生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義2009年5月實(shí)驗(yàn)一 糖的顏色反應(yīng)和還原反應(yīng)1糖的顏色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?1. 掌握莫式（Molisch）試驗(yàn)鑒定糖的原理和方法。2. 掌握塞式（Seliwanoff）試驗(yàn)鑒定酮糖的原理和方法。3. 掌握杜式(Tollen)試驗(yàn)鑒定戊糖的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理1莫式試驗(yàn)：糖經(jīng)無機(jī)酸（濃硫酸、濃鹽酸）脫水產(chǎn)生糠醛或糠醛衍生物，后者在濃無機(jī)酸作用下，能與-萘酚生成紫紅色縮合物。2塞式試驗(yàn)：酮糖在濃酸的作用下，脫水生成5-羥甲基糠醛，后者與間苯二酚作用，呈紅色反應(yīng)；有時亦同時產(chǎn)生棕紅色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鮮紅色溶液。3杜式試驗(yàn)：戊糖在濃酸溶液中脫水生成糠醛，后者與間苯三酚結(jié)合成櫻桃

2、紅色物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)儀器及用品儀器：水浴鍋。器皿：吸管、試管。實(shí)驗(yàn)藥品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、-萘酚、濃硫酸、95%乙醇、間苯二酚、鹽酸、間苯三酚。實(shí)驗(yàn)試劑 莫式試劑：-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀釋至100ml?，F(xiàn)用現(xiàn)配，并貯于棕色試劑瓶中。 塞式試劑：間苯二酚50mg，溶于100ml鹽酸（VH2O：VHCl=2:1），現(xiàn)用現(xiàn)配。 杜式試劑：2%間苯三酚乙醇溶液（2g間苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml,緩緩加入濃鹽酸15ml及蒸餾水9ml。臨用時配制。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟一、莫式實(shí)驗(yàn)于4支試管中，分別加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少許纖維素（棉花或

3、濾紙浸在1 ml水中），然后各加莫式試劑2滴，搖勻，將試管傾斜，沿管壁慢慢加入濃硫酸1.5 ml（切勿振搖！），硫酸層沉于試管底部與糖溶液分成兩層，觀察液面交界處有無紫色環(huán)出現(xiàn)。二、塞式試驗(yàn)于4支試管中，分別加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式試劑2.5ml，搖勻，同時置沸水浴內(nèi)，比較各管顏色及紅色出現(xiàn)的先后順序。 三、杜式試驗(yàn)于3支試管中加入杜式試劑1ml，再分別加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混勻。將試管同時放入沸水浴中，觀察顏色的變化，并記錄顏色變化的時間。四、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象記錄仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)中的顏色變化，對于塞式試驗(yàn)和杜式試驗(yàn)還需記

4、錄下顏色變化的時間。2糖的還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?掌握糖的還原反應(yīng)來鑒定糖的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理費(fèi)林(Fehling)試劑和本尼迪(Benedict)試劑均為含Cu2+的堿性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身則被還原成紅色或黃色的Cu2O，此法常用作還原糖的定性或定量測定。實(shí)驗(yàn)儀器及用品實(shí)驗(yàn)儀器：水浴鍋實(shí)驗(yàn)器皿：吸管、試管實(shí)驗(yàn)試劑：硫酸酮、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、檸檬酸鈉、無水碳酸鈉、淀粉、蔗糖、葡萄糖。實(shí)驗(yàn)試劑1. 費(fèi)林試劑試劑A：CuSO4·5H2O 34.5 g,溶于蒸餾水并稀釋至500 ml。試劑B：氫氧化鈉125 g，酒石酸鉀鈉137 g，溶于蒸餾水并稀釋至500

5、ml。臨用時將試劑A與試劑B等體積混合。2. 本尼迪試劑：檸檬酸鈉（Na3C6H3O7·11H2O）及50 g無水碳酸鈉，溶于400 ml蒸餾水中。另溶解8.5 g硫酸銅于50 ml熱水中。將硫酸銅溶液緩緩加入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如有沉淀可過濾。此混合液可長期使用。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟于3支試管中加入費(fèi)林試劑A和B各1 ml，混勻，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，取出，冷卻，觀察各管的變化。另取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，然后每支試管加本尼迪試劑2 ml，置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，取出，

