第七章生長因子類藥物1、細胞因子的概念：由機體各種細胞

1、第七章 生長因子類藥物1、細胞因子的概念：由機體各種細胞分泌的具有調(diào)控細胞生長分化、調(diào)節(jié)免疫功能和生理 活性并參與病理反應的小分子蛋白質(zhì)。2、細胞因子的種類：白細胞介素（ IL ）：介導白細胞間相互作用的細胞因子，迄今發(fā)現(xiàn) IL-1 至 IL-26 ； 集落刺激因子（ CSF ）：刺激造血細胞形成細胞集落，參與造血功能的細胞因子，如 GM-CSF,G-CSF,M-CSF ， EPO,TPO 等；干擾素（ IFN ）：抵抗病毒的感染，干擾病毒復制的細胞因子，包括IFN- ,IFN- ,IFN- ；腫瘤壞死因子（ TNF）家族：可直接誘導腫瘤細胞凋亡的細胞因子，包括TNF- ,TNF- ；TRAI

2、L（TNF-related apoptosis inducing ligand）,FAS 配體等；趨化因子： 具有趨化作用的細胞因子， 能吸引免疫細胞到免疫應答局部， 參與免疫調(diào)節(jié)和免 疫病理反應。分為 CXC,CC,C,CX3C 亞家族。生長因子：對各種細胞具有促生長作用的細胞因子，如表皮生長因子，胰島素樣生長因子， 血管內(nèi)皮細胞生長因子等。3、細胞因子結構和功能特點：小分子蛋白，單鏈或雙鏈，多含糖基；量微而活性強；通過 與細胞因子受體結合而發(fā)揮效應。第一節(jié) 生長因子概述1、生長因子概念：是一類調(diào)節(jié)細胞生長增殖的可溶性多肽類物，是導致細胞增殖效應的信 息分子，又稱為多肽生長因子。2、生長因子

3、的作用方式：生長因子通過與靶細胞上的生長因子受體特異性結合而發(fā)揮作 用。生長因子受體可位于細胞膜、 細胞質(zhì)或細胞核。 大部分生長因子受體位于細胞膜上。 胞外：配體結合區(qū)；中間：跨膜區(qū)；胞內(nèi)：酪氨酸激酶活性區(qū)（ 1） 生長因子與細胞膜受體結合（ 2） 活化的膜受體激活細胞內(nèi)某些物質(zhì)（ 3） 細胞內(nèi)生長信息的傳遞（ G 蛋白，磷酸肌醇，環(huán)磷酰胺）（ 4） 某些基因的活化3、生長因子分類： 表皮生長因子 （ epidermol growth factor,EGF ）；轉(zhuǎn)化生長因子 （transforming growth factor,TGF ）；胰島素樣生長因子 （ insulin-like gr

4、owth factor,IGF ）；神經(jīng)生長因子 （ nerve growth factor,NGF ） 第二節(jié) 胰島素樣生長因子1、胰島素樣生長因 子 ，是生長激素誘導靶細胞產(chǎn)生的一種具有促生長作用的肽類物質(zhì)，由 兩種緊密相關的小肽，胰島素樣生長因子-（ IGF-）和胰島素樣生長因子 -（ IGF-）組成。兩種 IGFs 與胰島素原一級結構上的同源性大于 40%。2、胰島素樣生長因子主要由肝臟合成，合成后以內(nèi)分泌形式進入血流；部分由骨骼合成分 泌。IGF- 和 IGF- 早期從成人血漿中分離得到，目前可用基因工程方法獲得。 主要對機體的生長和發(fā)育起作用，通過生長激素的調(diào)節(jié)發(fā)揮作用，通過 GH

