維生素類藥物的分析48PPT課件

1、基本內(nèi)容基本內(nèi)容酯溶性酯溶性：維生素：維生素A,D,EA,D,E；水溶性水溶性：B B族維生素族維生素, ,維生素維生素C C結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)、含結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)、含量測定。量測定。維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析第1頁/共173頁掌握掌握維生素A、B1和C的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系；維生素A的紫外分光光度法和維生素C的碘量法。熟悉熟悉維生素C的2,6-二氯靛酚滴定法。了解了解維生素D和E的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系?；疽蠡疽蟮?頁/共173頁維生素維生素 是維持人體正常生理機(jī)能是維持人體正常生理機(jī)能所必需的生物活性物質(zhì)。所必需的生物活性物質(zhì)。人體不能合成維生素。人體不能合成

2、維生素。不同于其它藥物不同于其它藥物: :過多癥、缺乏癥。過多癥、缺乏癥。Ch.P Ch.P 收載的的維生素制劑有：收載的的維生素制劑有：VAVA，B B1，B B2，B B6，B B12，C C，D D2，D D3，E E，K K等等第3頁/共173頁40%的谷類和麥類主食10%乳類制品10%肉類,蛋類及豆類制品10%油,脂肪及甜品18%蔬菜 12%水果第4頁/共173頁健康的飲食：第5頁/共173頁如果人體缺少某種維生素，就如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。人體的正常生理機(jī)能。 例如例如: VA : VA 缺乏缺乏夜盲癥夜盲癥

3、 VBVB1 1缺乏缺乏腳氣病腳氣病 VDVD缺乏缺乏第6頁/共173頁第7頁/共173頁第8頁/共173頁第9頁/共173頁 脂溶性： 水溶性：按溶解性分類VA、VD( D2、D3 )、VE、VK等B族(B1、B2、B6、B12),VC ,煙酸,葉酸(VitM ),泛酸(VitPP)等第10頁/共173頁第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素A的分析的分析第11頁/共173頁(一)化學(xué)結(jié)構(gòu)CH2OR654321987654321lR=H VA醇 VA1lR= COCH3 VA醋酸酯lR= COC15H31 VA棕櫚酸酯一結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第12頁/共173頁結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)

4、鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。第13頁/共173頁1.1.溶解性：溶解性： 不溶于水不溶于水 溶于乙醚，氯仿，溶于乙醚，氯仿，異丙異丙醇醇，環(huán)己烷環(huán)己烷，脂肪和油。，脂肪和油。( (二二).).性質(zhì)性質(zhì)第14頁/共173頁無活性）氧化產(chǎn)物氧氧化劑熱光(,VA共軛多烯側(cè)鏈共軛多烯側(cè)鏈性質(zhì)非?；顫娦再|(zhì)非?；顫? .2. 不穩(wěn)定性VAHCl,VA脫水無水Lewis第15頁/共173頁CH2OHOCH2OHOCHOCOOH維生素A的氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物 維生素A醛 維生素A酸or第16頁/共173頁3.與SbCl3作用 Carr-Price反應(yīng) 鑒別 含

5、量測定 max =620nm第17頁/共173頁具有共軛多烯側(cè)鏈具有共軛多烯側(cè)鏈紫外吸收。紫外吸收。最大吸收波長在最大吸收波長在325325328nm,328nm,隨隨VAVA存在存在狀態(tài)狀態(tài)以及所用的以及所用的溶劑溶劑, ,最最大吸收波長的位置有所不同大吸收波長的位置有所不同CH2OR6543219876543214.紫外吸收第18頁/共173頁5. 存在多種立體異構(gòu)化合物存在多種立體異構(gòu)化合物側(cè)連有側(cè)連有4 4個個“= =” , ,應(yīng)有應(yīng)有 個個目前，包括維生素目前，包括維生素A A在內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)有在內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)有 6 6種異構(gòu)體。其它種異構(gòu)體。其它5 5個異構(gòu)體活性個異構(gòu)體活性僅是全反式的僅

6、是全反式的15%15%75%.75%.)16(24第19頁/共173頁CH2OH新維生素Aa 2-順式,328, 75%新維生素Ab 4-順, 319, 24%CH2OH第20頁/共173頁新維生素Ac, 2,4-二順, 311, 15%異維生素Aa 6-順, 323, 21%CH2OHCH2OH第21頁/共173頁CH2OR異維生素Ab, 2,6-二順, 324, 24%維生素A,全反式, 325328, 100%C H2O H第22頁/共173頁二.鑒別試驗(yàn)( (一一).).三氯化銻反應(yīng)三氯化銻反應(yīng) Carr-PriceCarr-Price反應(yīng)反應(yīng)藍(lán)色氯仿液3/CHCl3SbCl20IU/