6、冷卻，和上面結(jié)果比較。實(shí)驗(yàn)二 3,5-二硝基水楊酸比色法測定糖的含量一、目的 通過本實(shí)驗(yàn)，掌握還原糖定量測定的基本原理，練習(xí)比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度計(jì)的使用方法。 二、原理 在堿性條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊酸共熱，3,5-二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，520nm 波長下測定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可分別求出樣品中還原糖的含量。三、試劑1 1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取100mg分析純葡萄糖（預(yù)先在80烘至恒重），置于小燒杯中，用

7、少量蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)移到100ml的容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆谩?23,5-二硝基水楊酸試劑：甲試劑為6.9g結(jié)晶酚溶于15.2ml10%NaOH溶液中并用水稀釋至69ml，在此溶液中加入6.9g亞硫酸氫鈉。乙試劑為255g酒石酸鉀鈉溶于300ml10%NaOH溶液中，再加入880ml 1% 3,5-二硝基水楊酸溶液。將甲、乙二液混合貯于棕色瓶中，室溫放7-10天后使用。3待測還原糖溶液四、操作步驟 制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線并測定待樣品中還原糖含量 取12支大試管，編號，按下表操作。管號012345678樣品樣品樣品葡萄糖溶液（ml）00.20.40.60.81.01.2

8、1.41.6000待測液（ml）0000000001.01.01.0蒸餾水（ml）2.01.81.61.41.21.00.80.60.41.01.01.0水楊酸試劑（ml）1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.51.51.5沸水浴5min，取出立即冷水冷至室溫，加水21.5ml，混勻OD520nm以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，換算成濃度單位即為樣品的還原糖濃度。 五、注意事項(xiàng) 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測定應(yīng)同時進(jìn)行，一起顯色和比色。 實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?1掌握鑒定

9、蛋白質(zhì)的原理和方法。2熟悉蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。3進(jìn)一步掌握蛋白質(zhì)的相關(guān)性質(zhì)。一顏色反應(yīng)蛋白質(zhì)分子中的某種或某些基團(tuán)與顯色劑作用，可產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)，不同蛋白質(zhì)所含氨基酸不完全相同，顏色反應(yīng)亦不同。顏色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)的專一反應(yīng)，一些非蛋白質(zhì)物質(zhì)亦可產(chǎn)生相同顏色反應(yīng)，因此不能僅根據(jù)顏色反應(yīng)的結(jié)果來決定被測物是否是蛋白質(zhì)。顏色反應(yīng)是一些常用蛋白質(zhì)定量測定的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)試劑及材料1卵清蛋白液：將雞蛋白用蒸餾水稀釋20-40倍，2-3層紗布過濾，濾液冷藏備用。2米倫試劑：40gHg溶于60ml濃硝酸，水浴加溫助溶，溶解后加兩倍體積蒸餾水，混勻，靜置澄清，取上清液備用，此試劑可長期保存。3粉末狀尿素410%

10、NaOH51%硫酸銅溶液60.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀釋至100ml。7濃硝酸實(shí)驗(yàn)原理米倫反應(yīng)：米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物，能與苯酚及某些二羥苯衍生物起顏色反應(yīng)，生成紅色的鄰醌肟類化合物。組成蛋白質(zhì)的氨基酸只有酪氨酸為羥苯衍生物，因此具有此反應(yīng)者即為酪氨酸存在之確證。雙縮脲反應(yīng)：將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性環(huán)境中，能與硫酸銅結(jié)合成紅紫色的絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵與縮脲結(jié)構(gòu)相似，故能呈此反應(yīng)。該反應(yīng)可用于蛋白質(zhì)的定性及定量測定。黃色反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子中含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等）。