5、-IGF 軸發(fā)揮 作用，可通過自分泌，內(nèi)分泌，旁分泌三種途徑發(fā)揮作用。3、IGF 的生物學活性：主要作用是刺激細胞生長和分化（1）IGF 和胚胎發(fā)育： IGF-、 IGF- 與胰島素一起，對啟動胚胎生長和發(fā)育起重要作 用；（2）IGFs 和生長： IGF- 介導生長激素的大多數(shù)生長啟動效應GH 分泌 IGF垂體 GH 與肝細胞膜的 GHR 結合 分泌 IGF 靶細胞（3）IGFs 和腎： IGF 作用于腎臟各個部位，直接輸注 IGF- 通常能提高腎功能（4）IGFs 和生殖作用： IGF 和他們的受體及結合蛋白在雌雄生殖組織中都有廣泛的表達。4、IGF 的臨床應用（1）治療糖尿?。?）促生長作

6、用： IGF- 通過對生長激素的調(diào)節(jié)作用，刺激細胞增殖，增加身高和體重（3）治療骨質(zhì)疏松：用于更年期婦女或老年人骨質(zhì)疏松治療（4）治療肌萎縮型側(cè)索硬化癥： IGF- 能刺激各種組織生長，支持運動神經(jīng)元存活和生 長，減少肌肉萎縮。第三節(jié) 表皮生長因子1、EGF 最早于小鼠唾液中發(fā)現(xiàn)，主要作用是促進出牙和眼簾睜開2、EGF 臨床應用：（1）潰瘍治療： EGF 是一種胃酸分泌抑制劑，能抑制胃酸分泌，促進受損粘膜的恢復。（2）創(chuàng)面、燒傷的治療：創(chuàng)傷部位 EGF 受體數(shù)目增加，內(nèi)源性 EGF 雖也在修復位點聚 集，濃度較低，無法滿足，給予外源EGF，可加速細胞增殖和肉芽組織發(fā)育的應答反應，加速創(chuàng)面愈合。

7、另外還有促表皮細胞及皮片生長作用。（3）角膜術后治療：促進角膜愈合，促進角膜基質(zhì)的修復。用于角膜異物剔除，角膜損 傷修復等。第四節(jié) 轉(zhuǎn)化生長因子（ TGF ）1、轉(zhuǎn)化生長因子出現(xiàn)在細胞外培養(yǎng)基中，能誘導非腫瘤識別細胞，如正常大鼠腎成纖維細 胞（ NRK 細胞）轉(zhuǎn)化表型，這種轉(zhuǎn)化表型的特征是：（1）在單層培養(yǎng)基中失去密度依賴性生長，呈單層過度生長，細胞形態(tài)呈特征性改變；（2）另外，能使 NRK 49F 成纖維細胞在軟瓊脂培養(yǎng)基中呈非靜態(tài)生長。TGF 對 NRK 細胞的轉(zhuǎn)化活性為可逆性，一旦 NRK 細胞失去 TGF 作用，則又可返回其原有的細胞 形態(tài)和正常生長功能；（3）在幾種人癌細胞和由 Ki

8、rsten 肉瘤細胞病毒轉(zhuǎn)化的鼠細胞中發(fā)現(xiàn)有類似轉(zhuǎn)化活性的 因子，這些因子都有共同特征，即能與EGF 競爭細胞表面膜受體。2、以 NRK 49F 細胞作為活性檢測細胞，可將TGF 區(qū)分為兩類：（1）能與 EGF 競爭受體，不需要 EGF 參與即可促進 NRK 49F 細胞呈克隆生長者，成為 TGF- ；（2）不能與 EGF 競爭受體，需要 EGF 參與才能促進 NRK 49F 細胞在軟瓊脂中生長，成 為 TGF- 。在同一 NRK 系統(tǒng)中， EGF 本身不能促進 NRK 49F 細胞在軟瓊脂中的 克隆生長，因此，轉(zhuǎn)化生長因子的轉(zhuǎn)化活性是EGF 和 TGF- 共同作用的結果。3、TGF- 的生物