7、ml)(10AV無水,無醇第23頁/共173頁注：無水，無醇條件CH2CHO+CH2+( (SbClSbCl5 5RCOO)RCOO)- -藍(lán)色藍(lán)色紫紅紫紅第24頁/共173頁(二).紫外吸收光譜BPVitAVitAHCl去水無水乙醇max為為326nm一個吸收峰一個吸收峰max為為350390nm三個吸收峰三個吸收峰去水去水VitA（VitA3）CH2CH2ORH第25頁/共173頁第26頁/共173頁三、 含量測定第27頁/共173頁 紫外分光光度法三點(diǎn)校正法CH3CH3CH3CH3CH3CH2OCOCH33.第28頁/共173頁 三點(diǎn)校正法1.概述概述共軛多烯共軛多烯UV特征特征相關(guān)物質(zhì)

8、相關(guān)物質(zhì)UV特征，特征，對測定有影響。對測定有影響。Morton和和Stubbs等人等人1946年提出了年提出了三點(diǎn)校正法。三點(diǎn)校正法。第29頁/共173頁雜質(zhì)維生素樣品AAAA2. 原理（依據(jù)、假定）物質(zhì)對光的吸收具有加和性，即物質(zhì)對光的吸收具有加和性，即維生素維生素A A中的雜質(zhì)吸收在中的雜質(zhì)吸收在310310340nm340nm范圍內(nèi)近似一條直線，且隨范圍內(nèi)近似一條直線，且隨著波長增加吸光度減小。著波長增加吸光度減小。第30頁/共173頁CH2OH效價(jià)為維生素A1的40%，max345350nm3.維生素維生素A中的中的 雜質(zhì)吸收雜質(zhì)吸收1 1）. . 相關(guān)物質(zhì)的吸收相關(guān)物質(zhì)的吸收a.

9、維生素A的衍生物維生素A2去氫維生素A第31頁/共173頁效價(jià)低于維生素A1，max385390nm維生素A3去水維生素ACH2第32頁/共173頁 d. 鯨醇：VA醇的二聚體，沒有生物活性b. 維生素A的氧化產(chǎn)物： 環(huán)氧化物，醛，酸CH2OHCH2OHCH3第33頁/共173頁f.f. 維生素維生素A A的的5 5個異構(gòu)體個異構(gòu)體e. 裂解產(chǎn)物： 儲存過程中受光照射第34頁/共173頁 以上這些相關(guān)物質(zhì)和不相關(guān)物質(zhì)，在325-328處均有吸收統(tǒng)稱為無關(guān)吸收或背景吸收，干擾VA的測定。2）. 不相關(guān)物質(zhì)：抗氧劑和稀釋用油第35頁/共173頁Ch.P收載有2種方法：第一法：等波長差法 （適用于酯

10、式維生素A的測定）第二法第二法：等吸收度法皂化法 適用于維生素適用于維生素A醇醇第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此法法第36頁/共173頁1)等波長差法：這兩個波長分別在 1兩側(cè)12nm處，即1321 1=328nm; 2 =316nm; 3=340nm第37頁/共173頁第38頁/共173頁 2)等吸光度法：VA在這兩個波長下的吸光度應(yīng)該等于1下的吸光度的6/ 7 ，即 1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm132A76AA第39頁/共173頁第40頁/共173頁)AAA2(52. 3A340316328328（校正）4. 吸收度校正公式：A328A328

11、(校）第41頁/共173頁5.維生素A醋酸酯效價(jià)計(jì)算效價(jià)(IU/g)樣= 1900 A第42頁/共173頁5.維生素維生素AD膠丸中維生素膠丸中維生素A的標(biāo)示百分含量計(jì)算公式的標(biāo)示百分含量計(jì)算公式標(biāo)示量標(biāo)示量丸丸標(biāo)示量標(biāo)示量100/IU 100%100LW1900wDA%標(biāo)示量標(biāo)示量A第43頁/共173頁6.a. 操作方法915/300 316 328 340 360iIU mlnmA 環(huán)己烷樣品溶液分別于、 、 、 、處測第44頁/共173頁1)最大吸收波長確認(rèn) max 在326329nm，計(jì)算比值差值。 max不在326329nm，第二法測定。b. 計(jì)算方法第45頁/共173頁2)計(jì)算吸收

12、度比及比值差328iAA規(guī)定值328AAil首先要計(jì)算吸收度比值 。l然后計(jì)算吸收度的比值差。第46頁/共173頁 A吸收度吸收度比值比值吸收度比值差值吸收度比值差值規(guī)定值規(guī)定值 計(jì)算值計(jì)算值3000.5553160.9073281.0003400.8113600.299328iAA328iAA規(guī)定值第47頁/共173頁規(guī)定值328iAAl 判斷差值是否超過規(guī)定值的判斷差值是否超過規(guī)定值的02. 0 第48頁/共173頁3）計(jì)算校正吸收度)AAA2(52. 3A340316328328（校正）l吸收度校正公式：第49頁/共173頁328328328P=100% AAA（校正）第50頁/共173

