獸醫(yī)臨床中的藥敏試驗(yàn)作用和意義

1、獸醫(yī)臨床中的藥敏試驗(yàn)作用和意義目前由各種細(xì)菌所引起的疾病給畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失, 阻礙了養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展 , 所以使用抗菌藥預(yù)防和治療細(xì)菌性疾病成了畜禽養(yǎng)殖過程中的一項(xiàng)重要工作。但由于養(yǎng)殖過程中不科學(xué)的、盲目的濫用抗菌藥, 細(xì)菌的耐藥性問題正變得越來越突出 , 不少耐藥菌株可耐受多種抗生素。由此而造成的危害十分嚴(yán)重, 它不僅使抗菌藥的療效降低 , 療程延長(zhǎng) , 死亡率升高和治療費(fèi)用增加。這不僅給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失 , 而且耐藥菌株可能會(huì)將耐藥性基因由動(dòng)物轉(zhuǎn)移給人類, 對(duì)人類健康也造成潛在威脅。因此, 臨床上應(yīng)合理應(yīng)用抗菌藥, 以避免或減少耐藥性的產(chǎn)生,而合理應(yīng)用抗菌藥控制畜禽疾病的

2、一項(xiàng)重要內(nèi)容就是通過藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)臨床用藥,以充分發(fā)揮抗菌藥療效 , 并盡可能減少其不良影響。一、什么是藥敏試驗(yàn) ? 抗菌藥物敏感性試驗(yàn) (antimicrobial susceptibility test,ast),簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn), 是指對(duì)敏感性不能預(yù)測(cè)的分離菌株進(jìn)行試驗(yàn), 測(cè)試抗菌藥在體外對(duì)病原微生物有無抑制作用 , 以指導(dǎo)選擇治療藥物和了解區(qū)域內(nèi)常見病原菌耐藥性變遷, 有助于經(jīng)驗(yàn)性治療選藥。藥敏試驗(yàn)是獸醫(yī)臨床工作中的一項(xiàng)基本技能, 也是使用抗菌藥物治療前必不可少的一道環(huán)節(jié)。二、藥敏試驗(yàn)的意義1、可以相對(duì)快速有效地檢測(cè)病原菌對(duì)各種抗菌藥的敏感性, 指導(dǎo)臨床合理用藥。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)是在體外對(duì)已經(jīng)分離的

3、細(xì)菌進(jìn)行藥敏, 不需要生物載體 , 不需要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物, 操作相對(duì)簡(jiǎn)單 , 成本相對(duì)降低。是一種既經(jīng)濟(jì)又有效的方法。2、可以對(duì)流行病學(xué)調(diào)查進(jìn)行監(jiān)控, 控制和預(yù)防耐藥菌株的流行。因?yàn)殡S著新型致病菌的不斷出現(xiàn) , 各種致病菌對(duì)不同的抗菌藥的敏感性不同, 同一細(xì)菌的不同菌株對(duì)不同抗菌藥的敏感性也有差異。進(jìn)行有效的藥敏試驗(yàn)可以及時(shí)掌握各種新型菌種和菌株的耐藥性 , 對(duì)流行病學(xué)調(diào)查建立監(jiān)控, 同時(shí)采取相應(yīng)的措施也就可以控制和預(yù)防耐藥菌株的流行。3、為臨床用藥提供參考依據(jù)。因?yàn)橐粋€(gè)正確的藥敏試驗(yàn)結(jié)果, 可作為臨床獸醫(yī)和畜禽養(yǎng)殖者選用有效抗菌藥的參考。長(zhǎng)期以來, 由于各種致病菌耐藥性的產(chǎn)生使各種常用抗菌藥藥效下

4、降或消失。不能很好的掌握藥物對(duì)細(xì)菌的敏感程度, 不但造成藥物浪費(fèi) , 而且還延誤病情 , 給養(yǎng)殖戶造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。近十幾年, 在肉雞生產(chǎn)中 , 為了控制大腸桿菌及某些細(xì)菌感染, 一些抗菌藥物的盲目使用 , 導(dǎo)致耐藥菌株越來越多。根據(jù)已進(jìn)行的大量藥敏試驗(yàn)結(jié)果, 大腸桿菌、沙門氏菌對(duì)曾經(jīng)敏感的氨基糖苷類、氟喹諾酮類等, 均產(chǎn)生了不同程度的耐藥性, 經(jīng)常發(fā)現(xiàn)對(duì)十幾種常用抗菌藥都不敏感的菌株。這是一個(gè)非常危險(xiǎn)的信號(hào)。所以在臨床疾病防治工作中,要取得較好的治療效果 , 應(yīng)擴(kuò)大常規(guī)抗菌藥種類進(jìn)行藥敏試驗(yàn), 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果 ,選擇敏感藥物 , 且應(yīng)注意交替用藥 , 按療程投藥 , 這樣才能收到較好的

