TP63基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究

1、 本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）TP63基因多態(tài)性與肺癌易感性的研究學(xué) 院 廣東藥學(xué)院 專 業(yè) 預(yù)防醫(yī)學(xué) 年 級(jí) 2009級(jí) 學(xué)生姓名 黃科明 學(xué) 號(hào) 0902501261 指導(dǎo)教師 劉麗 2013年 1 月 誠(chéng) 信 聲 明我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。我承諾，論文（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者（簽名）： 年 月 日TP63基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究【摘要】目的 探討T

2、P63基因rs4488809位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系。方法：對(duì)525例肺癌患者與1699例健康正常者采用病例對(duì)照研究。結(jié)果：(1) 2檢驗(yàn)顯示各種基因型在肺癌組和對(duì)照組中分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2 =0.455，P=0.797)，兩組人群等位基因頻率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2 =0.271，P=0.60) (2)以TT基因型為參照，在調(diào)整性別、年齡和吸煙情況后，經(jīng)logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)CC基因型與肺癌發(fā)病無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(校正OR=0.90，95%CI 0.681.19，P=0.44)；攜帶CT基因型與攜帶CC基因型者聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)（CT+CC）基因型與肺癌發(fā)病也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（校正OR

3、=0.98，95%CI 0.761.21，P=0.72）。(3)以突變基因型（CT+CC）而又不吸煙者為參照，在調(diào)整性別、年齡后，經(jīng)logistic回歸分析,(CC+CT)基因型并吸煙者OR=1.16(95%CI 0.891.50)，野生純合基因型TT而不吸煙者OR=1.08(95%CI 0.781.51)，野生純合基因型TT并吸煙者OR=1.13(95%CI 0.801.58)，均沒(méi)有顯著增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)論：TP63 rs4488809基因位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌易感性無(wú)相關(guān)性，且基因位點(diǎn)多態(tài)性與吸煙不存在交互作用?！娟P(guān)鍵詞】TP63；基因多態(tài)性；肺癌易感性The study on the Po

4、lymorphism of TP63 Gene RS4488809and susceptibility to lung cancerAbstract Objective: To investigate the polymorphism of the TP63 gene rs4488809 and susceptibility to lung cancer. Methods: A case-control study was conducted included 525 lung cancer patients and 1699 control subjects. Results: (1) Th

5、e Chi-square tests showed there was no significant difference between the two groups(P>0.05).(2) For the TP63-rs4488809C/T polymorphism，individuals with CT and CC genotype were not correlated with lung cancer compared with T/T genotype after stratification analysis according to smoking.(3) After

6、stratification analysis according to smoking, it revealed that it was not associated significantly increased risk in smokers. Conclusion: TP63 gene rs4488809 polymorphism has no association with lung cancer.Keywords TP63；single nucleotide polymorphism；lung cancer susceptibility1 前言肺癌是中國(guó)最常見的惡性腫瘤，是病死率

7、最高的惡性腫瘤之一，患病率和發(fā)病率隨著環(huán)境污染及吸煙率的上升在世界上大多數(shù)國(guó)家逐年上升1。根據(jù)全國(guó)腫瘤防治辦公室的統(tǒng)計(jì),肺癌已居我國(guó)男性惡性腫瘤發(fā)生率和死亡率的第一位,女性惡性腫瘤發(fā)生率的第二位和死亡率的第一位2。雖然科技的飛速發(fā)展極大地改變了醫(yī)學(xué)的面貌,但肺癌的診斷和治療依然不盡如人意,肺癌的發(fā)病率和死亡率較50年前增加了數(shù)十倍,且肺癌總的治愈率水平仍然低于15%。目前因?yàn)槿狈π兄行У姆伟┖Y查和早期診斷技術(shù)和方法,絕大多數(shù)患者就診時(shí)已屬晚期,失去了外科治療的指征。因此提高肺癌治療效果的關(guān)鍵在于注重肺癌的一級(jí)預(yù)防和早期診斷,篩查監(jiān)測(cè)肺癌易感人群。肺癌的發(fā)生是一個(gè)多因素參與、多基因調(diào)控、多階段