13、頁 小結(jié)：1. max 在326329nm，計(jì)算比值差值。 max不在326329nm，第二法測定。2. 0.02用 A328 0.02，計(jì)算A328校，求 1）3%，用 A328 2）-3%-15%，用A328校 3）-15% or+3%，第二法測定規(guī)定值328iAA328328328P=100% AAA（校正）第51頁/共173頁6.練習(xí)題：維生素AD膠丸中維生素A的含量測定已 知 ： 平 均 膠 丸 內(nèi) 容 物 重 為0.0815g維生素A的標(biāo)示量為10000IU/丸取樣：0.1279g100ml 225mlml第52頁/共173頁波長波長 吸收度吸收度 比值比值規(guī)定值規(guī)定值 比值差比值

14、差3000.3740.5553160.5840.9073280.65213400.5340.8113600.2110.299第53頁/共173頁波長波長 吸收度吸收度 比值比值規(guī)定值規(guī)定值 比值差比值差3000.3740.5740.5550.0193160.5840.8960.907-0.013280.6521103400.5340.8190.8110.0083600.2110.3390.2990.04第54頁/共173頁 首先計(jì)算吸收度比值和吸收度比值差值。（填于上表）655. 0)534. 0584. 0652. 02(52. 3A328（校正）0.6550.6521000.5%0.652

15、Pl由此可知，應(yīng)該用測得的328nm處的吸收度計(jì)算。l然后計(jì)算校正值與測定值相對偏差l由結(jié)果知，需計(jì)算校正吸收度。第55頁/共173頁100%100LW1900wDA%標(biāo)示量標(biāo)示量 = 100%0.12791100100000.65210025/20.08151900 =98.7%第56頁/共173頁%cm1E=CLAmaxA328 A328校 含量（效價(jià)）= 1900%cm1E C為混合樣品的濃度為混合樣品的濃度7. 公式推導(dǎo)：)()(%cm1%cm1純純樣樣 第57頁/共173頁%cm1E=%cm1E（環(huán)己烷)標(biāo)（環(huán)己烷)樣效價(jià)(IU/g)樣效價(jià)(IU/g)標(biāo)第58頁/共173頁效價(jià)(IU

16、/g)樣=效價(jià)(IU/g)標(biāo)%cm1E樣%cm1E標(biāo)CF第59頁/共173頁定義：每一個 數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)。換算因數(shù)%cm1E（純品）（純品）換算因數(shù)%11/IUcmEg190015302907000CF第60頁/共173頁維生素A醋酸酯:1IU=0.344g 全反式VA醋酸酯，則1g全反式VA醋酸酯相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為： =10000000.344=2907000 IU /g%cm1E（環(huán)己烷）標(biāo)=1530第61頁/共173頁維生素A醋酸酯190015302907000CF效價(jià)(IU/g)樣= 1900 %cm1E效價(jià)(IU/g)樣= 1900 第62頁/共173頁求標(biāo)示量求標(biāo)示量標(biāo)示量標(biāo)示量

17、平均丸重平均丸重100g/IU 標(biāo)示量標(biāo)示量丸丸標(biāo)示量標(biāo)示量100/IU 標(biāo)示量標(biāo)示量平均丸重平均丸重?fù)Q算因數(shù)換算因數(shù)100CA 100%100LW1900wDA%標(biāo)示量標(biāo)示量第63頁/共173頁適用于維生素適用于維生素A醇醇第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此法法第二法第二法（等吸收度法）皂化法、6/7A法 第64頁/共173頁/915/300 310 325 334iVitAViKOHSIU mlnmAAt 乙醇皂化液除去植物油的干擾異丙醇乙醚提取揮干乙醚溶解稀釋至 于、 、 、醋酸酯醇植物油甘油和肪鹽處測脂酸iAnmmlIUVitAVitAKOHS處測、于稀釋至溶解異

18、丙醇揮干乙醚除去植物油的干擾乙醚提取甘油和脂肪酸鹽植物油醇醋酸酯皂化液乙醇334325310300/159/水溶性脂溶性脂溶性iAnmmlIUVitAVitAKOHS處測、于稀釋至溶解異丙醇揮干乙醚除去植物油的干擾乙醚提取甘油和脂肪酸鹽植物油醇醋酸酯皂化液乙醇334325310300/159/iAnmmlIUVitAVitAKOHS處測、于稀釋至溶解異丙醇揮干乙醚除去植物油的干擾乙醚提取甘油和脂肪酸鹽植物油醇醋酸酯皂化液乙醇334325310300/159/iAnmmlIUVitAVitAKOHS處測、于稀釋至溶解異丙醇揮干乙醚除去植物油的干擾乙醚提取甘油和脂肪酸鹽植物油醇醋酸酯皂化液乙醇33

19、4325310300/159/iAnmmlIUVitAVitAKOHS處測、于稀釋至溶解異丙醇揮干乙醚除去植物油的干擾乙醚提取甘油和脂肪酸鹽植物油醇醋酸酯皂化液乙醇334325310300/159/第65頁/共173頁校正公式 A A325325（校） =6.815A=6.815A325325-2.555A-2.555A310310-4.260A-4.260A334334第66頁/共173頁10.300IUgA維生素 醇3330000g300. 0g101g/IU6 ）效價(jià)（效價(jià)g/IU%)(cm1 純純）效價(jià)（效價(jià)（換算因數(shù)換算因數(shù)1830效價(jià)(IU/g)樣= 18