11、遇硝酸可硝化成黃色物質(zhì)，此物質(zhì)在堿性環(huán)境中變?yōu)殚冱S色的硝苯衍生物。茚三酮反應(yīng)：蛋白質(zhì)與茚三酮共熱，則產(chǎn)生藍(lán)紫色的還原茚三酮、茚三酮和氨的縮合物。此反應(yīng)為一切蛋白質(zhì)及除脯氨酸和羥脯氨酸外的-氨基酸所共有。含氨基酸的其他物質(zhì)亦呈此反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟1米倫反應(yīng)（1）置0.5%苯酚溶液1ml于試管中，加米倫試劑約0.5ml，小心加熱，觀察顏色變化。（2）取2ml蛋白溶液，加0.5ml米倫試劑，此時蛋白沉淀，小心加熱，觀察現(xiàn)象。2. 雙縮脲反應(yīng)（1）取少許結(jié)晶尿素放在干燥試管中，微火加熱，尿素熔化并形成雙縮脲，釋出的氨可用紅色石蕊試紙?jiān)囍?。至試管?nèi)有白色固體出現(xiàn)，停止加熱，冷卻。然后加10%NaOH

12、溶液1ml搖勻，再加2滴1%CuSO4溶液，混勻，觀察有無紫色出現(xiàn)。（2）另取一支試管，加蛋白質(zhì)溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1% CuSO4溶液2滴，混勻，觀察是否出現(xiàn)紫玫瑰色。3. 黃色反應(yīng)于一試管內(nèi)，加入蛋白質(zhì)溶液10滴及濃硝酸3-4滴，加熱，冷卻后再加10%NaOH溶液5滴，觀察顏色變化。4. 茚三酮反應(yīng)取1ml蛋白質(zhì)溶液置于燒杯中，加2滴茚三酮試劑，加熱至沸，即有藍(lán)紫色出現(xiàn)。二沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理多數(shù)蛋白質(zhì)在水溶液中由于其分子表面可形成水化層及雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體溶液，當(dāng)其穩(wěn)定因素被破壞或與某些試劑結(jié)合成不溶解的鹽后，即產(chǎn)生沉淀。蛋白質(zhì)鹽析作用：向蛋白質(zhì)溶液中

13、加入中性鹽至一定濃度，蛋白質(zhì)即沉淀析出，這種作用稱為鹽析。當(dāng)降低鹽類濃度時，該沉淀又能溶解，這是一可逆過程。乙醇沉淀蛋白質(zhì)：乙醇為脫水劑，能破壞蛋白質(zhì)質(zhì)點(diǎn)的水化層使其沉淀出來。重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)與重金屬離子結(jié)合成不溶性復(fù)合物而沉淀。生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)：植物體內(nèi)具有顯著生理作用的含堿性化合物稱為生物堿，能沉淀生物堿或與其產(chǎn)生顏色反應(yīng)的物質(zhì)稱為生物堿試劑，如鞣酸、苦味酸、磷鎢酸等。蛋白質(zhì)和生物堿含有相似的含氮基團(tuán)，所以能與生物堿試劑結(jié)合生成沉淀。實(shí)驗(yàn)試劑及材料1 蛋白質(zhì)試液：見一2 粉末狀硫酸銨結(jié)晶體3 飽和硫酸銨溶液：4 95%乙醇5 1%醋酸鉛6 5%鞣酸溶液7 1%硫酸銅溶液8 飽

14、和苦味酸溶液9 1%醋酸溶液。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟1蛋白質(zhì)鹽析作用（1）取蛋白質(zhì)溶液5ml，加入等量飽和硫酸銨溶液，微微搖動試管，使溶液混合靜置幾分鐘，球蛋白即析出。倒出少量沉淀加少量水，觀察是否溶解。（2）將上述混合液過濾，濾液中加硫酸銨粉末，至不再溶解，析出的即為清蛋白。再加水稀釋，觀察是否溶解。2乙醇沉淀蛋白質(zhì)取蛋白質(zhì)溶液1ml，加晶體NaCl少許，待溶解后再加入95%乙醇2ml混勻。觀察有無沉淀析出。3重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)取試管2支，各加蛋白質(zhì)2ml，一管內(nèi)滴加1%醋酸鉛溶液，另一管內(nèi)滴加1%CuSO4溶液，至有沉淀生成。傾去上清，向沉淀中加水，觀察是否溶解。四、生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)取2支試管