8、發(fā)生的復(fù)雜過(guò)程。研究表明影響肺癌的危險(xiǎn)因素有吸煙、環(huán)境污染、職業(yè)、病毒感染、遺傳背景、營(yíng)養(yǎng)、微量元素缺乏等。其中吸煙、環(huán)境污染已被公認(rèn)為是肺癌的最重要的危險(xiǎn)因素。然而,肺癌患者80%90%與吸煙有關(guān),但只有不到20%的吸煙者患肺癌3,因此,個(gè)體患肺癌并非單純?nèi)Q于吸煙或環(huán)境污染,主要取決于外在因素和基因,即基因與環(huán)境之間的相互作用，也就是說(shuō)，肺癌在很大程度上還取決于個(gè)體的遺傳易感性4。TP63是近年發(fā)現(xiàn)的TP53家族成員之一5，TP63基因位于染色體3q2q29區(qū)，包含15個(gè)外顯子和2個(gè)啟動(dòng)子(啟動(dòng)子分別位于外顯子1和內(nèi)含子3)。TP63在細(xì)胞中存在有多種異構(gòu)體，包括至少6種主要的TP63蛋白

9、的異構(gòu)體。由于TP63具有2個(gè)不同啟動(dòng)子和多種內(nèi)含子剪接方式，導(dǎo)致TP63基因編碼產(chǎn)生不同亞型的TP63蛋白，故這些異構(gòu)體可分成兩大類：從外顯子1開始轉(zhuǎn)錄的具有反式激活區(qū)的異構(gòu)體稱為TA異構(gòu)體；從另一個(gè)位于外顯子3和4之問(wèn)的外顯子3開始轉(zhuǎn)錄的沒(méi)有反式激活區(qū)的異構(gòu)體稱為N異構(gòu)體。N異構(gòu)體由于3端剪切方式不同而產(chǎn)生3種不同C末端的異構(gòu)體，因此再分、和亞型，其中異構(gòu)體為全長(zhǎng)的異構(gòu)體，異構(gòu)體為剪切掉外顯子13的異構(gòu)體，異構(gòu)體為剪切掉外顯子1114的異構(gòu)體6。由上游啟動(dòng)子引發(fā)的轉(zhuǎn)錄，可產(chǎn)生具有轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(TA)的全長(zhǎng)TP63同源異構(gòu)體TAp63、TAp63、TAp63,由下游啟動(dòng)子開始的轉(zhuǎn)錄則產(chǎn)生缺失轉(zhuǎn)

10、錄激活區(qū)的N端被截短的異構(gòu)體Np63、Np63和Np63。較長(zhǎng)TA異構(gòu)體具有和TP53相似的功能，起著腫瘤抑制因子的作用，而較短N(yùn)異構(gòu)體因其缺少了氨基端的片斷，從而丟失了抑制生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄激活功能，反而轉(zhuǎn)變成為促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)及存活的轉(zhuǎn)錄因子7，8，9。細(xì)胞通過(guò)調(diào)節(jié)產(chǎn)生不同比例的異構(gòu)體，在細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的過(guò)程中進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的調(diào)節(jié)。這些異構(gòu)群分子在生物的發(fā)育、發(fā)生學(xué)中起著重要的作用,在細(xì)胞中TP63的TA異構(gòu)體能抑制細(xì)胞的無(wú)限增殖，而N異構(gòu)體會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活和遷移，并可以拮抗TP53蛋白和TA異構(gòu)體的功能，解除其抑制細(xì)胞生長(zhǎng)及促進(jìn)細(xì)胞調(diào)亡的作用。通過(guò)同樣的機(jī)制，N異構(gòu)體會(huì)起到促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異常增殖

11、、存活和遷移作用10，11。本研究所探討的SNP位于TP63基因的第l內(nèi)含子，正是編碼TAp63異構(gòu)體的區(qū)域，所以它可能在TP63基因表達(dá)過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。2材料與方法2.1研究對(duì)象 本研究包括肺癌患者525例和正常對(duì)照1669例。525例肺癌患者來(lái)自廣藥附屬醫(yī)院2009年到2013年1月間入院患者，其中男性360例（68.6%），女性165例（31.4%）。肺癌患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床影像學(xué)和病理學(xué)檢查確診為肺癌，無(wú)性別、年齡、癌癥家族史和臨床分期的限制。排除標(biāo)準(zhǔn)包括曾經(jīng)患有其他癌癥疾病史以及未知的放、化療病史者。1699例健康者則是與病例同時(shí)期募集于廣東藥學(xué)院附屬醫(yī)院的健康體檢人群，

