ,或是或是經(jīng)過經(jīng)過克隆克隆產(chǎn)生的一條多肽產(chǎn)生的一條多肽鏈。鏈。 Kl

13、enow 片段片段 Klenow 片段片段2 2. Klenow 片段的用途片段的用途l 填補(bǔ)由填補(bǔ)由DNADNA限制酶反應(yīng)產(chǎn)生的限制酶反應(yīng)產(chǎn)生的凹陷凹陷3 3 末端末端。l 用用 3232PdNTPPdNTP填補(bǔ)凹陷的填補(bǔ)凹陷的3 3 末端，即末端，即DNADNA分分 子的子的末端標(biāo)記（書末端標(biāo)記（書P32P32）。l 在在cDNAcDNA克隆出來后，合成克隆出來后，合成cDNAcDNA第二條鏈第二條鏈。l 用用SangerSanger雙脫氧鏈末端終止法進(jìn)行雙脫氧鏈末端終止法進(jìn)行DNADNA序列分序列分 析析等。等。65 T4DNA聚合酶聚合酶1 1. T4 DNA聚合酶的性質(zhì)聚合酶的性質(zhì)T

14、4DNA聚合酶的外切酶活性聚合酶的外切酶活性比比Klenow片段片段高高1001000倍倍與與Klenow片段片段不同不同具有具有5 5 3 3 聚合酶活性聚合酶活性具有具有3 3 5 5 外切酶活性外切酶活性與與Klenow片段片段相同相同不具有不具有5 5 3 3 外切酶外切酶活性活性66 T4DNA聚合酶聚合酶2 2. T4DNA聚合酶的用途聚合酶的用途 填補(bǔ)或標(biāo)記由限制酶切割填補(bǔ)或標(biāo)記由限制酶切割DNADNA后產(chǎn)生的凹后產(chǎn)生的凹陷陷3 3 末端，標(biāo)記反應(yīng)時需要高濃度的末端，標(biāo)記反應(yīng)時需要高濃度的dNTP，以保證聚合反應(yīng)（填補(bǔ)）大于以保證聚合反應(yīng)（填補(bǔ)）大于3 3 5 5 核酸外切核酸外

15、切酶活性。酶活性。 進(jìn)行進(jìn)行3 3 突出末端的突出末端的DNADNA末端標(biāo)記。末端標(biāo)記。67 T4DNA聚合酶聚合酶2 2. T4DNA聚合酶的用途聚合酶的用途 標(biāo)記用作雜交探針的標(biāo)記用作雜交探針的DNADNA片段。片段。 由由3 3 5 5 核酸外切酶活性部分酶切雙鏈核酸外切酶活性部分酶切雙鏈DNA，得，得到凹缺到凹缺3 3 末端用末端用 32P dNTP填補(bǔ)（取代合成）。填補(bǔ)（取代合成）。 將雙鏈將雙鏈DNADNA的末端轉(zhuǎn)化成平頭末端。的末端轉(zhuǎn)化成平頭末端。 利用利用T4DNAT4DNA聚合酶的聚合酶的3 3 5 5 核酸外切酶活性從雙核酸外切酶活性從雙鏈鏈DNADNA上切除突出上切除突出

16、3 3 末端，在高濃度末端，在高濃度dNTPdNTP中模板中模板上雙鏈區(qū)的降解與合成達(dá)到平衡。上雙鏈區(qū)的降解與合成達(dá)到平衡。68 Taq DNA聚合酶聚合酶 1. 1.來源來源 Taq DNA聚合酶最初是從聚合酶最初是從耐熱細(xì)菌耐熱細(xì)菌Thermusaqraticus中純化而得，因此是一中純化而得，因此是一種單亞基種單亞基耐熱耐熱的的依賴依賴DNA的的DNA聚合酶聚合酶，現(xiàn)已廣泛用于基因工程的操作中?，F(xiàn)已廣泛用于基因工程的操作中。69 Taq DNA聚合酶聚合酶70 2. 2.性質(zhì)性質(zhì) 具有具有5 3 聚合酶活性聚合酶活性 最適反應(yīng)溫度為最適反應(yīng)溫度為7580（據(jù)目的序列不（據(jù)目的序列不 同而

17、不同）同而不同） Taq DNA聚合酶在聚合酶在60時其聚合酶活性時其聚合酶活性下下降降2 2倍倍，在，在37時時下降下降1010倍倍。 Taq DNA聚合酶聚合酶 3. 3.用途用途 Taq DNA聚合酶聚合酶主要用于主要用于聚合酶鏈?zhǔn)椒淳酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)（PCRPCR），在體外擴(kuò)增特定的），在體外擴(kuò)增特定的DNADNA片段，片段，DNADNA或單鏈或單鏈cDNA都可作為起始模板。都可作為起始模板。但在使用中應(yīng)注意：但在使用中應(yīng)注意： Taq DNA聚合酶需要聚合酶需要Mg2+。磷酸緩沖液磷酸緩沖液抑制抑制該酶活性，應(yīng)該酶活性，應(yīng)避免避免使用。使用。71 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶一、一般知識一、一般知

