瘧疾鏡檢的實驗室技術

1、瘧疾鏡檢的實驗室技術瘧疾鏡檢的實驗室技術南江縣疾病預防控制中心南江縣疾病預防控制中心2013年年9月月24日日血片的清潔血片的清潔l新的載玻片必須洗潔凈后才可直接浸于新的載玻片必須洗潔凈后才可直接浸于 9 5%的酒精中，的酒精中，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細布擦干，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。l用過的載玻片可用用過的載玻片可用5之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一張之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一張一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細心拭一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細心拭擦。再用清水漂洗干凈并以紗

2、布擦干，然后浸于擦。再用清水漂洗干凈并以紗布擦干，然后浸于 95酒酒精內脫脂，照上述法處理，精內脫脂，照上述法處理，l亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應注意避免玻亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。采血的部位和方法采血的部位和方法 l以耳垂采血為主。以耳垂采血為主。l以以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指緊捏耳垂，右手持一次性采手拇指和食指緊捏耳垂，右手持一次性采血針迅速刺入，適可而止第一滴血不必擦血針迅速刺入，適可而止第一滴血不必擦掉，即可應用。（若

3、由指頭取血則受檢者掉，即可應用。（若由指頭取血則受檢者痛楚較大，且易引起創(chuàng)口感染，一投不宜痛楚較大，且易引起創(chuàng)口感染，一投不宜采用。）采用。）采血的血量采血的血量l厚血膜血量約為厚血膜血量約為5立方毫米左右立方毫米左右(即一小滴即一小滴)，涂成邊緣光滑之園形，直徑約涂成邊緣光滑之園形，直徑約0.81.0厘厘米左右。米左右。l薄血膜血量只需薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右立方毫米左右,過過多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約2.5厘米，寬約厘米，寬約2厘米厘米采血的時間采血的時間l進行瘧疾普查時，在同一時間內常常需要進行瘧疾普查時，在同一時間內常常需要

4、檢查很多居民，故一般無法考慮取血的時檢查很多居民，故一般無法考慮取血的時間。間。l但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應當考慮但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應當考慮在什么時候取血較為適宜，尤在確定不下在什么時候取血較為適宜，尤在確定不下蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患者的情蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患者的情況下。況下。采血的時間采血的時間-間日瘧間日瘧l間日瘧原蟲及三日瘧原蟲，在患者剛發(fā)冷發(fā)熱以后，大部是在環(huán)狀滋養(yǎng)體期，故這一時期區(qū)別瘧原蟲種類是不容易的。雖在般情況下，隨便什么時間檢查感染者的末稍血液， 多少能查到各個時期的原蟲，但適當?shù)娜⊙獣r間，一般是在患者發(fā)作數(shù)小時至十余小時，即已滋養(yǎng)發(fā)育至具有易于

5、鑒別的晚期滋養(yǎng)體期采血的時間采血的時間-惡性瘧惡性瘧l惡性瘧原蟲，從理論上說，因為惡性原蟲的裂體生殖是在內臟的毛細血管內進行的，所以在發(fā)作之前，患者的末稍血液中不易查到。但實際情況不盡如此，一般在受染者的末稍血液中，隨時能見到少數(shù)惡性瘧原蟲的環(huán)狀滋養(yǎng)體，l雖然如此，較理想的取血時間，是在發(fā)作后的20小時左右，因為這個時候，環(huán)狀滋養(yǎng)體雖已滋長發(fā)育至最高峰，但尚未回至內臟的毛細血管中去進行裂體生殖。l環(huán)狀滋養(yǎng)體的數(shù)量與構造，有助于瘧原蟲種類的鑒別。惡性瘧原蟲的配子體很易識別，但在初發(fā)時，一般需要在發(fā)作八日后才能在末稍血液中出現(xiàn)，應當注意厚、薄血膜的形狀和位置厚、薄血膜的形狀和位置l薄血膜寬2cm，