9、學作用（1）促進細胞增殖 （ 2）調(diào)節(jié)細胞分化 （ 3）促進細胞外基質(zhì)合成 （ 4）免疫調(diào)節(jié)作用4、TGF- 的臨床應用（1）骨傷愈合 （ 2）抗癌 （3）慢性創(chuàng)傷 （4）疤痕治療第五節(jié) 神經(jīng)營養(yǎng)因子1、神經(jīng)營養(yǎng)因子是一類在敏感神經(jīng)元周圍，由神經(jīng)靶細胞產(chǎn)生的，調(diào)節(jié)外周和中樞神經(jīng)系 統(tǒng)神經(jīng)元發(fā)育、維持和存活的細胞生長因子。其主要亞家族是神經(jīng)營養(yǎng)素（NT ），包括神經(jīng)生長因子（ NGF ）等。2、NGF 是維持交感神經(jīng)元和感覺神經(jīng)元生長、發(fā)育和功能所必須的營養(yǎng)因子。3、NGF 的生物學作用（1）NGF 的神經(jīng)生理作用：可以作用于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，可以維持交感神經(jīng)和感覺 神經(jīng)的生存，有神經(jīng)營養(yǎng)因子

10、和促神經(jīng)突起生長因子雙重作用，是參與損傷神經(jīng)再生和功能修復的重要因素。（2）NGF 的免疫學作用： T、B 細胞及外周血單核細胞等都存在 NGF 受體， NGF 能刺激 這些細胞的生長和分化。（3）對生殖系統(tǒng)的作用： NGF 水平與雄性激素分泌有關，并能調(diào)節(jié)雌鼠卵巢發(fā)育。（4）對腫瘤細胞的作用：在人神經(jīng)母細胞瘤體外培養(yǎng)基中加入NGF，能使瘤細胞進一步分化，神經(jīng)纖維生長。在由大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞瘤培養(yǎng)出的PC12 細胞培養(yǎng)物中加入 NGF，可抑制瘤細胞的有絲分裂并促進其向良性方向分化。NGF 還能抑制某些腫瘤細胞的 rRNA 合成，抑制有絲分裂和瘤細胞的增殖能力。4、NGF 的臨床應用 人神經(jīng)

11、生長因子在臨床上主要可以用于治療阿爾茨海默氏病和糖尿病所致的外周神經(jīng)病變。第八章 重組多肽、蛋白質(zhì)類激素藥物1、激素（ hormones）是一類由人體產(chǎn)生的重要的調(diào)節(jié)分子。通常激素是由機體的特殊腺體 合成和釋放，通過循環(huán)系統(tǒng)，作用于靶細胞受體的微量化學信息分子。2、細胞外物質(zhì)根據(jù)信號細胞與靶細胞間的距離分為以下幾類：（1）自行分泌信號調(diào)節(jié)系統(tǒng)，細胞對自己分泌的物質(zhì)起反應。（2）旁分泌信號調(diào)節(jié)系統(tǒng)， 靶細胞緊靠著信號細胞， 信號細胞只作用于鄰近的一群靶細胞 ， 神經(jīng)遞質(zhì)就屬于旁分泌信號物質(zhì)。（3）內(nèi)分泌信號調(diào)節(jié)系統(tǒng)，信號細胞分泌信號物質(zhì)作用于遠距離的靶細胞，內(nèi)源性激素通 過體液運送到特定作用部位

12、，從而引起特殊激動效應。（4）外激素，從體內(nèi)分泌，排出體外，通過空氣、水等傳插，引起同種生物產(chǎn)生生理效應。3、人體的內(nèi)分泌組織及其分泌的激素：（1）下丘腦分泌的激素：生長激素釋放因子（GRF）、生長激素釋放抑制因子（ GRIF ）；（2）垂體分泌的激素：生長激素（ GH ）；（3）腺體分泌的激素：胰島分泌胰島素第一節(jié) 重組胰島素1、糖尿病是一種以高血糖為共同特征的常見的內(nèi)分泌代謝疾病，是由于胰島素絕對或相對不足而引起的。主要臨床癥狀為：多尿、多飲、多食、消瘦（三多一少 ）。2、胰島素與胰高血糖素對比：（1）結構：胰島細胞分泌胰島素， A 鏈21個 aa殘基，B鏈 30個 aa殘基； 胰島細胞分