20、30 %cm1E第67頁/共173頁8、注意事項(xiàng) （1）VA遇光易氧化變質(zhì)，操作應(yīng)半暗室中快速進(jìn)行，所用試劑不得含氧化性物質(zhì)，以防VA紫外線或氧化性物質(zhì)破壞。 第68頁/共173頁（2）用三校正法測定時，其余兩點(diǎn)均為吸收曲線的上升和下降陡坡處。對波長的正確性要求嚴(yán)格。340nm處，若波長誤差0.5nm，可影響結(jié)果-3.12.07%。所以測定時所用儀器的波長讀數(shù)應(yīng)注意，必要時應(yīng)作標(biāo)準(zhǔn)。 第69頁/共173頁(3)本法雖已用50多年，但根據(jù)雜質(zhì)吸收近似一直線的不近合理，進(jìn)行VA含量測定方法的改進(jìn)，如正交函數(shù)分光光度法，卡爾曼濾光分光光度法，高效液相色譜法。第70頁/共173頁三氯化銻比色法三氯化銻

21、比色法（二）（二）藍(lán)色藍(lán)色 3SbClVitA優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 簡便簡便 快速快速max 618 nm 620 nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 SbOClSbClOH32缺點(diǎn)缺點(diǎn)呈色不穩(wěn)定呈色不穩(wěn)定 （5 10 s 內(nèi)）內(nèi)）水分干擾水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差 1專屬性差專屬性差三氯化銻有腐蝕性三氯化銻有腐蝕性第71頁/共173頁USP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值BP雜質(zhì)對照品法顯色劑三氯化銻（三）TLC法第72頁/共173頁練習(xí)：1.維生素A醋酸酯膠丸含量測定:取內(nèi)容物39.1 mg,加環(huán)己烷溶解并稀釋成100ml，在下列五個波長處測得吸收度A值如下：第73頁/共173頁測定波長 (nm)測得

22、吸收度A值吸收度比值差值規(guī)定值計(jì)算值3000.3740.555 0.564 0.0093160.5920.907 0.892-0.0153280.6631.000 1.000 03400.5530.8110.834 0.0233600.2280.299 0.344 0.045第74頁/共173頁第75頁/共173頁練習(xí) 2. 維生素A醋酸酯膠丸含量測定:取內(nèi)容物W,加環(huán)己烷溶解并稀釋成100ml，使其濃度為 9-15IU/mL。已知內(nèi)容物平均重量為80.0mg，每丸標(biāo)示量為10 000IU。試計(jì)算W范圍。第76頁/共173頁W 10 000W D159W 10 00080.0 1001597.

23、2mgW 12mg第77頁/共173頁3.3.三點(diǎn)校正紫外分光光度法測定維生素A醋酸酯的依據(jù)是什么？4.4.三點(diǎn)波長分別是多少nmnm？吸收度校正公式是怎樣的？換算因數(shù)是多少？5. 5. 維生素A A的氯仿溶液，加三氯化銻的氯仿溶液，即顯色，漸變成色。反應(yīng)需在條件下進(jìn)行。此反應(yīng)稱作反應(yīng)。 第78頁/共173頁第二節(jié)第二節(jié) 維生素維生素B1的分析的分析第79頁/共173頁第80頁/共173頁第81頁/共173頁 N N H 3 C N H 2 C H 2 N+ S C H 3 C H 2 C H 2 O H Cl- HCl . . l一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)l1.結(jié)構(gòu)：l氯化3-（4-氨基-2-甲基嘧

24、啶-5-）甲基-5-（2-羥乙基）-4-甲基噻唑的鹽酸鹽 第82頁/共173頁 a.氨基嘧啶亞甲基噻唑環(huán)季銨化合物 b.堿性基團(tuán)： 嘧啶環(huán)上的氨基 噻唑環(huán)上的季銨可與酸成鹽 N N H 3 C N H 2 C H 2 N+ S C H 3 C H 2 C H 2 O H Cl- HCl . . 2.結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：第83頁/共173頁3.性質(zhì)1).1).溶解性溶解性: : 易溶于水易溶于水; ;水溶液呈酸性水溶液呈酸性2).UV: 2).UV: max = 246max = 246nmnm3).3).硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng): :專屬反應(yīng)專屬反應(yīng) 噻唑環(huán)噻唑環(huán)OHOH- -/ /氧化劑氧化劑硫色硫色素素