12、其中男性1380例（82.7%），女性289例（17.3%）。正常健康者的納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)傳染病史、慢性病史、腫瘤病史等。2.2 資料的收集對(duì)病例和對(duì)照研究對(duì)象采用相同的調(diào)查表收集以下信息：包括性別、年齡等人口學(xué)特征，生活方式（是否吸煙等）、既往疾病史、肺癌家族疾病史等。吸煙情況按以下標(biāo)準(zhǔn)：每日吸煙量超過(guò)1支并且持續(xù)半年以上或者戒煙少于1年者定義為吸煙者；每天吸煙少于1支、且短于1年者定義為非吸煙者；戒煙超過(guò)1年者定義為曾經(jīng)吸煙者。2.3 血樣的采集在知情同意的情況下采集每位研究對(duì)象外周靜脈抗凝血1ml。病例血樣采集在接受腫瘤放化療之前進(jìn)行。抗凝血采集完畢后放入負(fù)20度冰箱保存。2.4 基因組DN

13、A提取2.4.1試劑：天根試劑盒(CL，F(xiàn)G，PK，TB)，異丙醇，70乙醇(現(xiàn)配)2.4.2儀器：Eppendorf Centrifuge 5415 D 常溫離心機(jī)國(guó)華HH-42快速恒溫?cái)?shù)顯水箱Eppendorf移液器(1ml、 100ul、 10 ul)及相應(yīng)槍頭NANO DROP 1000 Spectrophotmeter微量紫外分光光度計(jì)Eppendorf Concentrator 5301 快速反應(yīng)濃縮儀吸水紙EP管(2.0ml、1.5ml)廢液缸手套記號(hào)筆2.4.3實(shí)驗(yàn)步驟血樣采用天根試劑盒(DP319-02)進(jìn)行抽提，該試劑盒抽提DNA原理為溶液鹽析法，試劑盒內(nèi)包括細(xì)胞裂解液CL

14、 2×250ml；緩沖液FG 120ml；蛋白酶K 1ml；緩沖液TB 60ml，基本操作步驟如下：圖1 鹽析法提取DNA流程圖(1) 將保存于-20。冰箱中的抗凝血取出，37。C水浴融解(2) 細(xì)胞裂解：1ml抗凝血加入1ml細(xì)胞裂解液，顛倒混勻100次后12000rpm/ref離心2分鐘，棄上清；再加入1.5ml細(xì)胞裂解液，快速顛倒混勻至無(wú)明顯細(xì)胞團(tuán)塊后12000rpm/ref離心2分鐘，棄上清；(3) 蛋白酶消化：配制緩沖液FG和蛋白酶K混合液(兩者比例為100:1;見表1)；加入500mlFG和蛋白酶K混合液，立即渦旋混勻至溶液無(wú)團(tuán)塊；65°C水浴25分鐘，期間顛倒

15、混勻數(shù)次；(4) 異丙醇沉淀(操作輕柔)：加入500ml異丙醇，緩慢顛倒混勻至出現(xiàn)絲狀基因組DNA；12000rpm/ref離心5分鐘，棄上清；(5) 12000rpm/ref離心2分鐘，棄上清。再次加入500ul 70乙醇，顛倒50次，離心 12000×2min。倒棄上清，將離心管倒置在干凈吸水紙上停留至少5分鐘。(6) DNA溶解：空氣干燥DNA沉淀至所有液體揮發(fā)干凈；加入200ul緩沖液TB，確保DNA漂浮于TB內(nèi)。然后55°C水浴溶解DNA4小時(shí)后置于4°C冰箱過(guò)夜以繼續(xù)溶解；表1 不同體積血樣所需各種緩沖液用量(l)緩沖液血液體積(l)100300100

16、0300050001000020000細(xì)胞裂解液 CL25075025007500125002500050000緩沖液 FG5015050015002500500010000蛋白酶 K0.51.55152550100100%異丙醇501505001500250050001000070%乙醇5015050015002500500010000緩沖液TB10020020030050010001000FG和蛋白酶K混合液1030100300500100010002.5 SNP分型2.5.1 試劑TaqMan® Universal PCR Master Mix (2X)雙蒸水HEXFAMTaq