15、各加2ml蛋白質(zhì)溶液及1%醋酸溶液4-5滴，向一管中加5%鞣酸溶液數(shù)滴，另一管內(nèi)加飽和苦味酸溶液數(shù)滴，觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1在雙縮脲反應(yīng)中，硫酸銅不能多加。2茚三酮反應(yīng)需在pH5-7下進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)四 甲醛滴定法測定氨基氮初步掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點(diǎn)。（一）原理氨基酸是兩性電解質(zhì)，在水溶液中有如下平衡：R-CH（NH3+）-COO R-CH（NH2）COO + H+-NH3+是弱酸，完全解離時pH為11-12或更高，若用堿滴定-NH3+釋放的H+來測量氨基酸，一般指示劑變色域小于10，很難準(zhǔn)確指示終點(diǎn)。常溫下，甲醛能迅速與氨基酸的氨基結(jié)合，生成羥甲基化合物，使上述平衡右移，促

16、使-NH3+釋放H+，使溶液的酸度增加，滴定終點(diǎn)移至酚酞的變色域內(nèi)（pH9.0左右）。因此，可用酚酞作指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)的氫氧化鈉溶液滴定。（二）試劑11%酚酞酒精溶液：稱1g酚酞溶于100ml 60%乙醇20.05%溴麝香草酚蘭溶液：0.05g溴麝香草酚蘭溶于100ml 20%乙醇溶液31%甘氨酸溶液4標(biāo)準(zhǔn)0.05N NaOH溶液：可用0.100N標(biāo)準(zhǔn)鹽酸液標(biāo)定5中性甲醛溶液：50ml甲醛，加入0.5%酚酞指示劑3ml，滴加0.1NNaOH使溶液呈微粉紅色。（三）操作：取3個100ml錐形瓶，編號。向第1、2號瓶內(nèi)各加入甘氨酸溶液（或樣品）2ml和水5ml，混勻。向3號瓶內(nèi)加入7ml水。然后向三

17、個瓶中各加入中性甲醛溶液5ml，0.05%溴麝香草酚蘭溶液2滴及1%酚酞酒精溶液5滴，混勻后用0.05NNaOH溶液滴定至微紅色。（四）計(jì)算氨基氮（mg/ml）=（VV0）× NNaOH ×14.008 / 2V：滴定待測液耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均毫升數(shù)。V0：滴定對照液（3號瓶）耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均毫升數(shù)。NNaOH：標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的真實(shí)當(dāng)量濃度。實(shí)驗(yàn)五 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?了解并掌握雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中蛋白質(zhì)與銅離子形成紫色配合物，在540nm處有最大吸收。在一

18、定濃度的范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)和濃度與雙縮脲反應(yīng)所呈的顏色深淺成正比，可用比色法定量測定。實(shí)驗(yàn)儀器及用品實(shí)驗(yàn)器材：容量瓶、試管、吸管、722型（或7220型）分光光度計(jì)。實(shí)驗(yàn)試劑：1、雙縮脲試劑：0.175g CuSO4·5H2O溶于約15 ml蒸餾水，置于100 ml容量瓶中，加入30 ml濃氨水，30 ml冰冷的蒸餾水和20 ml飽和NaOH溶液，搖勻，室溫放置2h，再加蒸餾水至刻度，搖勻備用。2、牛血清白蛋白（1mg/ml）溶液3、未知濃度蛋白樣品實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟制作蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并測定樣品中蛋白含量。 取10支大試管，編號，按下表操作。管號0123456樣品樣品樣品標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液（

19、ml）00.30.60.91.21.51.8000待測液（ml）00000001.51.51.5蒸餾水（ml）3.02.72.42.11.81.51.21.51.51.5雙縮脲試劑（ml）2.02.02.02.02.02.02.02.02.02.0充分混勻，即有紫色出現(xiàn)，用540nm光測定各管吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，在坐標(biāo)紙上繪制出濃度-吸光度曲線，測出未知液的吸光度后，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出未知液的濃度。繪制濃度-吸光度曲線。 實(shí)驗(yàn)六 醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的操作，了解電泳技術(shù)的一般原理。實(shí)驗(yàn)原理醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維素薄膜作為支持物的電泳方法。帶