25、( (藍(lán)色熒光）藍(lán)色熒光）第84頁/共173頁3.性質(zhì)4) N4) N雜環(huán)雜環(huán)生物堿沉淀試劑生物堿沉淀試劑組成恒定沉淀；組成恒定沉淀； 兩個堿性中心兩個堿性中心非水滴定；非水滴定；5) 5) 鹽根反應(yīng)鹽根反應(yīng)硝酸銀；硝酸銀；第85頁/共173頁 二 鑒別反應(yīng)： 硫色素反應(yīng)VB1噻唑環(huán)在堿性條件下開環(huán)，與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合后，可被鐵氰化鉀K3Fe(CN)6等一些氧化劑氧化成具有熒光的硫色素，溶于正丁醇顯蘭色熒光。 N N H 3 C N H 2 C H 2 N+ S C H 3 C H 2 C H 2 O H Cl- HCl . . 第86頁/共173頁（鐵氰化鉀）溶解后維生素TS)CN(FeK

26、TS NaOHB631 藍(lán)色熒光正丁醇硫色素溶于 熒光消失 酸 堿 硫色素?zé)晒夥磻?yīng)VB1專屬反應(yīng)，用于鑒別和含量測定。第87頁/共173頁CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH 環(huán)合環(huán)合NNH3CNNSCH3C2H4OH-2H2H第88頁/共173頁 沉淀反應(yīng)VB1的含氮雜環(huán)，能和生物堿沉淀試劑反應(yīng)產(chǎn)生組成恒定的沉淀鑒別和含量測定。如：VB1與硅鎢酸反應(yīng)可生成組成一定的沉淀。 重量法測定VB1含量。第89頁/共173頁 沉淀反應(yīng)：

27、可與某些生物堿沉淀試劑生成組成恒定的沉淀如：與碘化汞鉀產(chǎn)生淡黃色沉淀 與碘生成紅色沉淀 與硅鎢酸生成白色沉淀 與苦味酸生成扇形白色結(jié)晶第90頁/共173頁 硫胺顯堿性具有兩個堿性基團(tuán): 噻唑環(huán)上的季銨 嘧啶環(huán)上的氨基可以和酸成鹽。如：鹽酸硫胺、硝酸硫胺。第91頁/共173頁 加堿分解后與硝酸鉛反應(yīng)VB1與NaOH試液一起加熱，分解產(chǎn)生Na2S，可與Pb(NO3)2反應(yīng)生成PbS的黑色沉淀。維生素B1的水溶液顯氯化物的特征反應(yīng)。 第92頁/共173頁 三. 含量測定非水滴定法（Ch.P所用方法）硅鎢酸重量法銀量法紫外分光光度法硫色素?zé)晒夥ū壬ǖ?3頁/共173頁 (一).非水滴定法：1）原理：

28、 N N H 3 C N H 2 C H 2 N+ S C H 3 C H 2 C H 2 O H Cl- HCl . . VBVB1 1分子中含有已成鹽的伯胺和季分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非水溶液中，在醋酸銨基團(tuán)，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。汞存在下，均可被高氯酸滴定。在非水溶液中與HClO4定量反應(yīng)第94頁/共173頁 溶劑溶劑：冰醋酸：冰醋酸指示劑：指示劑：喹哪定紅喹哪定紅- -亞甲藍(lán)混合指示亞甲藍(lán)混合指示液液滴定劑：滴定劑：高氯酸高氯酸醋酸汞：醋酸汞： 空白校正：空白校正：終點(diǎn)：終點(diǎn)：紫紅紫紅天藍(lán)色天藍(lán)色 T=16.86mg/ml:(T=16.86mg/m

29、l:(反應(yīng)摩爾比反應(yīng)摩爾比1:2)1:2)第95頁/共173頁 （二）（二）UV法法適用于適用于片劑和注射劑片劑和注射劑Ph=1,max=246nm, Ph=1,max=246nm, E=421E=421。pH=7, max=232nm, pH=7, max=232nm, E=345; max=266nm, E=345; max=266nm, E=255E=255第96頁/共173頁（三）硫色素?zé)晒夥ǎㄈ┝蛏責(zé)晒夥晒饬蛏禺惗〈艰F氰化鉀 1VitBNaOH2 2、激發(fā)波長激發(fā)波長 ex=365nmex=365nm發(fā)射波長發(fā)射波長 em=435nmem=435nm第97頁/共173頁標(biāo)準(zhǔn)對

30、照法標(biāo)準(zhǔn)對照法特點(diǎn)特點(diǎn)（1）靈敏度高，線性范圍寬）靈敏度高，線性范圍寬（2）適用于）適用于VB1和制劑含量和制劑含量,氧化產(chǎn)氧化產(chǎn)物不干擾物不干擾(3)代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析第98頁/共173頁什么叫做硫色素反應(yīng)？非水滴定法測定時，加入醋酸汞試液的目的第99頁/共173頁第三節(jié)維生素第三節(jié)維生素C的分析的分析第100頁/共173頁第101頁/共173頁第102頁/共173頁第103頁/共173頁一.化學(xué)結(jié)構(gòu)OO HOH OHCC H2O HHO H第104頁/共173頁 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1. 旋光性 VC分子中具有2個手性C原子，具有4種光學(xué)異構(gòu)體。其中生理活性

