植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（一）實(shí)驗(yàn)名稱：參觀植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)時(shí)間：第二周（分組進(jìn)行）實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜?shí)驗(yàn)室的構(gòu)建和掌握各種常川儀器設(shè)備的操作方法和使川注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、藥品及試劑高壓蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)架、超凈工作臺(tái)、1/100電子天平、1/10000電子天平、蒸錨水器、iaa、6-ba、naa、kt,各種無(wú)機(jī)鹽，有機(jī)化合物等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法及步驟參觀準(zhǔn)備室、無(wú)菌操作室和培養(yǎng)室，學(xué)習(xí)使用各種常川儀器。四、分析與討論1. 基本的實(shí)驗(yàn)室至少要包括準(zhǔn)備室、無(wú)菌-操作室和培養(yǎng)室，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要可以設(shè)立 輔助實(shí)驗(yàn)室，如細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室和?；瘜?shí)驗(yàn)室等

2、。2. 準(zhǔn)備室耍求寬敞明亮、便于放置多個(gè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)和相關(guān)設(shè)備，方便多人同時(shí)工作；同時(shí)要求 通風(fēng)條件好，便于氣體交換；實(shí)驗(yàn)室地面應(yīng)便丁清潔，并應(yīng)進(jìn)行防滑處理；無(wú)菌操作室也叫 接種室，進(jìn)行材料的離體無(wú)菌操作，是植物組織培養(yǎng)研究或主產(chǎn)中最關(guān)鍵的一步，要求房間 一般不宜過(guò)大，封閉性好，干燥清潔，能較心時(shí)間保持無(wú)菌；培養(yǎng)室要求能夠控制光照、溫 度，并保持相對(duì)的無(wú)菌環(huán)境因此，培養(yǎng)室應(yīng)保持清潔和適度干燥。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（二）實(shí)驗(yàn)名稱：母液的配制實(shí)驗(yàn)時(shí)間：第五、六周（分組進(jìn)行）實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹Ｕ莆崭鞣N營(yíng)養(yǎng)元索和激索母液的配制方法，二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、藥品及試劑（1）

3、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及用具1/100電子天平、1/10000電子天平、蒸懈水器、燒杯、棕色細(xì)口瓶、量筒、移液槍、各種規(guī)格的定容瓶、100ml、500ml燒杯、標(biāo)簽紙、記號(hào)筆等（2）實(shí)驗(yàn)藥品及試劑iaa、6ba、naa、kt,各種無(wú)機(jī)鹽,o.lmol/lnaoh 溶液,0.1mol/lhci 溶液。三、實(shí)驗(yàn)方法及步驟1. 20倍大量元素母液的配制。在電子天平上按ms基本培養(yǎng)基配方擴(kuò)大20倍分別稱取所需要的5鐘大量元素藥吊，分別置t 500ml的燒杯中中，加蒸懈水100ml左右，攪拌溶解，然后一一倒入1000ml的容暈瓶屮（注意caci2要后加）,最后加蒸館水定容至刻度，此為20倍液的人量元素母液。2.

4、200倍微量元索母液的配制。在1/10000電子天平上按配方擴(kuò)大200倍分別稱取微量元素藥品,按大量元素母液配制 方法，配成200倍液的微暈元素母液。3. 200倍恢鹽母液的配制。在天平上按配方擴(kuò)大200倍稱取feso4.7h2 o和na2-edta藥品，配成200倍液的鐵鹽母液。4. 有機(jī)物母液：用分析天平按表分別稱取甘氨酸vb1、vb3、vb6、肌醇，配成200 倍有機(jī)物質(zhì)母液。5. 激素母液的配制。按1 mg/ml濃度稱取激素，川少量酒粘溶解后，加熬館水定容。四、分析與討論1.水質(zhì)。山于自來(lái)水中有ca2+,會(huì)與大量元素中的so42-產(chǎn)生沉淀，故母液應(yīng)用蒸綿 水配制。2配制順序。相遇會(huì)發(fā)生

5、沉淀的藥品錯(cuò)開(kāi)加入，使其在低濃度下相遇，避免沉淀。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（三）實(shí)驗(yàn)名稱：培養(yǎng)基的配制及滅菌實(shí)驗(yàn)時(shí)間：第八、九周（分紐進(jìn)行）實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。掌握給定配方的培養(yǎng)基的配制方法及滅菌方法。二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備用具、藥品及試劑高壓蒸汽滅菌鍋、1/100電子天平、蒸館冰器、電磁爐、iaa、6-ba. naa、kt母液、o.lmol /lnaoh溶液、0.1mol/l hci溶液、ph試紙、瓊脂、蔗糖、玻璃棒。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法及步驟瓊脂+蒸館冰加熱溶化大量元素微量元索混合_定容培養(yǎng)笊_k洗滌、控壬1mo/lhci粉裝入培養(yǎng)瓶丿川蓋滅菌配方為：ms+iaa