5、治療效果。三、常用的藥敏試驗(yàn)方法獸醫(yī)臨床常用的藥敏試驗(yàn)方法主要有兩種, 即擴(kuò)散法和稀釋法。其中擴(kuò)散法屬手工測(cè)試方法 , 通過測(cè)試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小, 判斷細(xì)菌對(duì)該種藥物是否敏感。稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法, 通過測(cè)試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長(zhǎng)情況, 判斷其最低抑菌濃度 (mic)。由于擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)單 , 成本低 , 已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法, 目前牛津杯法和打孔法在獸醫(yī)臨床已較少應(yīng)用。以下簡(jiǎn)單介紹紙片法。1、藥敏紙片的制作紙片法中使用的藥敏紙片目前市場(chǎng)上已有較多廠家的產(chǎn)品銷售。但也可根據(jù)需要自制 , 具體

6、自制的方法如下 : 取質(zhì)量較好的定性濾紙 , 用普通的打孔器打成直徑6mm 的圓形小紙片。取圓紙片 50 片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中, 以單層牛皮紙?jiān)诨虬?。?jīng)15 磅 15-20 分鐘高壓滅菌后 , 置于 3 7溫箱或烘箱中數(shù)天 , 使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml 計(jì), 在上述含有 50 片紙片的小瓶?jī)?nèi)加入藥液0.5ml, 不時(shí)翻動(dòng) , 使濾紙片將藥液均勻吸凈 ,一般浸泡 30 分鐘即可。同時(shí)在記錄藥物名稱, 于 37溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時(shí)間不宜過長(zhǎng) , 以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低溫下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮 , 置陰暗干燥處或家用冰箱中保存

7、, 有效期 4-6 個(gè)月。2、藥液的制備自制藥敏紙片時(shí)還需自行配制抗菌藥液。抗菌藥的稀釋劑通常用蒸餾水。一般可按商品藥使用說明書上的配料或飲水濃度, 按 1g 需加多少毫升水或配多少毫克飼料, 就相當(dāng)于配制藥液所加蒸餾水的毫升數(shù)。如10g 藥物可配 50kg 飼料, 其換算方法為 :1g 本品加 5000ml蒸餾水。此溶液液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。3、試驗(yàn)操作方法在超凈工作臺(tái)中或酒精燈旁, 用無菌棉簽或經(jīng)酒精燈火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物 , 以劃線方式將菌液均勻涂布到平皿中的固體培養(yǎng)基表面。然后用無菌鑷子將紙片放于固體培養(yǎng)基表面并輕壓, 使紙片與培養(yǎng)基表面完全接觸。為了能準(zhǔn)確觀察結(jié)果

8、 , 要求藥敏紙片均勻分布于培養(yǎng)基上, 位置安排適中 , 防止出現(xiàn)抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應(yīng)大于2 4mm,可在平皿中央貼一片 , 外周等距離貼 5-6片。記住每種藥敏紙片的名稱。貼完紙片的平皿15 分鐘后再置于 37溫箱中培養(yǎng)16-24 小時(shí), 觀察記錄結(jié)果。以藥敏紙片周圍沒有肉眼可見生長(zhǎng)物區(qū)域?yàn)橐志? 根據(jù)抑菌圈直徑大小判斷細(xì)菌對(duì)抗菌藥的敏感性。藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)抑菌圈直徑 ( 毫米) 敏感性 20 極敏感 15-20 高敏感 10-14 中敏感 實(shí)踐證明 , 利用自制藥敏紙片進(jìn)行藥敏試驗(yàn), 可以靈活選藥 , 與某病菌相關(guān)的藥物均可隨時(shí)制作藥敏紙片用于治療?？稍诒緢?chǎng)藥品范圍內(nèi)或本

9、地區(qū)容易買到的藥品中選出最敏感的藥物。還可在短時(shí)間內(nèi)選擇最佳藥品和最佳劑量, 既能縮短病程 ,又能避免盲目用藥 , 減少浪費(fèi)。四、根據(jù)藥敏試驗(yàn)選藥原則完成藥敏試驗(yàn)后 , 應(yīng)根據(jù)結(jié)果選擇敏感性較高, 同時(shí)價(jià)廉、易得、安全的藥物進(jìn)行治療 , 以減少耐藥菌株 , 同時(shí)還應(yīng)注意以下原則 : 1、在選擇高敏藥物時(shí)還應(yīng)考慮藥物的吸收途徑。因?yàn)樗幟粼囼?yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸 , 而在給畜禽用藥時(shí) , 必須通過機(jī)體的吸收才能使藥物發(fā)揮療效, 所以在給畜禽用藥時(shí) , 高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法, 并予以足夠劑量、足夠療程, 才會(huì)取得好的治療效果。2、藥敏試驗(yàn)結(jié)果僅為臨床選擇高敏藥物的參考。因動(dòng)物機(jī)體及環(huán)境等