20、電物質(zhì)在電場力作用下，向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象稱為電泳。由于各種蛋白質(zhì)都有特定的等電點(diǎn)，如將蛋白質(zhì)置于pH值低于其等電點(diǎn)的溶液中，則蛋白質(zhì)將帶正電荷而向負(fù)極移動。反之，則向正極移動。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子在電場中移動的速度與其帶電量、分子的形狀及大小有關(guān)，所以，可用電泳法將不同的蛋白質(zhì)分離開來。血清中含有多種蛋白質(zhì)，它們的等電點(diǎn)都在pH 7.5以下。將血清置于pH 8.6的緩沖液電泳時，所有的血清蛋白都帶有負(fù)電荷，在電場中將向正極移動。由于各種血清蛋白在相同pH時所帶電荷數(shù)量不等，分子顆粒大小不一，因而泳動速度不同，經(jīng)電泳被分離開來。血清蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量見下表。蛋白質(zhì)名稱等電點(diǎn)（pI）相

21、對分子質(zhì)量清蛋白4.8869 0001-球蛋白5.00200 0002-球蛋白5.06300 000-球蛋白5.129 000150 000-球蛋白6.857.50156 000300 000本實(shí)驗(yàn)以醋酸纖維素薄膜（簡稱CAM）為支持物分離血清中的不同蛋白質(zhì)。它是一種良好的呈均一泡沫狀疏松薄膜，厚約120m，滲透性強(qiáng)，對分子移動無阻力，用它作區(qū)帶電泳的支持物，具有用量少，分離清晰，無吸附作用，應(yīng)用范圍廣和快速簡便等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白等方面。實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑1材料：健康人血清或雞血清。2儀器：電泳儀、電泳槽。3試劑：（1）醋酸纖維素薄膜（2×8cm）：市售成品（2

22、）pH8.6巴比妥緩沖液（離子強(qiáng)度0.060.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥鈉6.38克，加蒸餾水加熱溶解后，定容至500ml。（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸餾水40ml混勻。（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸5ml，蒸餾水50ml混合。（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。實(shí)驗(yàn)方法1浸泡：將醋酸纖維素膜條浸入巴比妥緩沖液中浸泡20min后取出，用吸水紙吸去多余緩沖液。2點(diǎn)樣：仔細(xì)辯認(rèn)薄膜的粗糙面與光滑面，將薄膜平鋪在玻璃板上（粗糙面朝上），用玻棒蘸上血清樣品，涂于蓋玻片邊緣處（邊緣長度應(yīng)比膜條寬度窄），再在膜條

23、一端2cm處接觸，樣品即呈一條狀涂于薄膜上。待血清完全滲入薄膜后，將膜面翻轉(zhuǎn)，點(diǎn)樣面（粗糙面）朝下，置電泳槽中，薄膜點(diǎn)樣端放于負(fù)極一側(cè)。注意：樣品應(yīng)點(diǎn)在薄膜的粗糙面一側(cè)。3電泳：打開電源，調(diào)節(jié)電壓110130V，電流0.40.6 mA/cm寬，電泳時間4560分鐘，電泳完畢后，關(guān)閉電源。4染色漂洗：將薄膜從電泳槽中取出，直接浸入染色液中約5分鐘，再轉(zhuǎn)入漂洗液中反復(fù)浸洗34次，直至背景顏色脫凈為止。此時，正常血清蛋白在薄膜上顯示出五條區(qū)帶。從前端至點(diǎn)樣處的方向分別為清蛋白、1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白及-球蛋白。5定量測定：將膜條用濾紙壓平吸干，按區(qū)帶分段剪開，分別浸在體積0.4mol/L氫氧化鈉溶液中，并剪取相同大小的無色帶膜條作空白對照，進(jìn)行比色?；蛘邔⒏稍锏碾娪緢D譜膜條放入透明液中浸泡23分鐘后，取出貼于潔凈玻璃板上，干燥后，即為透明薄膜圖譜，可用光密度計(jì)直接測定。注意事項(xiàng)1點(diǎn)樣好壞是電泳圖譜是否清晰的關(guān)鍵，點(diǎn)樣量要適當(dāng)。2漂洗時應(yīng)多漂洗幾次，直至無蛋白區(qū)底色脫凈為止。實(shí)驗(yàn)七 氨基酸的紙層析實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?了解并掌握氨基酸紙層析法的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理用濾紙為支持物進(jìn)行層析的方法，稱為紙層析法。紙層析所用的展層