17、Man 引物TaqMan 探針TaqMan SNP Genotyping Assays2.5.2儀器NanoDrop 2000Eppendorf冷凍臺(tái)式離心機(jī)低速離心ABI 7900HTEppendorf移液器(1ml、 100ul、 10 ul)及相應(yīng)槍頭384孔板2.5.3 TaqMan探針技術(shù)基本原理TaqMan探針?lè)?，也稱為熒光定量PCR，是一種高度特異的定量PCR技術(shù)，其基本原理是利用Taq酶的53外切核酸酶活性，切斷探針，以產(chǎn)生熒光信號(hào)。因?yàn)樘结樑c模板是特異性結(jié)合，所以熒光信號(hào)的強(qiáng)弱就代表了模板的數(shù)量。在TaqMan探針?lè)ǖ亩縋CR反應(yīng)體系中，包括一對(duì)PCR引物和一條探針。探針只

18、能與模板特異性地結(jié)合，其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。探針的5端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R)，如FAM、VIC等，3端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(Quencher, Q)，如TAMRA等。當(dāng)探針完整的時(shí)候，報(bào)告基團(tuán)所發(fā)射的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收，儀器檢測(cè)不到信號(hào)。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，Taq酶在鏈延伸過(guò)程中遇到與模板結(jié)合的探針，其35外切核酸酶活性就會(huì)將探針切斷，報(bào)告基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán)，其能量不能被吸收，即產(chǎn)生熒光信號(hào)（圖2）。所以，每經(jīng)過(guò)一個(gè)PCR循環(huán)，熒光信號(hào)也和目的片段一樣，有一個(gè)同步指數(shù)增長(zhǎng)的過(guò)程。信號(hào)的強(qiáng)度就代表了模板DNA的拷貝數(shù)。圖2 TaqMan基因分型原理圖。2.5.4 TaqM

19、an基因分型步驟(1)準(zhǔn)備樣本：TaqMan基因分型DNA樣本的濃度要求為520ng/l，DNA提取完成 后使用紫外可見分光光度計(jì)(NanoDrop 2000)檢測(cè)DNA濃度，將DNA濃度稀釋至 520520ng/l。TaqMan基因分型引物和探針由上?；倒竞铣?2)配置實(shí)驗(yàn)體系：按照下表要求的實(shí)驗(yàn)體系將引物和探針稀釋。將引物和探針 混合，配成10X Assay Mix，在混合的Assay Mix中加入雙蒸水，然后加入Taq- Man® Universal PCR Master Mix (2X)，混勻。(表2)表2 實(shí)驗(yàn)體系加樣表試劑體積（ul） 雙蒸水 0.8 TaqMan&#

20、174; Universal PCR Master Mix（2X） 2.5 前向引物 TaqMan® 10X Assay Mix 0.225 后向引物 0.225 FAM 0.125 HEX 0.125 DNA模板 1.0 雙蒸水 0.8 總計(jì) 5.0(3)加樣：將混勻混合液分別加入到已經(jīng)標(biāo)記區(qū)域的384孔板中。加入稀釋好的 DNA模板。(4)離心：使用Eppendorf冷凍臺(tái)式離心機(jī)低速離心，使樣本置于384孔的底部。 貼膜，用壓膜板將膜壓平。(5)上樣：本實(shí)驗(yàn)采用ABI 7900HT進(jìn)行TaqMan基因分型，開機(jī)進(jìn)行設(shè)置和熱循環(huán)，如表3所示：表3 PCR循環(huán)設(shè)置步驟溫度（）時(shí)間（

21、分鐘） 1 50 2:00 2 95 10:00 45個(gè)循環(huán) 3 93 0:30 4 62 1:00 5 4 (6)數(shù)據(jù)讀取：機(jī)器運(yùn)行完畢后，取樣下機(jī)進(jìn)行分型數(shù)據(jù)讀取，基因分型數(shù)據(jù)采用SDS2.3讀取數(shù)據(jù)。2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 21.0軟件包對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(1)研究對(duì)象的基本人口學(xué)特征：采用雙側(cè)2檢驗(yàn)比較性別、年齡、吸煙狀況、基因型及等位基因在肺癌組、對(duì)照組的頻率分布等。(2)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)(HWE)：采用2檢驗(yàn)來(lái)分析對(duì)照組中SNP基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。 (3)SNP位點(diǎn)分析：采用非條件logistic回歸分析基因多態(tài)性