6、10mg/l+kt0.1 mg/l+瓊脂 7.5g/l+蔗糖 30g/l, ph6.0。%1. 分析與討論1.ph值。ph值應(yīng)調(diào)節(jié)到6.0,否則培養(yǎng)基會(huì)過(guò)碩或過(guò)軟。2滅菌。溫度121125°c之間，維持1520分鐘，且要將滅菌鍋中的冷空氣排盡,否則會(huì)造成滅菌不徹底。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告（四）實(shí)驗(yàn)名稱：外植體的消毒和接種實(shí)驗(yàn)時(shí)間：第十一、十二周（分組進(jìn)行）實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆胀庵搀w的表面消毒和接種的操作方法和操作注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、藥品試劑及實(shí)驗(yàn)材料超凈工作臺(tái)、空調(diào)、紫外燈、槍型鍛子、解剖刀、0.1%hgcb溶液、75%酒 精、無(wú)菌

7、水、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、胡蘿卜形成層組織。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法及步驟1 外植體的表面消毒外植體放入滅菌的小燒杯中 一k 70%酒精浸泡15-30秒（不斷晃動(dòng)） 一倒出酒也加入消毒劑氯化汞8分鐘（不斷晃動(dòng)）一 倒出消毒劑加入無(wú)菌振搖數(shù)次將水倒掉（反復(fù)3-4次）。2接種操作（1）用消毒的器械切取適當(dāng)大小的胡蘿卜形成層組織，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。（2）左手拿住培養(yǎng)瓶，靠近酒精燈火焰，將瓶口傾斜，右手小指和無(wú)名指配合 夾住棉塞，打開(kāi)瓶口，將瓶口在火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒。（3）用消毒的躡子夾出胡蘿卜形成層組織，立即平放入培養(yǎng)瓶中，塞上棉塞， 包上包頭紙，寫(xiě)上fi期、接種材料和接種人。四、分析與討論1 消毒的要求外植體

8、上帶的一切微生物都?xì)⑺?，同時(shí)又不能損傷組織材料，保持外植體的生活力，使之在良好的培養(yǎng)條件下很快恢復(fù)生機(jī)，正常生長(zhǎng)。2 貴重或稀少的材料，切勿用大的培養(yǎng)瓶，適于用小三角瓶或試管，每瓶只接種個(gè)外植體，以免交叉污染。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（五）實(shí)驗(yàn)名稱：繼代培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)時(shí)間：實(shí)習(xí)周實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)口的。掌握植物組織培養(yǎng)繼代培養(yǎng)基的配制方法，進(jìn)一部熟悉高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、藥殆及試劑高壓蒸汽滅菌鍋、1/100電子天平、蒸懈水器、電磁爐、iaa、6-ba. naa、kt母液、0.1mol/lnaoh溶液、0.1mol/lhci溶液、ph試紙、

9、瓊脂、蔗糖、玻璃棒。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法及步驟配 方：配方為：ms+naa0.1mg/l+6ba1.0mg/l+瓊脂 7.5g/l+蔗糖 30g/l, ph6.0。步驟：瓊脂+蒸錨水k加熱溶彳 1 mol/l naoh人量元索微量元素混合定容培養(yǎng)笊一洗滌、控壬1mo/lhci於裝入培養(yǎng)瓶ju蓋滅菌四、分析與討論ph值應(yīng)調(diào)節(jié)到6.0,否則培養(yǎng)基會(huì)過(guò)便或過(guò)軟。滅菌溫度121125°cz間，維持1520分鐘，且要將滅菌鍋中的冷空氣排盡，否則會(huì)造成滅菌不徹底。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)(六)實(shí)驗(yàn)名稱：培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間：實(shí)習(xí)周實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参锝M織

10、培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)的方法和注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、藥品及試劑超凈工作臺(tái)、空調(diào)、紫外燈、槍型銀子、解剖刀、75%酒精、繼代培養(yǎng)基、 組織組織初代培養(yǎng)物。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法及步驟(1) 用消毒的鐵子將初代培養(yǎng)物夾出，放入滅菌的培養(yǎng)皿中，用消毒的剪刀或 解剖刀進(jìn)行切割。(2) 左手拿住裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，靠近酒精燈火焰，將瓶口傾斜，右手小指 和無(wú)名指配合夾住棉塞，打開(kāi)瓶口，將瓶口在火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒。(3) 用消毒的銀了夾住經(jīng)切割的培養(yǎng)物，立即放入培養(yǎng)瓶中，塞上棉塞，包上 包頭紙，寫(xiě)上n期、接種材料和接種人。四、分析與討論操作時(shí)動(dòng)作要迅速，使初代培養(yǎng)物在工作臺(tái)中停留的吋間盡量短，h要在酒 精燈火焰的正前方進(jìn)行操作，以減少污染的幾率。切割時(shí)，要盡量保留住初代培 養(yǎng)物的生長(zhǎng)點(diǎn)，否則不能產(chǎn)生叢芽。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（七）實(shí)驗(yàn)名稱：試管苗的生根和移栽實(shí)驗(yàn)時(shí)間：實(shí)習(xí)周實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室專 業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆赵嚬苊绲纳鸵圃缘姆椒叭粘９芾怼６?、?shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、藥品及試劑培養(yǎng)架、超凈工作臺(tái)、生根培養(yǎng)基、苗圃等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法及步驟1試管苗的生根。將大約1cm長(zhǎng)的枝條苗逐個(gè)切下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)5天左右，試管苗即開(kāi)