31、最強(qiáng)的是L（+）抗壞血酸第105頁/共173頁OO HOH OHCC H2O HHO HOO HO HCHOO HC H2O HHOO HOH OHCC H2O HHH OOO HO HCHOC H2O HH OHlD(-)-異抗壞血酸lL(+)-異抗壞血酸L(+)-抗壞血酸lD(-)-抗壞血酸 CLD20+20.5 21.5 0.1g/mL水溶液第106頁/共173頁2. 酸性烯二醇結(jié)構(gòu)酸性。 C3-OH， pKa=4.17(共軛效應(yīng)) C2-OH，pKa=11.57(鄰位羰基)v 一元酸. 能與NaHCO3作用生成鈉鹽。OO HOH OHCC H2O HHO H第107頁/共173頁3.

32、水解反應(yīng):具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)L-二酮古羅糖酸 (無生物活性)OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaONa2CO3NaOHCOONaOCOCCHOHHOCHCH2OH單鈉鹽單鈉鹽32CONa酮酸鹽酮酸鹽水解水解 NaOHOCOHHCH2OHOOOOCOHHCH2OHOOHOHCH2OHCCCCCOONa(H)HHHOOHOOOOH_(H+)H2O第108頁/共173頁4.強(qiáng)還原性 具有烯二醇基。能夠被氧化成去氫抗壞血酸。5.糖的性質(zhì)（Molisch）6.紫外吸收：0.1mol/L HCl max =245nm 中性溶液 max =265nm 。OO HOH O

33、HCC H2O HHO H第109頁/共173頁OHOH OOO（黑色）AgAgNOVC3（試液本身為紅色）無色二氯吲哚酚-2,6VC二鑒別試驗(yàn)1.還原性:烯二醇基還原性如：第110頁/共173頁藍(lán)色熒光鄰苯二胺去氫抗壞血酸 OVC2. 熒光反應(yīng)3. 糖的性質(zhì)（Molisch）類似糖結(jié)構(gòu)，具有糖的性質(zhì)。藍(lán)色藍(lán)色糠醛糠醛吡咯吡咯脫水脫水 HVitC 50 50 水解脫羧第111頁/共173頁OCOHHCH2OHOOHOHHI2OC OHHCH2OHOOOHI2反應(yīng)的摩爾比是1 1三含量測定 1. 碘量法 a. 原理第112頁/共173頁 b. 操作 樣品 新沸放冷的水，稀HAc 終點(diǎn)顏色：無色藍(lán)

34、色0.05mol/L碘液 T 8.806mg /mLC6H8O6淀粉 0.05mol/L 碘 第113頁/共173頁 c. 討論 1）反應(yīng)條件 酸性 使VC在空氣中氧化速度減慢。 2) 溶劑 新沸放冷的水。 減少水中溶解氧的影響。第114頁/共173頁 3)還原性物質(zhì)的影響及排除 VC注射液中常加有亞硫酸鹽如NaHSO3作為抗氧劑. 排除：加入丙酮或甲醛。NaHSO3C OCH3CH3CCH3CH3O HSO3N a第115頁/共173頁2. 2,6-二氯吲哚酚滴定法 原理： 在酸性下 氧化型是紅色的;還原型是無色的 酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定劑自身的顏色變化指示終點(diǎn)，不需要另

35、外的指示劑。三含量測定第116頁/共173頁OCOHHCH2OHOOHOHO HC lC lNO HOC OHHCH2OHOOOO HC lC lN HO H終點(diǎn)的顏色是溶液由無色變?yōu)榧t色氧化型（紅色）還原型（無色）+第117頁/共173頁第四節(jié)維生素第四節(jié)維生素D的分析的分析第118頁/共173頁第119頁/共173頁第120頁/共173頁一 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱目前已知的維生素D類至少十多種。均屬于甾醇衍生物。 CH2HHOCH3HHCH3CH3CH3HCH3維生素D2第121頁/共173頁CH2HHOCH3HHCH3CH3CH3維生素D3 維生素D2、D3結(jié)構(gòu)相近

36、，D2比D3多一個雙鍵和一個甲基。第122頁/共173頁 性質(zhì)：性質(zhì)：（1 1）脂溶性維生素；）脂溶性維生素；（2 2）旋光性）旋光性:D:D2 2有有6 6個個,D,D3 35 5個手性個手性C C；（3 3）不穩(wěn)定性）不穩(wěn)定性 遇光、空氣及氧遇光、空氣及氧化劑氧化變質(zhì)；化劑氧化變質(zhì)；（4 4）顯色反應(yīng)（甾體母核反應(yīng)）與）顯色反應(yīng)（甾體母核反應(yīng)）與強(qiáng)酸反應(yīng)呈色；強(qiáng)酸反應(yīng)呈色；（5 5）紫外吸收。）紫外吸收。 第123頁/共173頁1、顯色反應(yīng)（1）與醋酐-硫酸反應(yīng)：維生素維生素D D2 2,D,D3 3加氯仿溶解加氯仿溶解加醋酐和硫酸加醋酐和硫酸振搖振搖, ,呈呈色。色。（2）與三氯化銻反應(yīng)