13、泌胰高血糖素， 29 個 aa 殘基。（ 2） 功能：胰島素能提高組織攝取葡萄糖的能力，抑制肝糖元分解，促進肝糖元 及肌糖元合成，因此可降低血糖。缺乏：血糖升高，尿中有糖，糖尿病。過量： 血糖過低，能量供應不足，影響大腦機能。胰高血糖素：增高血糖含量，促 進肝糖元分解。3、胰島素的結構：成熟的胰島素由兩條多肽鏈組成，多肽鏈之間由二對二硫鍵相連，A 鏈有一鏈內(nèi)二硫鍵。 A 鏈由 21 個氨基酸殘基組成， 而稍大一點的 B 鏈由 30 個氨 基酸殘基組成。不同種生物來源的胰島素都具有這一基本結構，僅僅在它們的氨基 酸序列上存在細微差別。例如，豬胰島素、人胰島素兩者僅有一個氨基酸不同，而 與牛胰島素

14、的差別為三個氨基酸殘基。4、胰島素的作用： （ 1）促進葡萄糖（以及氨基酸、 K+ 離子和其它營養(yǎng)物）進入細胞， 因此降低了血糖濃度。 （ 2）促進胞間合成途徑如糖元合成，促進營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化成細 胞中的儲存形式。 （ 3）抑制分解代謝途徑如糖元分解。 （4）促進蛋白質(zhì)和 DNA 合成（這是胰島素的促生長作用）5、DNA 重組技術生產(chǎn)人胰島素有兩條技術路線，分別是：（1）Genentech 公司的科學家采用的方法是把編碼胰島素 A 鏈和 B 鏈的核苷序列分 別克隆到兩個不同的大腸桿菌細胞中，在大規(guī)模發(fā)酵罐中分別培養(yǎng)，純化后的 A 鏈和 B 鏈在適宜的氧化條件下共同保溫，以促進鏈間二硫鍵的形成，最終

15、生 成人源化胰島素；（ 2） 另一種方法是把編碼人胰島素原的核苷序列克隆到大腸桿菌中，隨后純化處理 表達出的胰島素原，并用蛋白水解酶切除胰島素原的 C 肽。此方法生產(chǎn)出的制 劑叫重組人源化胰島素。目前根據(jù)生產(chǎn)途徑不同而有兩種生物合成人源化胰島素：一種為美國生產(chǎn)的，以大腸 桿菌為受體菌；另一為丹麥生產(chǎn)的以酵母菌為受體菌。6、胰島素受體：是跨膜的酪氨酸激酶，由22 組成，鏈在細胞外側(cè)，鏈跨膜，在鏈的細胞質(zhì)側(cè)部分，含有酪氨酸激酶結構域。7、胰島素作用方式：受體酪氨酸蛋白激酶（TPK ）途徑8、胰島素產(chǎn)品藥動學：（1）胰島素為蛋白質(zhì)，如口服，在胃腸內(nèi)即被破壞，故必須注射給藥。（2）吸收入血的胰島素以游

16、離單聚體形式迅速分布到細胞外液，血漿內(nèi)胰島素的半衰 期很短，糖尿病人體內(nèi)如產(chǎn)生胰島素抗體，則可與胰島素結合。（3）胰島素主要在肝臟被酶降解，主要的胰島素降解酶是硫代金屬蛋白酶。9、胰島素使用不良反應： （1）低血糖反應 ；（ 2）過敏反應 ；（ 3）脂肪萎縮與肥厚（4）胰島素抗體形成與胰島素耐受。10、胰島素臨床應用：（ 1）胰島素首先用于胰島素依賴型糖尿?。↖DDM） 病人的替代治療 ；（ 2）用于治療糖尿病的急性代謝并發(fā)癥；（3）用于控制糖尿病人圍手術期、糖尿病妊娠和分娩期的血糖；（ 4）糖尿病人并發(fā)急性感染；（ 5）糖尿病人并發(fā)結核；（6）糖尿病人有慢性肝、腎疾病及功能不全；（ 7）對口