22、與肺癌易感性間的關(guān)系，以比值比OR和95%Cl可信區(qū)間表示相對(duì)危險(xiǎn)度，計(jì)算OR值及95%CI時(shí)，以性別、年齡、吸煙狀態(tài)作為協(xié)變量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)校正。(4)分層分析：肺癌的發(fā)生是由基因和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，在其發(fā)展過(guò)程中存在著基因-環(huán)境之間的交互作用。特別是吸煙這個(gè)環(huán)境因素，對(duì)于肺癌的發(fā)生尤其重要。因此，我們通過(guò)分層分析，使用傳統(tǒng)的logistic回歸模型來(lái)探索基因-環(huán)境的交互作用與肺癌的關(guān)聯(lián)。3結(jié)果3.1 肺癌組與對(duì)照組的一般情況比較 本實(shí)驗(yàn)入選對(duì)象共2194人，見表4，肺癌組(23.9%)與對(duì)照組(76.1%)在年齡、性別方面分布頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在吸煙情況方面的

23、分布頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)檢驗(yàn)，正常對(duì)照人群位點(diǎn)的基因頻率符合Hardy-Weinberg平衡定律，表明該樣本具有一定的代表性。表4 肺癌組與對(duì)照組一般情況的比較（n%）項(xiàng)目 肺癌組(n=525) 對(duì)照組(n=1669) P*年齡（歲）<6060性別男女吸煙情況有吸煙史無(wú)吸煙史241(45.90)284(54.10)360(68.57)165(31.43)240(45.71)285(54.29)602(36.07)1067(63.93)1380(82.68)289(17.32)846(50.69)823(49.31) <0.05 <0.05 0.047 * P值采用雙側(cè)卡方檢驗(yàn)

24、。3.2 SNP位點(diǎn)基因型及等位基因與肺癌的關(guān)聯(lián)性分析在TP63基因rs4488809位點(diǎn)上，肺癌組中24.38%為TT,49.90%為CT，25.72%為CC；對(duì)照組中TT、CT和CC的基因型頻率分別為24.03%、48.77%、27.20%，見表5。2檢驗(yàn)顯示各種基因型在肺癌組和對(duì)照組中分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=0.455，P=0.797)；而等位基因T在病例組與對(duì)照的頻率分別為49.33%和48.41%，等位基因C則分別為50.67%和51.59%，兩組人群等位基因頻率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=0.271，P=0.60)。表5 基因型與等位基因在肺癌組與對(duì)照組中的頻率分布基因型及等位基因肺癌

25、組n(%)對(duì)照組n(%)2 P*基因型TTCTCC等位基因TC128(24.38)262(49.90)135(25.72)518(49.33)532(50.67)401(24.03)814(48.77)454(27.20)1616(48.41)1722(51.59)0.455 0.797 0.271 0.602* P值采用雙側(cè)卡方檢驗(yàn)。3.3 TP63基因rs4488809多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系TP63基因rs4488809多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系如表6所示，以TT基因型為參照，在調(diào)整性別、年齡和吸煙情況后，經(jīng)logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)CC基因型與肺癌發(fā)病無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(校正OR=0.90

26、，95%CI 0.681.19，P=0.44)；攜帶CT基因型與攜帶CC基因型者聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)（CT+CC）基因型與肺癌發(fā)病也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（校正OR=0.98，95%CI 0.761.21，P=0.72）。表6 TP63基因rs4488809多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系基因型肺癌組n(%)對(duì)照組n(%)校正的OR* P*（95%CI）TTCTCCCT+CC128(24.38)262(49.90)135(25.72)397(75.62)401(24.03)814(48.77)454(27.20)1268(75.97)1.00(參照) 0.99(0.781.27) 0.970.90(0.681.19)

27、 0.440.96(0.761.21) 0.72 *風(fēng)險(xiǎn)度計(jì)算采用logistic回歸模型，OR值經(jīng)過(guò)性別、年齡和吸煙情況校正； 代表無(wú)此項(xiàng)。3.4 TP63基因多態(tài)性和吸煙對(duì)肺癌危險(xiǎn)的交互作用分析 應(yīng)用分層的logistic回歸模型，分析TP63 rs4488809位點(diǎn)基因多態(tài)性與吸煙的作用，如表7所示。TP63基因rs4488809多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系分析的結(jié)果提示，等位基因C可能是保護(hù)效應(yīng)。故在調(diào)整性別、年齡后，以攜帶（CT+CC）基因型而又不吸煙者為參照，（CT+CC）基因型并吸煙者OR=1.16(95%CI 0.891.50)，野生純合基因型TT而又不吸煙者OR=1.08(95%C