18、識 依賴于依賴于RNA的的DNA聚合酶聚合酶或或RNA指導(dǎo)指導(dǎo)的的DNA聚合酶聚合酶。分子量約為。分子量約為1616萬，由分萬，由分子量分別為子量分別為6.26.2萬和萬和9.59.5萬的兩個結(jié)構(gòu)相關(guān)萬的兩個結(jié)構(gòu)相關(guān)的亞單位組成。的亞單位組成。72 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶二、來源二、來源 逆轉(zhuǎn)錄酶最主要的逆轉(zhuǎn)錄酶最主要的來源來源是是鳥類成髓細(xì)胞鳥類成髓細(xì)胞性白血病病毒性白血病病毒（AMV）。）。三、特性三、特性AMVAMV逆轉(zhuǎn)錄酶的活性逆轉(zhuǎn)錄酶的活性首先首先表現(xiàn)為表現(xiàn)為DNADNA聚合酶的活性聚合酶的活性. . 模板模板既可以是既可以是DNADNA, ,也可以是也可以是RNARNA. .在以在以RN

19、ARNA為為模板是模板是稱為稱為RNARNA指導(dǎo)的指導(dǎo)的DNADNA聚合酶活性聚合酶活性, ,而以而以DNADNA為模板是則為模板是則叫做叫做DNADNA為指導(dǎo)的為指導(dǎo)的DNADNA聚合酶聚合酶. .73 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶三、特性三、特性 AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的活性逆轉(zhuǎn)錄酶的活性其次其次表現(xiàn)為表現(xiàn)為RNaseH活性活性。 此酶可以特異性此酶可以特異性降解降解RNA-DNA雜種雙鏈雜種雙鏈中的中的RNA部分。部分。 另外，還具有另外，還具有DNA內(nèi)切酶活性內(nèi)切酶活性和和核酸結(jié)合核酸結(jié)合活性?；钚?。74 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶四、用途四、用途 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶在基因工程中可用于在基因工程中可用于cDNA的的合

20、成合成。即可將任何真核基因的。即可將任何真核基因的mRNA經(jīng)經(jīng)反轉(zhuǎn)反轉(zhuǎn)錄錄形成形成cDNA拷貝拷貝, ,然后構(gòu)建然后構(gòu)建克隆克隆, ,大量大量擴(kuò)增擴(kuò)增, ,并并表達(dá)表達(dá)這種基因這種基因, ,從而為真核基因的研究與其從而為真核基因的研究與其核遺傳工程提供了一項必不可少的手段。核遺傳工程提供了一項必不可少的手段。75一、性質(zhì)一、性質(zhì) 末端轉(zhuǎn)移酶末端轉(zhuǎn)移酶催化催化脫氧核苷酸脫氧核苷酸添加到添加到DNA分分子的子的3 3 -OH-OH末端末端。 這很像這很像DNADNA聚合酶通過聚合酶通過5 5 3 聚合聚合5 -脫氧核脫氧核苷三磷酸合成一條苷三磷酸合成一條DNA鏈。所鏈。所不同不同的是末端的是末端轉(zhuǎn)

21、移酶轉(zhuǎn)移酶不需要不需要模板模板。第四節(jié)第四節(jié) 末端轉(zhuǎn)移酶末端轉(zhuǎn)移酶76二、用途二、用途主要用途是給主要用途是給載體載體和和外源外源DNADNA分別加上分別加上互補(bǔ)互補(bǔ)的的同聚物尾巴，以便二者在同聚物尾巴，以便二者在體外體外連接。進(jìn)行連接。進(jìn)行DNA3DNA3 -OH末端標(biāo)記。末端標(biāo)記。 標(biāo)記物可以是標(biāo)記物可以是放射性放射性的，的，如如-32P-dNTP, ,也可以也可以是非放射性是非放射性的的, ,如如生物素生物素-11-dUTP（生物素和親和素）生物素和親和素）, ,它們可用于它們可用于DNA序序列分析列分析、DNase足跡分析足跡分析、分子雜交等實(shí)驗分子雜交等實(shí)驗中中。77二、用途二、用途