17、服降糖藥無效的胰島素非依賴型糖尿?。∟IDDM ）病人。第二節(jié) 重組人生長激素1、生長激素合成釋放軸： 情緒、睡眠、運動、低血糖藥物等下丘腦（生長激素釋放激素，生長激素釋放抑制激素）腦垂體2 生長激素的生物學效應：（1）促進蛋白質(zhì)合成； （2）調(diào)節(jié)脂代謝； （ 3）對糖代謝作用； （4）作用于軟骨、骨 生長3、生長激素的作用：主要應用是對于身材矮小的治療4、目前國內(nèi)應用的進口基因重組人生長激素制劑有：健高靈、思增、優(yōu)猛茁、novotropin第九章 主要作用于血液和凝血系統(tǒng)的藥物1、促凝血藥：激活凝血過程的某些凝血因子而防治某些凝血功能低下所致的出血性疾病。 抗凝血藥：抑制凝血過程的某些凝血因

18、子而阻止血栓形成，用于防治血栓形成和擴大。2、抗凝系統(tǒng)（1）細胞：單核 -巨噬細胞系統(tǒng)（2）體液：抗凝血酶、肝素等（3）纖溶系統(tǒng) : 纖溶酶原纖溶酶水解纖維蛋白和某些凝血因子3、凝血過程（1）X 因子激活（2）凝血酶 （II 因子 ）激活（3）纖維蛋白原溶膠性纖維蛋白凝膠性纖維蛋白4、凝血機制： 內(nèi)源性凝血系統(tǒng) HMWK , Ka a外源性凝血系統(tǒng)TPL a其中， HMWK高分子激肽原； Ka：激肽釋放酶； TPL ：組織凝血活素；PL ：血小板磷脂HMWK a5、可通過被感染的血液或血制品傳播的病原體：乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，人類免疫 缺陷病毒，人類嗜 T 細胞病毒和型，巨細胞病毒（ C

19、MV ），蒼白密螺旋體，原生瘧 原蟲，克魯斯氏錐蟲。第一節(jié) 水蛭素1、水蛭唾液中的抗凝成分；強效、特異的凝血酶抑制劑。1:1 分子直接與凝血酶結合，抑制凝血酶活性；抗栓作用優(yōu)于肝素，強、久；出血不良反應少 , 無過敏和血小板 減少；基因重組水蛭素 （r hirudin） 作用與天然水蛭素相同。2、水蛭素分子由 2 個結構域組成， 它們分別與凝血酶分子表面兩個不同的表面位點作 用。其 N-端結構域與凝血酶的活性位點結合， 抑制其催化活力； 而其帶負電荷的羧 基末端結構域則與凝血酶的陰離子結合外側(cè)位點或稱纖維蛋白原識別位點結合， 從 而抑制凝血酶與纖維蛋白原的相互作用。3、水蛭素是迄今發(fā)現(xiàn)的凝血活

20、性最強的天然抑制劑，它不需要其它的凝血因子或血漿成分的參與即可發(fā)揮作用。4、采用 DNA 重組技術生產(chǎn)重組水蛭素 （recombinant hirudin） 。表達方式有融合表達、 非融合表達和分泌表達三種；宿主系統(tǒng)包括大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物 細胞。大腸桿菌中進行非融合表達，很易被蛋白酶降解，且其 N 端會不可避免地多加一個 Met；融合系統(tǒng)表達，表達產(chǎn)量很高，但目的產(chǎn)物在其中所占比例很低，需要進行 有效的純化、切割與復性，其最終產(chǎn)率受到影響；分泌表達系統(tǒng)直接表達出具有天 然構象的產(chǎn)物一種較好的選擇。其產(chǎn)率往往不夠高，取決于表達載體的強弱情況以 及與該基因的匹配情況。5、水蛭素的臨