28、I 0.781.51)，野生純合基因型TT并吸煙者OR=1.13(95%CI 0.801.58)，均沒(méi)有顯著增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)，故認(rèn)為TP63基因rs4488809位點(diǎn)與吸煙不存在交互作用。表7 TP63基因多態(tài)性與吸煙的交互作用對(duì)肺癌患病風(fēng)險(xiǎn)的影響基因型非吸煙者 有吸煙史 病例/對(duì)照 OR*（95%CI） P*病例/對(duì)照 OR*（95%CI） P*CT+CCTT 221/64764/176 1.00（參照）1.08(0.781.51) 0.63176/62164/2251.16(0.891.50)1.13(0.801.58) 0.27 0.50* 風(fēng)險(xiǎn)度計(jì)算采用logistic回歸模型，以突變

29、基因型（CC+CT）且不吸煙者作為參照；OR值經(jīng)性別、年齡校正； 代表無(wú)此項(xiàng)。 4 討論與結(jié)論4.1 討論肺癌是目前中國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，而且其發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)，嚴(yán)重影響人類的健康，然而其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。目前較一致的觀點(diǎn)認(rèn)為，肺癌的發(fā)生是環(huán)境危險(xiǎn)因素和個(gè)體遺傳因素共同作用的結(jié)果?；蚨鄳B(tài)性是決定疾病易感性、表型和治療反應(yīng)性差異的重要因素，在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。本文通過(guò)病例對(duì)照研究，對(duì)TP63基因單核苷酸多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系進(jìn)行探討。 TP63作為TP53家族成員之一5，具有與TP53同源的DNA結(jié)合域。TP53腫瘤抑制基因在調(diào)控細(xì)胞周期和維持基因組穩(wěn)定性方面具有至

30、關(guān)重要的作用12,13，其與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，主要涉及到細(xì)胞周期、阻滯、凋亡、遺傳質(zhì)完整性的保持、血管生成和細(xì)胞衰老的抑制14。同時(shí)TP53還可以和一些細(xì)胞內(nèi)控制程序性死亡的蛋白結(jié)合,從而使該基因在腫瘤發(fā)生中起到抑制作用1520。而TP63是在細(xì)胞發(fā)生DNA損傷后誘導(dǎo)產(chǎn)生的21，DNA損傷的積聚及機(jī)體遺傳毒性應(yīng)激反應(yīng)的缺乏會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。TP63在腫瘤發(fā)生中的作用目前仍不十分清楚，TP63的功能存在著比TP53更廣泛的多樣性。在某些類型的細(xì)胞中，TP63會(huì)像TP53那樣發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用；而在另一些情況下，TP63卻會(huì)產(chǎn)生促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用22,23。也有研究證明，TP63基因

31、位點(diǎn)在多種腫瘤中擴(kuò)增而不是缺失，提示TP63在腫瘤發(fā)生中更多的是致癌而不是抑癌作用24。 本研究發(fā)現(xiàn)，與攜帶TT基因型相比，TP63基因rs4488809位點(diǎn)中的等位基因C與肺癌發(fā)病無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（校正OR=0.98，95%CI 0.76-1.21，P=0.72），同時(shí)TP63基因rs4488809位點(diǎn)與吸煙之間并不存在交互作用（P>0.05）。但最近的一項(xiàng)在日本和韓國(guó)人群中進(jìn)行的GWAS研究則顯示TP63基因區(qū)域中的rs4488809多態(tài)性與肺腺癌發(fā)生密切相關(guān)，提示TP63基因單核苷酸多態(tài)性可能是影響東亞人群肺腺癌發(fā)生的遺傳易感因素25。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致的原因，可能是選擇不同肺癌細(xì)胞病

32、理類型以及研究人群的種族不同造成的。同時(shí)，由于本次研究中對(duì)照組并沒(méi)有按照年齡、性別與病例組頻數(shù)匹配，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的局限性。因此關(guān)于TP63基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系，還有待于進(jìn)一步研究，如擴(kuò)大樣本量，對(duì)不同種族人群、不同肺癌細(xì)胞病理類型進(jìn)行分層研究，并結(jié)合功能研究來(lái)驗(yàn)證TP63基因?qū)Ψ伟┑淖饔玫取?.2 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中采用病例對(duì)照研究方法分析TP63基因的rs4488809多態(tài)性與肺癌易感性之間的關(guān)系，結(jié)果表明TP63 rs4488809多態(tài)性與肺癌遺傳易感性無(wú)關(guān)。參考文獻(xiàn)1 Kurzepa-Hasan E, Hansan K, Adamek R. Tobacco smoking amo

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