6、長2.5cml厚血膜直徑0.8-1cml假定將玻片劃成三格等分，則厚血膜應位于中格靠右側線處，薄血膜則從玻片中央起至左格中部止，右端空格供記錄姓名，編號或貼標簽之用(如圖)血片的制作血片的制作1l玻片的執(zhí)持方法：玻片的執(zhí)持方法： 無論在拭擦玻片，制作血片或染色血無論在拭擦玻片，制作血片或染色血片時，手指僅可夾持玻片兩側緣，切片時，手指僅可夾持玻片兩側緣，切匆觸及玻片之上下面以免手上油脂污匆觸及玻片之上下面以免手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不勻，厚血膜及玻片面，使薄血涂布不勻，厚血膜易于脫落易于脫落血片的制作血片的制作-厚血膜涂制厚血膜涂制l取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，取潔凈的載玻片

7、和推片各一張載玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二側，以左端下角推片以右手拇指和食指持其二側，以左端下角從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當位從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當位置，置， 自內向外回轉擴大，涂成厚血膜，使厚薄自內向外回轉擴大，涂成厚血膜，使厚薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之殘留小量血液。殘留小量血液。血片的制作血片的制作-薄血膜涂制薄血膜涂制l以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻片約成片約成25一一45度角，使血滴向二旁擴展至一定度角，使血滴向二旁擴展至一定寬度時，立即向左邊輕

8、輕迅速推出即成薄血膜。寬度時，立即向左邊輕輕迅速推出即成薄血膜。推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄程度，推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一層血細胞，血細胞的分布最理想的薄血膜是一層血細胞，血細胞的分布排列比較均勻。無裂縫，無空隙。排列比較均勻。無裂縫，無空隙。血片的編號血片的編號l血片編號可根據(jù)實際操作進行。l號碼必須不易脫落，建議用鉛筆在薄血膜上編號。血片的固定和脫膜血片的固定和脫膜l薄血膜用甲醇固定薄血膜用甲醇固定l現(xiàn)場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，現(xiàn)場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，直接染色。直接染色。l保存時間較長的標本片厚血膜要脫血保存時間較長的標本片厚血膜

9、要脫血膜后保存。膜后保存。血片制作的注意事項血片制作的注意事項l平放、平放、 有蓋、有蓋、 防止灰、塵和植物防止灰、塵和植物孢子污染。孢子污染。l防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸l自然干燥，不能太陽曬和火烤自然干燥，不能太陽曬和火烤制作血片的注意事項制作血片的注意事項l制成的血片切勿用火烤、日曬或放在新購置之標本盒內，以免血紅制成的血片切勿用火烤、日曬或放在新購置之標本盒內，以免血紅蛋白凝固無法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中血細蛋白凝固無法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中血細 胞沉在一邊，可使厚薄不勻。此外還要防止蒼蠅吮吸血膜和灰塵污胞沉在一邊，可使厚薄不

10、勻。此外還要防止蒼蠅吮吸血膜和灰塵污染血片。染血片。l 制成的血膜須完全干燥后制成的血膜須完全干燥后(自然情況下約自然情況下約4-12小時才能全干燥；必小時才能全干燥；必要時，可置于要時，可置于3 7的暖箱中，促其速干的暖箱中，促其速干)始可進行固定及染色否則始可進行固定及染色否則薄血膜中的紅細胞邊緣皺縮，厚血膜容易在染色時脫落，而?，F(xiàn)網(wǎng)薄血膜中的紅細胞邊緣皺縮，厚血膜容易在染色時脫落，而?，F(xiàn)網(wǎng)狀的背景；反之；血片擱置過久則有霉菌及枯草桿菌生長，血紅蛋狀的背景；反之；血片擱置過久則有霉菌及枯草桿菌生長，血紅蛋白凝固，也不能使用，因此不利于鏡檢。白凝固，也不能使用，因此不利于鏡檢。l若把未經(jīng)固定的血片能盛于氯化鈣的干燥器內，然后放入冰箱中，若把未經(jīng)固定的血片能盛于氯化鈣的干燥器內，然后放入冰箱中，可保存可保存3年之久，并仍可較滿意的染色。年之久，并仍可較滿意的染色。血片的染色血片的染色l吉氏染液的成份吉氏染液的成份l原料：吉氏染粉原料：吉氏染粉 10 g 中性甘油中性甘油 500 ml 純甲醇純甲醇 500 ml吉氏液染色方法吉氏液染色方法l將吉氏染液配成將吉氏染液配成3%的稀釋液的稀釋液l水水97 ml + 3 ml吉