22、 進(jìn)行同聚物接尾進(jìn)行同聚物接尾 用末端轉(zhuǎn)移酶給用末端轉(zhuǎn)移酶給一群一群DNADNA分子分子3 3 -OH-OH末端接末端接上上oligooligo（dAdA）或或（dGdG）, ,給給另一群另一群DNADNA分子分子3 3 - -OHOH末端接上末端接上oligooligo（dTdT）或或（dCdC）, ,混合混合這兩群這兩群分子分子, ,就能使末端轉(zhuǎn)移酶接上的同聚物尾部就能使末端轉(zhuǎn)移酶接上的同聚物尾部退火退火形成形成環(huán)狀分子環(huán)狀分子。這種方法稱為。這種方法稱為同聚物接尾法同聚物接尾法。78第五節(jié)第五節(jié) 核酸酶核酸酶 核酸酶是一類能降解核酸的水解酶，它在核酸酶是一類能降解核酸的水解酶，它在基因工

23、程操作中應(yīng)用非常廣泛。根據(jù)核酸酶對基因工程操作中應(yīng)用非常廣泛。根據(jù)核酸酶對底物作用的專一性，可將其分為三類：底物作用的專一性，可將其分為三類：l 核糖核酸酶（核糖核酸酶（RNase）：只作用于只作用于RNA。l 脫氧核糖核酸酶（脫氧核糖核酸酶（DNase）：只作用于只作用于DNADNA。l 核酸酶（核酸酶（nuclease）：既作用于既作用于DNA，又，又 作用于作用于RNA。79一、核酸外切酶一、核酸外切酶（exo ） exo是一種的是一種的單鏈核酸外切酶單鏈核酸外切酶，它能夠，它能夠從從5 5 末端末端或或3 3 末端末端降解降解DNADNA分子，產(chǎn)生出寡核苷分子，產(chǎn)生出寡核苷酸短片段，且

24、不需要酸短片段，且不需要MgMg2+2+的參與。的參與。二、核酸外切酶二、核酸外切酶（exo ） 該酶可以從該酶可以從雙鏈雙鏈DNA的的3 3 -OH-OH末端末端起逐一起逐一切去切去5 5 單核酸單核酸, ,其作用底物為含切口或缺口的其作用底物為含切口或缺口的線性雙鏈線性雙鏈DNADNA和和開環(huán)開環(huán)DNADNA。作用后在雙鏈。作用后在雙鏈DNA上形成一條長的上形成一條長的單鏈區(qū)單鏈區(qū), ,這種外切酶這種外切酶不能不能降解降解單鏈單鏈DNA和帶和帶突出突出3 3 末端的雙鏈末端的雙鏈DNA。81二、核酸外切酶二、核酸外切酶（exo ）三、核酸酶三、核酸酶S1 1.1.基本知識基本知識 核酸酶核

25、酸酶S1S1是從米粉狀曲菌（是從米粉狀曲菌（Aspergillus Aspergillus oryzaeoryzae）提取帶的一種金屬蛋白，分子量）提取帶的一種金屬蛋白，分子量32 00032 000（32 ku32 ku），相對耐熱，催化反應(yīng)通常），相對耐熱，催化反應(yīng)通常需要需要Zn2+和酸性條件，產(chǎn)生帶和酸性條件，產(chǎn)生帶5 5 磷酸的寡核苷磷酸的寡核苷酸。酸。2.2.特性特性 降解降解單鏈單鏈DNADNA或或RNARNA, ,包括雙鏈分子中的單鏈區(qū)包括雙鏈分子中的單鏈區(qū)域域( (如如發(fā)夾結(jié)構(gòu)發(fā)夾結(jié)構(gòu)),),這種單鏈區(qū)域甚至可以小到這種單鏈區(qū)域甚至可以小到1 1個個堿基對堿基對的程度。的程度。 降解單鏈降解單鏈DNADNA的速度比的速度比RNARNA的速度的速度快快1010倍倍。 降解發(fā)應(yīng)的方式為降解發(fā)應(yīng)的方式為內(nèi)切內(nèi)切和和外切外切。 降解發(fā)應(yīng)的降解發(fā)應(yīng)的最適最適pH為為4.04.04.54.5。 酶量酶量過大過大時，伴有時，伴有雙鏈雙鏈核酸的降解，該酶的雙核酸的降解，該酶的雙鏈降解活性僅為單鏈的鏈降解活性僅為單鏈的1/75 0001/75 000。核酸酶核酸酶S1的基本反應(yīng)的基本反應(yīng)：內(nèi)切單鏈內(nèi)切單鏈DNA或或RNA核酸酶核酸酶S1的基本反應(yīng)的基本反應(yīng)：內(nèi)切帶切口或缺口的雙鏈內(nèi)切帶切口或缺口的雙鏈DNA3.3.用途（用途（在在DNADNA上定位上定位RNARN