細黃鏈霉菌抑制草莓重茬病效果探究

1、細黃鏈霉菌抑制草莓重茬病效果探究摘要以實驗室保存的抗生菌為出發(fā)菌株，選擇一 株對引起草莓重茬病的鐮刀菌、絲核菌拮抗作用強的菌株， 經(jīng)鑒定為細黃鏈霉菌，確定生產(chǎn)培養(yǎng)基為豆餅粉4%、鋸末 12%、甘薯粉12%、細肥土 35%、石灰2. 0%,種齡為2024 h 的液體菌種，接種量為5%,培養(yǎng)基濕度在30%35%,發(fā)酵 初期室內(nèi)濕度控制在60%左右，基質(zhì)開始轉(zhuǎn)粉時降低空氣濕 度在50%左右。關鍵詞草莓重茬??；細黃鏈霉菌；抗生菌中圖分類號s436. 68文獻標識碼a文章編號1007-5739 (2013) 20-0113-02草莓重茬病一直是困擾草莓生產(chǎn)的重要問題，尤其是隨著設施產(chǎn)業(yè)的不斷擴大，這個問

2、題越來越突出。目前，草莓 要連續(xù)種植普遍采用的方法就是澳甲烷土壤熏蒸法，但該藥 的使用成本高，藥效時間短，且澳甲烷是劇毒氣體，對大氣 臭氧層破壞嚴重。大量有毒藥劑的使用使土壤的理化性質(zhì)進 一步惡化，肥力降低，有毒物質(zhì)積累，嚴重影響草莓的品質(zhì) 和產(chǎn)量。造成作物重茬的主要原因是土傳病害和土壤營養(yǎng)元 素的缺乏1-2 o同一作物的耕作、施肥、灌溉等方式固定不變，連年耕作，使土壤環(huán)境惡化，肥力降低，有毒物質(zhì)積 累，有益微生物菌群數(shù)量減少，引發(fā)病原微生物的大量滋生 3。同一作物根系分布范圍及深淺一致，吸收養(yǎng)分相同， 極易導致某種營養(yǎng)的消耗量增加，該耕作層某種養(yǎng)分缺失， 在連作作物中表現(xiàn)更為嚴重。1材料與方

3、法1. 1試驗材料供試草莓拮抗菌株：實驗室保存的多株放線菌株。草莓 土傳病菌：鐮刀菌(fusaricm oxysporum )、絲核菌 (rhizoctonia solani kuho),從保定滿城草莓園分離并保 存。供試培養(yǎng)基：放線菌培養(yǎng)采用高氏1號合成培養(yǎng)基，土 傳病菌培養(yǎng)采用pda培養(yǎng)基。靶標菌株：鐮刀菌(fusaricm oxysporum)、絲核菌(rhizoctonia solani kuho)。試驗菌 株：放線菌j-32o栽培盆：20 cm的塑料盆，取田間細肥土, 滅菌，每盆裝土 10 kgo栽培槽(長x寬二100 cmx30 cm) 裝土，500 ml罐頭瓶、紗布、牛皮紙若干。

4、1. 2試驗方法1.2. 1抗生菌菌株的篩選。菌種活化：將實驗室保存 的放線菌種活化備用，靶標菌活化。菌株篩選方法：將活 化好的放線菌株，在髙氏1號培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)3 d后，分 別以鐮刀菌和絲核菌為靶標菌，采用對峙培養(yǎng)法測定拮抗作 用。方法為：取活化的靶標菌菌餅(5 mm)置于pda平板 (0 90 mm) 一側(cè)，用接種環(huán)挑取適量拮抗菌在平板另一側(cè), 30工培養(yǎng)5 d后測量抑菌帶寬度，每處理設3次重復4。1.2.2室內(nèi)盆栽試驗。為了進一步驗證放線菌株j-32 對草莓致病菌的抑菌效果及其在土壤中的定殖性能，特進行 室內(nèi)盆栽試驗?；亟影袠司謩e測定其對土傳病害的防治 效果。將放線菌j-32的斜面

5、制成含砲子量為1x106個/ml 的砲子懸液，搖勻后接入盆栽草莓的根際，每株秧苗接入2 ml, 1周后以同樣方法制備靶標菌菌懸液接入草莓的根際， 每株秧苗接入2 mlo以不接放線菌的處理為對照（ck）。 以絲核菌測定放線菌j-32的防治效果：選用苗齡20 d的草 莓苗移栽到盆中，每盆5株，5次重復。以鐮刀菌測定優(yōu) 選菌株的防治效果：選用苗齡2個月的草莓苗移植到栽培槽 中，每槽10株，5次重復。1.2.3 j-32菌劑生產(chǎn)工藝的確定。液體種子制備方法： 培養(yǎng)基含玉米粉2%、豆餅粉2%、淀粉1%,搖瓶培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 180 r/min, 2830 °c培養(yǎng)24 h。固體種子制備方法：培養(yǎng) 基