37、：維生素維生素D D2 2、D D3 3加加1 1，2 2二氯乙烷溶解二氯乙烷溶解加三氯化銻試液加三氯化銻試液橙紅色，逐漸變?yōu)榉奂t色。橙紅色，逐漸變?yōu)榉奂t色。二）鑒別第124頁/共173頁 2 2、維生素D D2 2、D D3 3的區(qū)別 取本品10mg10mg溶于96%96%乙醇10ml10ml中取出0.1ml0.1ml加乙醇1ml1ml和85%85%硫酸5ml5ml。 維生素D D2 2顯紅色，maxmax為570nm570nm 維生素D D3 3顯黃色，maxmax為495nm495nm第125頁/共173頁 三）含量測定VD D的含量測定,各國藥典方法不一。USPUSP采用化學(xué)法采用化學(xué)

38、法, ,色譜法和微生物法；色譜法和微生物法；BPBP采用化學(xué)法、光譜法和色譜法；采用化學(xué)法、光譜法和色譜法；Ch.PCh.P采用正相高效液相色譜法采用正相高效液相色譜法。第126頁/共173頁 Ch.P采用正相高效液相色譜法。1 1）色譜條件：色譜柱：硅膠為填充劑流動相：正己烷- -正戊醇（997997：3 3）紫外檢測器：波長254nm254nm2 2）測定: :分第一法、第二法、第三法無VAVA及其他物質(zhì)干擾，采用第一法；有干擾采用第二法（皂化提?。?；第二法不能消除干擾，采用第三法（柱分離）。第127頁/共173頁第五節(jié)維生素第五節(jié)維生素E的分析的分析第128頁/共173頁第129頁/共1

39、73頁第130頁/共173頁一化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458名稱：消旋dldl生育酚醋酸酯母核：苯駢二氫吡喃衍生物 苯環(huán)上有一乙酰化的酚羥基側(cè)鏈：脂肪烷烴第131頁/共173頁 二、鑒別試驗(yàn) 1.硝酸反應(yīng) 本品，無水乙醇溶解，加硝酸，75加熱約15分鐘，顯橙紅色。2.水解后氧化反應(yīng)(三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)) 本品，在堿性條件下水解，得生育酚，在聯(lián)吡啶和三氯化鐵試液的作用下，反應(yīng)產(chǎn)生血紅色配離子。第132頁/共173頁3、UV吸收：VE的0.01%無水乙醇液： max=284nm =41.045.5min=254nm%cm1E第133頁/共173

40、頁第134頁/共173頁三、雜質(zhì)檢查檢查游離生育酚: 275取0.1g樣品，按鈰量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，以二苯胺為指示劑，消耗Ce(SO4)2液不得超過1.0ml。第135頁/共173頁游離生育酚檢查:取0.1g樣品,按鈰量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定,以二苯胺為指示劑,消耗Ce(SO4)2液不得超過1.0ml,求限量(a.M生育酚=430.7)。%100供試品量允許雜質(zhì)存在的最大量雜質(zhì)限量第136頁/共173頁C V MS 100%L=a0.01 1.0 430.7=2.15% 100%L=0.1 1000 2第137頁/共173頁TVS 100%

41、L=b2.1541.00.10 1000 100%=2.15%b. T=2.154mg/mL第138頁/共173頁四、含量測定（一）鈰量法1.原理：VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸鈰定量地氧化為對生育醌，過量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。終點(diǎn)：亮黃灰紫 空白試驗(yàn)第139頁/共173頁四、含量測定（一）鈰量法2. 反應(yīng)條件1）VE在H2SO4酸性條件下水解為宜。 堿性溶液中游離生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中進(jìn)行,如在堿性中會生成堿式鹽而影響測定。第140頁/共173頁2 2）Ce(SOCe(SO4 4) )2 2溶于酸水溶液,不溶于醇,生育酚溶于醇而不溶于水

42、,滴定過程中應(yīng)有一定濃度的乙醇。3）本法適用于純度高的VE供試品。4)化學(xué)計(jì)量關(guān)系：1：2CH3C16H33OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458+2Ce4+HO對生育醌+ 2Ce3+第141頁/共173頁（二）氣相色譜法：Ch.P1、色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱， 內(nèi)裝硅藻土（80100目） 固定相：硅酮（OV-17） 涂布濃度 2% 載氣：N2 流速:含2%固定相：以1820分鐘為宜； 含5%固定相：以3032分鐘為宜第142頁/共173頁l柱溫：265l內(nèi)標(biāo)：正三十二烷l檢測器：FID（氫火焰離子化檢測器）l性能要求：理論