21、床應用：可用于各種血栓性疾病，目前應用較多的是急性心肌梗死，不 穩(wěn)定型心絞痛和靜脈血栓。第二節(jié) 組織纖溶酶原激活劑（ t-PA ）1、 t-PA 是一種絲氨酸蛋白酶，為內(nèi)源性溶栓劑，它是由內(nèi)皮細胞產(chǎn)生。利用DNA 重組技術生產(chǎn)，稱為 rt-PA ，是第二代溶栓藥。其作用機制與 SK（鏈激酶）和 UK （尿激酶）相似，是將纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶，使纖 維蛋白裂解，而達到溶栓目的。 在纖維蛋白存在下，它激活纖溶酶原的活性大大增加。 它的 優(yōu)點是對循環(huán)中纖溶酶原的激活作用較 SK 弱，因此有可能減少出血合并癥。2、t-PA 的臨床應用：溶栓的治療范圍一般在缺血性腦卒中癥狀發(fā)作后3 小時內(nèi)應用，越早治療

22、效果更佳。溶栓治療能改善缺血性腦卒中病人的神經(jīng)功能缺損，但由于腦內(nèi)出血率高， 使用時要選擇適宜病例和治療時間。第三節(jié) 尿激酶1、 尿激酶作用機制： （ 1）尿激酶是絲氨酸蛋白酶，絲氨酸和組氨酸是其活性中心 的必需氨基酸； （ 2）尿激酶是纖溶酶原激活系統(tǒng)中的一員，此系統(tǒng)由纖溶酶原 -纖溶酶、 活化物、 抑制物組成， 它的主要功能是去除沉淀的纖維蛋白。 纖溶酶 可降解纖維蛋白，使血凝塊水解。而纖溶酶是通過活化物、尿激酶激活其前體 纖溶酶原而形成的。2、 尿激酶臨床應用： （ 1） 本品可用于急性心肌梗死的血栓治療；（2） 本品可用于治療腦室內(nèi)出血 ； （3） 本品可用于治療心絞痛 ；（4）本品用

23、于治療肢體動脈栓 塞； （5） 本品還用于腦血栓的形成、腦栓塞、肺栓塞以及人工腎移植、動靜脈 支血栓的形成，風濕性關節(jié)炎等 。（本章可能考一大題： 簡述人體內(nèi)的凝血機制和抗凝系統(tǒng)， 舉出一些相關的生物技術藥物并 說明其靶點）第十章 治療用酶（略）第十一章 抗體、疫苗與佐劑第一節(jié) 單克隆抗體1、 單克隆抗體是指將抗體產(chǎn)生細胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞相融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細胞成為純的單克隆細胞系而產(chǎn)生的。 這種抗體是針對一個抗原 決定簇的抗體， 是單一的 B 淋巴細胞克隆產(chǎn)生的， 是結構和特異性完全相同的高純度抗 體。2、 單克隆抗體的制備過程：（1）抗原與動物免疫：制備特定

24、抗原的單克隆抗體，首先要制備用于免疫的適當抗原， 再用抗原進行動物免疫。（2）細胞融合與雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)：將適量脾細胞與骨髓瘤細胞在聚乙二醇誘導 下融合。細胞融合后可產(chǎn)生多種融合細胞，如脾脾，脾瘤，瘤瘤融合細胞， 用 HAT 培養(yǎng)基篩選脾瘤融合細胞。（3）篩選陽性克隆與克隆化：陽性克隆的常用篩選方法有免疫酶技術、免疫熒光技術、 放射性免疫技術等?？寺』侵竼蝹€細胞通過無性繁殖而獲得細胞基團的整個培養(yǎng) 過程，常用克隆化方法為有限稀釋法和軟瓊脂法。（4）雜交瘤細胞與抗體性狀鑒定（5）單克隆抗體的大量制備：有兩種方法，一是體外培養(yǎng)法，可獲得10g/mL 的抗體；二是動物體內(nèi)誘生法，可獲得 52