6、含小米 100 g. kn03 0.1%、mgs04 0.05%、nacl 0.05%、 k2hp04 0. 05%.牛肉浸膏0.1%、鉄皮10%,調(diào)ph值至7.0 7. 2o將以克氏瓶（高氏1號培養(yǎng)基）培養(yǎng)成熟的jt8菌鞄 子接入固體種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)57d,鞄子成熟后作為固 體種子備用。2結(jié)果與分析2. 1放線菌對靶標菌的抑菌效果8株放線菌對靶標菌均有較好的抑制作用，其中j-88對鐮刀菌抑制作用最大，其次為j-32； j-32對絲核菌的抑制 作用最大，其次為j-88,具體見表1。2.2盆栽草莓發(fā)病情況在試驗中觀察發(fā)現(xiàn)，加入抗生菌后草莓苗生長健壯，發(fā) 病率低，具體見表2。2.3 j-32菌劑

7、生產(chǎn)工藝的確定2. 3. 1培養(yǎng)基質(zhì)的選擇。試驗選擇8組培養(yǎng)基質(zhì)配方， 分別接入液體菌種，30 £溫箱培養(yǎng)。觀察生長情況，并以 培養(yǎng)結(jié)束后測定胞子數(shù)，確定較適宜的培養(yǎng)基質(zhì)，其中較好 的2組培養(yǎng)基質(zhì)的培養(yǎng)結(jié)果見表3o由于第2組物料成本相對較低，所以在此培養(yǎng)基的基礎 上做正交試驗，進一步確定各種成分的具體含量，因素水平 見表4,正交試驗結(jié)果見表5。4個因素的主次關系為：豆餅 粉鋸末甘薯粉細肥土石灰。最優(yōu)的培養(yǎng)基組合為：豆餅 粉4%、鋸末12%、甘薯粉12%、細肥土 35%、石灰2. 0%o為了驗證最優(yōu)組合，將出發(fā)培養(yǎng)基，正交試驗表現(xiàn)最好的培養(yǎng)基和最優(yōu)組合培養(yǎng)基進行試驗驗證，驗證結(jié)果見表6

8、。2. 3.2發(fā)酵培養(yǎng)。發(fā)酵原料及其培養(yǎng)條件同淺盤培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)56 d后，基質(zhì)全部出現(xiàn)粉色胞子，此時即可出料。且在4045 £條件下，干燥至含水量10%15%,粉碎后包裝備用，并從中取樣平板測定胞子數(shù)。經(jīng)5個批次的生產(chǎn)試驗表明，菌絲生長健壯、整齊、含菌量高，培養(yǎng)結(jié)果見703結(jié)論與討論先用靶標菌對試驗室保存的放線菌進行初選，然后進行 對草莓主要拮抗菌的抑菌試驗，與肥效菌株的拮抗試驗對菌 株進一步優(yōu)選，確定j-32細黃鏈霉菌(streptomyces microflavus)為草莓抗重茬菌劑的生產(chǎn)菌株。放線菌的培養(yǎng)基的影響大小依次為，豆餅粉鋸末甘薯 粉細肥土石灰，在菌絲生長期需要的培養(yǎng)

9、基水分要高達到 60%,在砲子形成期培養(yǎng)基水分不能超過50%。復合菌劑在土 壤中形成有益微生物群體優(yōu)勢，抑制有害微生物的繁殖，抑 制土傳病害，降低發(fā)病率5-7 o4參考文獻1 李保國，陳超，郭素萍，等無公害草莓重茬病防 治劑對草莓生長的影響j 河北果樹，2005 (1)： 7-10.2 李彥慧，李保國，劉雪春，等原美草莓重茬病防 治劑對草莓礦質(zhì)元素利用效果的研究j.河北農(nóng)業(yè)大學學 報，2005, 28 (6)： 58-63.3 李保會，李青云，李建軍，等復合微生物菌肥對 連作草莓產(chǎn)量和品質(zhì)的影響j.河北農(nóng)業(yè)科學，2007, 11(1)： 15-17.4 田連生，王偉華，石萬龍，等.利用木霉防治大棚 草莓灰霉病j.植物保護，2000, 26 (2)： 47-48.5 馮宗友，薛立輝，戴厚升，等“利樂資生”通用 型復合微生物肥在草莓生產(chǎn)中的應用效果研究j.現(xiàn)代農(nóng) 業(yè)科技，2