10、因素影響, 藥物的藥敏試驗(yàn)與臨床治療效果的符合率一般為70-80%,所以也不能過分地依賴藥敏試驗(yàn)。如發(fā)現(xiàn)療效不顯著應(yīng)及時(shí)換藥。3、藥敏試驗(yàn)確定的首選藥物不是一成不變。隨著藥物使用頻率的增加及新特藥的不斷出現(xiàn) , 細(xì)菌對(duì)原先的高敏感藥物可能不再敏感。因此, 定期進(jìn)行藥敏試驗(yàn)了解本場(chǎng)細(xì)菌對(duì)抗菌藥的敏感性情況是很有必要的。4、窄譜抗生素能解決的問題不選廣譜抗生素, 一種抗生素可達(dá)到治療作用時(shí),不要用兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用。必須應(yīng)用兩種抗生素時(shí), 應(yīng)選擇聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用的藥物。5、避開已經(jīng)使用過的藥物或其同類藥物, 發(fā)病期間已用過的藥物或同類藥物一般不用。四、影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果的因素在以紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)

11、時(shí), 以下幾方面因素可影響試驗(yàn)的結(jié)果: 1、培養(yǎng)基 : 首先應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)需要選擇適宜的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的成分的不同 , 不僅影響敏感菌株的生長(zhǎng)繁殖并可影響到抑制圈的直徑。一般細(xì)菌, 如大腸桿菌及葡萄球菌可使用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂 ; 做磺胺類藥物敏感試驗(yàn)時(shí)應(yīng)選用無蛋白胨平板; 鏈球菌和巴氏桿菌可用綿羊血瓊脂平板。其次, 傾注平板時(shí) , 厚度應(yīng)合適 ( 約 5-6mm),不可太薄 ,一般 90mm 直徑的培養(yǎng)皿 , 傾注培養(yǎng)基 18-20ml 為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì) , 如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性, 胸腺嘧啶核苷和對(duì)氨苯甲酸(paba)能拮抗磺胺藥和 t mp的活性

12、。2、細(xì)菌接種量 : 細(xì)菌接種量應(yīng)恒定 , 如太多 , 抑菌圈變小 , 能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。3、藥物濃度 : 藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果, 需精確配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。4、培養(yǎng)時(shí)間 : 一般細(xì)菌培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37 12 -24 小時(shí), 有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素 , 可將已放好藥敏紙片的培養(yǎng)基先置4冰箱內(nèi) 2-4 小時(shí), 使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散, 然后再放 37溫箱中培養(yǎng) , 可以推遲細(xì)菌的生長(zhǎng) , 而得到較明顯的抑菌圈。五、藥敏試驗(yàn)存在的問題當(dāng)前進(jìn)行藥敏試驗(yàn)仍然存在一些問題, 主要包括以下幾方面 : 1、方法學(xué)不統(tǒng)一 , 沒有標(biāo)準(zhǔn)化。2、市場(chǎng)提供的藥敏

13、試驗(yàn)的培養(yǎng)基、藥敏紙片等缺乏嚴(yán)格質(zhì)控, 質(zhì)量難以保證。所以還是建議按要求自制藥敏紙片。3、因需要先進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng), 所以藥敏試驗(yàn)報(bào)告出結(jié)果時(shí)間長(zhǎng), 檢驗(yàn)與臨床缺乏溝通 , 對(duì)于基層獸醫(yī)站或養(yǎng)殖場(chǎng) , 藥敏結(jié)果不能滿足臨床治療要求, 容易延誤治療時(shí)機(jī)。但根據(jù)有關(guān)報(bào)道, 也可進(jìn)行簡(jiǎn)易的藥敏試驗(yàn) , 方法如下 : 無菌取病死畜禽的部分肝、脾等組織 , 按 1: 5 加生理鹽水研磨制成懸液, 靜置 5 分鐘, 用無菌吸管吸懸液, 加兩滴于營(yíng)養(yǎng)瓊脂板上 , 涂布均勻 ,5 分鐘后貼上藥敏試紙 , 培養(yǎng)、觀察抑菌圈大小。4、對(duì)于部分營(yíng)養(yǎng)需求較高的細(xì)菌或微生物, 如鏈球菌和支原體 , 臨床上較難培養(yǎng), 限制了藥敏試驗(yàn)的應(yīng)用。5、部分養(yǎng)殖