25、0mg/mL 抗體。多采用后者。（6）單克隆抗體的純化3、抗體種類：（1） 抗體：即裸抗體，根據(jù)人源化程度又分為鼠源McAb ，嵌合 McAb ，人源化 McAb ，完全人 McAb ；（2）抗體片段： Fab片段抗體（由完整的輕鏈和重鏈 VH +C H 1組成），單鏈抗體 scFV（由抗體 V H 和 V L 通過一段連接肽連接而成的重組蛋白） ；（3）抗體偶聯(lián)物：抗體或抗體片段與“彈頭”藥物連接而成，可作“彈頭”的物質(zhì)有放 射性核素、化療藥物與毒素；（4）抗體融合蛋白：由抗體片段和活性蛋白兩部分構成。4、單克隆抗體的治療作用： （1）抗器官移植排斥反應（ 2）腫瘤導向治療（ 3）自身免疫性

26、 疾?。?4）作為分子疫苗治療腫瘤5、腫瘤疫苗的分類：分為細胞疫苗、亞細胞疫苗、分子疫苗和基因疫苗。6、疫苗的發(fā)展經(jīng)歷了三代革命，第一代疫苗即傳統(tǒng)疫苗，以牛痘疫苗和減毒的狂犬疫苗為 代表，主要由死亡的病原體或減毒的致病體的某一部分構成。直接將無毒或者減毒的病 原體接種到人體，使之產(chǎn)生特異性的免疫反應，起預防疾病的作用。第二代疫苗是基因 工程疫苗， 主要是利用基因工程技術， 將分離得到的具有強烈免疫原性的抗原蛋白基因， 裝入到表達載體中， 通過宿主細胞表達重組抗原蛋白， 以分離純化的重組蛋白作為疫苗。 由于這類疫苗不含有完整病原體中除具有免疫原性的蛋白質(zhì)以外的部分， 也不存在減毒 的病原體由于突

27、變而恢復毒性的可能，因此，與第一代疫苗相比，這類疫苗的安全性更 高，最先制備成功的是重組乙肝疫苗。 DNA 疫苗的出現(xiàn)，開辟了疫苗的新途徑，也標 志著疫苗第三次革命的到來。這種疫苗既是載體又能在真核細胞中表達抗原，刺激機體 產(chǎn)生特異而有效的免疫反應，并且在肌肉注射時不需要任何其他的生物載體和化學佐 劑。（了解）7、DNA 疫苗：又稱基因疫苗或核酸疫苗，是指將編碼某種抗原的外源基因與質(zhì)粒載體重 組，構建出真核表達載體，通過肌肉注射等途徑直接導入動物細胞后，能利用宿主細胞 的蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)合成外源抗原蛋白， 并誘導宿主細胞產(chǎn)生對該抗原的體液和細胞免疫 應答，尤其是能誘導產(chǎn)生具有細胞毒殺傷功能的 T

28、淋巴細胞， 以達到預防和治療疾病的 目的。8、DNA 疫苗的特點：（1） DNA 疫苗是一種重組質(zhì)粒，它能在大腸桿菌細胞內(nèi)快速復制，繁殖，易于制備和生 產(chǎn)，而且由于基因免疫是直接接種質(zhì)粒 DNA ，避免了制備類似傳統(tǒng)疫苗的繁瑣過程。（2）DNA 疫苗產(chǎn)生抗原的過程和自然感染時相似， 產(chǎn)生的抗體主要是針對抗原決定簇的 構象，而重組蛋白在經(jīng)過體外合成和純化后，常常引起構象型抗原表位的改變或丟 失。（3）DNA 疫苗的最大優(yōu)勢是可以同時誘導機體產(chǎn)生特異性的體液免疫和細胞免疫， 特別 是能有效的激活細胞毒 T 淋巴細胞（ CTL ）的殺傷活性，有利于清除病毒等胞內(nèi)感 染的病原體；而傳統(tǒng)疫苗主要產(chǎn)生體液

