純化水微生物限度檢查法確認(rèn)方案

1、 純化水微生物限度檢查法驗(yàn)證方案編 制 人編制日期 年 月 日審 核 人審核日期 年 月 日批 準(zhǔn) 人批準(zhǔn)日期 年 月 日生效日期 年 月 日變更記載：原編號(hào) 批準(zhǔn)日期 生效日期 變更原因：目 錄1.引言1.1概述1.2目的1.3驗(yàn)證小組成員1.4相關(guān)文件2.驗(yàn)證的準(zhǔn)備3.驗(yàn)證的內(nèi)容4.偏差的出現(xiàn)及處理5.驗(yàn)證評(píng)價(jià)及結(jié)論6. 再驗(yàn)證周期7.會(huì)審及批準(zhǔn)1引言1.1概述純化水微生物限度檢查法是采用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行確認(rèn)純化水細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)測(cè)定。確保該方法的可行性，確保制藥用水的安全性，滿足生產(chǎn)檢驗(yàn)的要求同時(shí)保證所檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。1.2 目的純化水微生物限度檢查法是采用薄膜過(guò)濾法，確認(rèn)該方法合于

2、純化水細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)測(cè)定1.3驗(yàn)證小組成員小組職務(wù)姓名所在部門職務(wù)職責(zé)組長(zhǎng)負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)小組的行動(dòng)，跟進(jìn)驗(yàn)證方案的審批流程，記錄小組的行動(dòng)，協(xié)調(diào)與其他部門及小組成員內(nèi)的交流，組織驗(yàn)證數(shù)據(jù)并文件化。負(fù)責(zé)方案、報(bào)告審批。成員負(fù)責(zé)方案與報(bào)告的編寫，并組織執(zhí)行、收集、整理、復(fù)核數(shù)據(jù)，監(jiān)督實(shí)施過(guò)程。成員負(fù)責(zé)確認(rèn)方案與報(bào)告的審核。成員按照確認(rèn)方案進(jìn)行驗(yàn)證。成員按照確認(rèn)方案進(jìn)行驗(yàn)證。1.4 相關(guān)文件1.4.1 所用儀器設(shè)備使用、清潔、維護(hù)和保養(yǎng)操作規(guī)程1.4.2所用儀器設(shè)備使用說(shuō)明書。2.驗(yàn)證的準(zhǔn)備2.1驗(yàn)證前必須對(duì)設(shè)備所用儀表進(jìn)行校驗(yàn)，且在有效期內(nèi)。2.2驗(yàn)證試驗(yàn)過(guò)程中所用的標(biāo)準(zhǔn)儀器在使用前和全部過(guò)程結(jié)束

3、以后要進(jìn)行校正。2.3驗(yàn)證試驗(yàn)所用的清潔器具和玻璃容器應(yīng)按SOP程序清潔并符合要求。3驗(yàn)證的內(nèi)容3.1 儀器設(shè)備：3.1.1薄膜過(guò)濾器3.1 2蒸汽滅菌器3.1.3電熱恒溫培養(yǎng)箱 3.1.4電熱恒溫干燥箱3.1.5凈化工作臺(tái) 3.2 驗(yàn)證用培養(yǎng)基（表1）名稱生產(chǎn)廠家批號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基驗(yàn)證菌株代數(shù)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌3.3 驗(yàn)證用菌株（表2）3.4菌液制備 3.4.1接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時(shí)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯

4、草芽孢桿菌在營(yíng)養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-610-7約為50100cfuml的菌懸液備用。3.4.2接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于2328培養(yǎng)2448小時(shí)。取經(jīng)2328培養(yǎng)2448小時(shí)的白色念珠菌改良馬丁液體培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100cfuml的菌懸液備用。3.4.3將已培養(yǎng)好的黑曲霉菌，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50100cfuml的菌懸液備用。3.5菌液計(jì)數(shù)(每種菌液接種2個(gè)平皿)3.5.1取大

5、腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置2328培養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)數(shù)。3.5.2菌落計(jì)數(shù)結(jié)果(cfu/ml)(2個(gè)平皿計(jì)數(shù)取平均值)見(jiàn)下表試驗(yàn)次數(shù)10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉3.6驗(yàn)證方法：細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證至少應(yīng)進(jìn)行3

6、次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。3.6.1驗(yàn)證日期：201 年 月 日至201 年 月 日。3.6.2供試品名稱及取樣點(diǎn)：純化水；取樣點(diǎn)：1 2 3 3.6.3試驗(yàn)組：取純化水1ml和50100cfu試驗(yàn)菌加至同一個(gè)濾膜中，再加100ml的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液過(guò)濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，計(jì)數(shù)。3.6.4供試品對(duì)照組：取純化水1ml至濾膜中，再加100ml的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液過(guò)濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，平行制備2個(gè)平皿，計(jì)數(shù)。3.6.5稀釋劑對(duì)照組：取0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液100ml和50100c

