實驗一：檢測生物組織中的糖類-脂肪-蛋白質(zhì)2頁

1、 實驗 檢測生物組織中還原糖、脂肪和蛋白質(zhì)一、實驗原理：某些化學試劑能使生物組織中的有關(guān)有機化合物，產(chǎn)生特定的顏色反應。5065水浴 顏色反應: 還原糖+斐林試劑 磚紅色沉淀 淀粉 +碘液 藍色 脂肪 +蘇丹/ 橘黃色/紅色 蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑 紫色絡合物二、實驗步驟：待測樣液2ml斐林1ml（甲液和乙液混合）5065水浴加熱3min觀 察 1、檢測還原糖 2、花生子葉薄片1片染色2min（蘇丹染液）洗浮色（50%酒精）觀 察檢測脂肪3、檢測蛋白質(zhì)待測樣液2ml雙縮脲A液1ml雙縮脲B液4滴觀 察待測樣液2ml碘液2滴觀 察4、檢測淀粉注意事項：還原糖的檢測和觀察： 還原糖有葡萄糖，

2、果糖，麥芽糖；甲乙液必須等量混合均勻后再加入樣液中，現(xiàn)配現(xiàn)用；必須用水浴加熱 脂肪的鑒定：切片要薄，如厚薄不均就會導致觀察時有的地方清晰，有的地方模糊。  酒精的作用是：洗去浮色  需使用顯微鏡觀察  使用不同的染色劑染色時間不同蛋白質(zhì)的鑒定：先加A液1ml，再加B液4滴鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對比加熱資料一：生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗 糖分子內(nèi)沒有，為非還原糖。 可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試 劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的Cu 2O沉

3、淀。如： 葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH     葡萄糖酸 + Cu 2O（磚紅色）+ H 2O即Cu 2+被還原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液變化過程為：淺藍色棕色磚紅色沉淀淀粉遇碘變藍色（直鏈）或紫（紅）色（支鏈）。 資料二：脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的正常成分，脂類的主要功能是氧化供能。脂肪主要存積于脂肪組織中，并以油滴狀的微粒存在脂肪細胞內(nèi)。蘇丹三染液其實是蘇丹三固體顆粒溶于高濃度乙醇（70%-95%,多用95%）配制而成的,而脂肪同樣較易溶于高濃度乙醇,所以染色時間長了就會讓樣品中的脂肪溶

4、解,洗浮色的時候被洗掉,就觀察不到了。 在病理檢驗中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹，蘇丹，蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色，實際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。臨床上常對組織切片進行染色觀察。 資料三：蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應。（蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應。） 資料四：在實驗中液體的材料可以直接利用，而有些固體的材料需經(jīng)過處理后才能用于實驗。如蘋果、蘿卜、梨、西瓜等可以支撐勻漿過濾后利用。一種檢測脂肪的方法：取少量生物組織，制成臨