29、免疫。（4）有些病原體在感染機體后可通過改變自身的抗原結構而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，選擇 某一病原體編碼的抗原蛋白所對應的保守核苷酸序列制成 DNA 疫苗，可以對同一 病原體的不同突變型產(chǎn)生交叉免疫。（5）DNA 疫苗只含有核酸成分，沒有蛋白質(zhì)等其他輔助成分，在體內(nèi)不能復制，而減毒 的活疫苗除了主要成分蛋白質(zhì)外，還含有核酸感染因子，有可能出現(xiàn)病毒的復制、 繁殖，引起感染。（6）DNA 疫苗進入宿主細胞后，可以長期表達外源蛋白，不斷的刺激機體的免疫系統(tǒng)， 從而使機體獲得了持久的免疫力。（7）DNA 疫苗具有相同的理化性質(zhì)，為聯(lián)合免疫提供了可能。（8）DNA 疫苗穩(wěn)定性好，易于保存和運輸。9、佐劑：能

30、加強抗原的免疫原性和免疫保護效果的物質(zhì)。10、常用佐劑：（1）無機佐劑：鋁佐劑，磷酸鈣佐劑；（2）油劑：福氏佐劑與福氏不完全佐劑，MF59 佐劑；（3）細菌或細菌產(chǎn)物佐劑： 霍亂毒素（ CT），大腸桿菌不耐熱毒素 （LT），百日咳毒素 （PT）， B 群腦膜炎奈瑟菌的外膜小體，卡介苗，細菌脂多糖；（4）其他：植物佐劑，人工合成佐劑，細胞因子佐劑，核酸佐劑。11、人源性單抗和鼠源性單抗相比有哪些優(yōu)點？ （1）抗體中鼠源成分減少降低了機體的免疫排斥反應；（2）人抗體中的 Fc 段能夠誘發(fā)機體的效應功能；（3）在體內(nèi)的半衰期延長，原因為人源化抗體中的Fc 段可以特異結合人血管內(nèi)皮細胞上的 Fc 受體

31、 （ FcRn） ，使抗體內(nèi)化到血管內(nèi)皮細胞而不被降解，并能夠回到血液中參與循環(huán)。 鼠抗體由于不能有效的與人 FcRn 結合而很快從循環(huán)系統(tǒng)中清除。12、艾滋病疫苗有哪幾類， 各類臨床試驗研究進展如何？ （此題為開放題目， 答案僅供參考） （1）滅活疫苗：滅活疫苗是一種傳統(tǒng)的疫苗。它是將病原體大量培養(yǎng)后，經(jīng)滅活處理使其 失去感染性但保留免疫原性而研制的疫苗。 滅活疫苗的優(yōu)點是以完整的病原體顆粒同機體的 免疫系統(tǒng)發(fā)生相互作用，產(chǎn)生的免疫應答強而全面，而且制備簡單易行。但研制 HIV 滅活 疫苗較困難。主要有以下問題： （1） 目前尚未建立安全可靠的滅活方法，滅活程度很難掌握， 滅活過度喪失免疫原

32、性，滅活不全則不安全。（2） 滅活后病毒的核酸仍完整，有可能整合到人體細胞染色體上。 （3）需要培養(yǎng)大量病毒，而且病毒必須高度純化，以避免污染細胞引起 的不良反應。（2）減毒活疫苗：減毒活疫苗是將 HIV 在體外或動物體內(nèi)長期傳代，或用人工方法將一些 重要基因去除或造成功能喪失的突變，使其在保留復制和免疫原性的基礎上失去致病能力。 它在結構和生物學特性上都與天然病毒較接近，并且易生產(chǎn)、易純化、 效果好。但由于艾滋病是致死性傳染病，病毒本身變異能力又很強，因而對 HIV 減毒活疫苗的安全性要求非常 高，現(xiàn)有的減毒方法都難以保證安全， 因而目前仍處于基礎研究階段， 或作為一種動物模型 來研究減毒活疫苗的免疫保護機制。（3）新型疫苗1）合成多肽疫苗：合成多肽疫苗是運用肽合成技術制備的一種高純度制品。在HIV 各種肽抗原中由 35 個氨基酸組成環(huán)結構的 gpl20 v3 肽是最為重要的，因為該段包含了