7、fu試驗(yàn)菌加至同一個(gè)濾膜中過(guò)濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，計(jì)數(shù)。3.6.6結(jié)果見(jiàn)表獨(dú)立試驗(yàn)一：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率%） 取樣點(diǎn)： 試驗(yàn)時(shí)間： 年 月 日 完成時(shí)間： 年 月 日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組個(gè)/ml（回收率%）菌液組個(gè)/ml供試品對(duì)照組個(gè)/ml稀釋劑對(duì)照組個(gè)/ml（回收率%）大腸埃希菌12平均值金黃色葡萄球菌12平均值枯草芽孢桿菌12平均值白色念珠菌12平均值黑曲霉12平均值備注：試驗(yàn)組及菌液組的霉菌及酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)后開(kāi)始計(jì)數(shù)，供試品對(duì)照組的霉菌及酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)后疑有菌落，但不宜觀察，所以霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)以培養(yǎng)96小時(shí)后計(jì)數(shù)為準(zhǔn)，

8、試驗(yàn)周期為4天。結(jié)論：本次試驗(yàn)各試驗(yàn)組的菌回收率和各稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均不低于70%，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，本次試驗(yàn)結(jié)果 規(guī)定。復(fù)核人： 試驗(yàn)人： 獨(dú)立試驗(yàn)二：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率%） 取樣點(diǎn)： 試驗(yàn)時(shí)間： 年 月 日 完成時(shí)間： 年 月 日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組個(gè)/ml（回收率%）菌液組個(gè)/ml供試品對(duì)照組個(gè)/ml稀釋劑對(duì)照組個(gè)/ml（回收率%）大腸埃希菌12平均值金黃色葡萄球菌12平均值枯草芽孢桿菌12平均值白色念珠菌12平均值黑曲霉12平均值備注：試驗(yàn)組及菌液組的霉菌及酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)后開(kāi)始計(jì)數(shù)，供試品對(duì)照組的霉菌及酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)后疑有菌落，但不宜觀察，所以霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)以培養(yǎng)96小

9、時(shí)后計(jì)數(shù)為準(zhǔn)，試驗(yàn)周期為4天。結(jié)論：本次試驗(yàn)各試驗(yàn)組的菌回收率和各稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均不低于70%，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，本次試驗(yàn)結(jié)果 規(guī)定。復(fù)核人： 試驗(yàn)人： 獨(dú)立試驗(yàn)三：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率%） 取樣點(diǎn)： 試驗(yàn)時(shí)間： 年 月 日 完成時(shí)間： 年 月 日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組個(gè)/ml（回收率%）菌液組個(gè)/ml供試品對(duì)照組個(gè)/ml稀釋劑對(duì)照組個(gè)/ml（回收率%）大腸埃希菌12平均值金黃色葡萄球菌12平均值枯草芽孢桿菌12平均值白色念珠菌12平均值黑曲霉12平均值備注：試驗(yàn)組及菌液組的霉菌及酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)后開(kāi)始計(jì)數(shù)，供試品對(duì)照組的霉菌及酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)后疑有菌落，但不宜觀察，所以霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)以培養(yǎng)96小時(shí)后計(jì)數(shù)為準(zhǔn)，試驗(yàn)周期為4天。結(jié)論：本次試驗(yàn)各試驗(yàn)組的菌回收率和各稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均不低于70%，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，本次試驗(yàn)結(jié)果 規(guī)定。復(fù)核人： 試驗(yàn)人： 4. 偏差的出現(xiàn)及處理當(dāng)出現(xiàn)偏差時(shí)應(yīng)分析偏差原因并提出處理意見(jiàn)。偏差： 檢查人： 日期： 年 月 日5.驗(yàn)證評(píng)價(jià)及結(jié)論5.1 驗(yàn)證評(píng)價(jià)：試驗(yàn)組、供試品對(duì)照組、稀釋劑對(duì)照組、菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的各項(xiàng)內(nèi)容和指標(biāo)進(jìn)行總的評(píng)價(jià)。5.2 驗(yàn)證建議：試驗(yàn)組、供試品對(duì)照組、稀釋劑對(duì)照組、菌落計(jì)數(shù)結(jié)果均應(yīng)符合4項(xiàng)驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)。如有少量數(shù)據(jù)超過(guò)上述標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)由驗(yàn)證小組成員分析找出不合格原因，修訂驗(yàn)證方案，再實(shí)施，直至