43、塔板數(shù)n按VE峰計(jì)算應(yīng)不低于500，VE峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度R應(yīng)大于2。第143頁/共173頁2、溶液配制：l內(nèi)標(biāo)溶液：正三十二烷的環(huán)己烷溶液 （1.0mg/ml）l對照溶液：對照品溶解于內(nèi)標(biāo)溶液中 (2.0mg/ml)l供試品溶液：供試品約20mg，用內(nèi)標(biāo)溶液，溶解并稀釋至10ml 第144頁/共173頁 3、供試品測定 mg=fAxMs/As Ax ：供試品峰面積 f：校正因子 As ： 內(nèi)標(biāo)物的峰面積4、特點(diǎn)： （1）簡便快速,專屬性強(qiáng),適用于VE、VE制劑及多種維生素制劑中VE的測定。 （2）需要特殊儀器第145頁/共173頁CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3CH3COOCH3

44、CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3CO N N H 3 C N H 2 C H 2 N+ S C H 3 C H 2 C H 2 O H Cl- HCl . . abc第146頁/共173頁掌握掌握維生素A、B1和C的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系；維生素A的紫外分光光度法和維生素C的碘量法。熟悉熟悉維生素C的2,6-二氯靛酚滴定法。了解了解維生素D和E的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系?；疽蠡疽蟮?47頁/共173頁1 在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng)水在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng)水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產(chǎn)生藍(lán)解、脫羧、失水后，加入吡咯即產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是 A. 氯氮卓氯氮

45、卓 B. 維生素維生素 A C. 普魯卡因普魯卡因 D. 鹽酸嗎啡鹽酸嗎啡 E. 維生素維生素 C第148頁/共173頁2 中國藥典（中國藥典（2005年版）采用以下何年版）采用以下何法測定維生素法測定維生素E含量含量 A. 酸堿滴定法酸堿滴定法 B. 氧化還原法氧化還原法 C. 紫外分光光度法紫外分光光度法 D. 氣相色譜法氣相色譜法 E. 非水滴定法非水滴定法第149頁/共173頁3 中國藥典（中國藥典（2005年版）采用氣相色年版）采用氣相色譜法測定維生素譜法測定維生素E含量，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為含量，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為 A. 正二十二烷正二十二烷 B. 正二十六烷正二十六烷 C. 正三十烷正三十烷 E.

46、 正三十六烷正三十六烷 第150頁/共173頁4. 下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍(lán)色熒光的化鉀后，再加正丁醇，顯藍(lán)色熒光的是是 A. 維生素維生素A C. 維生素維生素C D. 維生素維生素D E. 維生素維生素E第151頁/共173頁第152頁/共173頁第153頁/共173頁7. 測定維生素測定維生素C注射液的含量時，注射液的含量時，在操作過程中要加入丙酮，這是為了在操作過程中要加入丙酮，這是為了 A. 保持維生素保持維生素C的穩(wěn)定的穩(wěn)定 B. 增加維生素增加維生素C的溶解度的溶解度 C. 使反應(yīng)完全使反應(yīng)完全 D. 加快反應(yīng)速度加快反應(yīng)速

47、度第154頁/共173頁 8. 能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物是是 A. 維生素維生素A C. 維生素維生素C D. 維生素維生素E E. 煙酸煙酸第155頁/共173頁 9 使用碘量法測定維生素使用碘量法測定維生素C的含量的含量,已已知維生素知維生素C的分子量為的分子量為176.13，每，每1ml碘滴定碘滴定液液(0.05mol/L) 相當(dāng)于維生素相當(dāng)于維生素C的量為的量為 A. 17.61mg C. 176.1mg D. 88.06mg E. 1.761mg第156頁/共173頁10：121125（10：121125） 可發(fā)生以下反應(yīng)或現(xiàn)象的藥物為可發(fā)生以下反應(yīng)或現(xiàn)象

48、的藥物為 A.維生素維生素B1 B.維生素維生素C C.兩者均能兩者均能 D.兩者均不兩者均不能能 121.與碘化汞鉀生成黃色沉淀與碘化汞鉀生成黃色沉淀 122.麥芽酚反應(yīng)麥芽酚反應(yīng) 123.在乙醚中不溶在乙醚中不溶 124.與與2,6-二氯靛酚反應(yīng)使顏色消失二氯靛酚反應(yīng)使顏色消失 125.硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng)第157頁/共173頁 11 維生素維生素A的鑒別試驗(yàn)為的鑒別試驗(yàn)為 A. 三氯化鐵反應(yīng)三氯化鐵反應(yīng) B. 硫酸銻反應(yīng)硫酸銻反應(yīng) C. 2,6-二氯靛酚反應(yīng)二氯靛酚反應(yīng) D. 三氯化銻反應(yīng)三氯化銻反應(yīng) E. 間二硝基苯的堿性乙醇液反間二硝基苯的堿性乙醇液反應(yīng)應(yīng)第158頁/共173頁 12 中國藥典（中國藥典（2005年版）規(guī)定維生素年版）規(guī)定維生素A的測定采用紫外分光光度法（三點(diǎn)校正的測定采用紫外分光