2022年細胞生物學實驗測試題

1、細胞生物學實驗測試題1、試述熒光顯微鏡的原理和用途。（并操作）原理：熒光顯微鏡是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。（濾光鏡片：獲得所需波長的激發(fā)光；光源：高壓汞燈）用途：熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質， 如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光， 熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。2、試述酸性磷酸酶顯示法的原理及主要步驟。原理：酸性磷酸酶（ acp ）是溶酶體的標志酶，通常酸性磷酸酶在p

2、h為 5 左右時發(fā)揮作用能水解磷酸酯而釋放出磷酸基，po43- 與底物中硝酸鉛反應生成磷酸鉛沉淀物。 由于這些沉淀物是無色的， 需再與黃色的硫化銨反應，生成棕黃色到棕黑色的硫化鉛沉淀而被顯示出來。其反應過程如下：- 甘油磷酸鈉 +酸性磷酸酶甘油 +po43- po43-+pb(no3)2 pb3(po4)2pb3(po4)2+(nh4)2s pbs ( 棕黑色 ) 主要步驟：1、 前處理：獲取小白鼠或大白兔腹腔液（豬肝） 2 、 制片：（1） 、將腹腔液（肝細胞懸液）滴一滴于冰凍的干凈載玻片上，用牙簽涂開，自然干燥。（2） 、放入 10% 中性福爾馬林固定液中固定30min。（3） 、蒸餾水中

3、漂洗 ,3-5 次。 （洗去固定液）（4） 、磷酸酶作用液， 37c ，30min。（5） 、蒸餾水中漂洗 3 次，5min 一次。 （洗去游離鉛離子）（6） 、1% 硫化銨處理（ 3-5min）; （7） 、吉姆沙染液復染 15min; （使細胞核、輪廓顯示出來）（8） 、制片觀察。結果： 陽性細胞內有大小不等的棕色或棕黑色的顆粒即為酸性磷酸酶。對照實驗：標本放入作用液前先用高溫（50）處理 30min ，使酶失去活性，做好標記，其他步驟相同。3、試述 dna的 feulgen 染色法的原理及主要步驟。原理：dna 經(jīng)稀鹽酸（ 1mol/l hcl溶液）處理后，可使嘌呤堿與脫氧精品學習資料

4、可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 1 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 1 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -核糖間的糖苷鍵斷裂，并使脫氧核糖的醛基游離出來，醛基化合物與schiff試劑（無色品紅溶液） 結合，形成含醌基的紫紅色化合物，使細胞內含 dna的部位呈紫紅色， 由呈現(xiàn)紫紅色的部位即可推斷dna 的存在，為提高實驗的可信度，應設置對照實驗，即將對照組先用熱三氯乙酸處理，以除去細胞中的 dna 。4、固定液的作用是什么？說

5、出我們實驗中所用過的幾種不同的固定液及它們的實用范圍。作用：1、破壞細胞的酶系統(tǒng)，防止細胞自溶；2、穩(wěn)定細胞物質成分；3、穩(wěn)定各種細胞結構的空間構型；總的來說，殺死并固定細胞。我們實驗中用到的固定液動物肝細胞線粒體的分離與觀察固定液 甲醇：冰醋酸 =9：1 細胞中酸性磷酸酶的定位固定液 10%福爾馬林植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察固定液 3%戊二醛dna 的 feulgen 染色法 carony固定液簡單固定劑即單一固定劑，常有的有乙醇，甲醛，冰醋酸等。乙醇只能凝固清蛋白，而冰醋酸只能凝固核蛋白，甲醛對這兩種蛋白都不凝固。簡單固定劑的局限性大， 如將其適當混合， 制成復合固定劑可以取得更好的效果

6、。 常有的混合固定劑有 carony改良液 （3份無水乙醇 +1份冰醋酸），bouin 液等5、常用的組織破碎方法有哪些？各自的適用范圍如何？1. 機械法主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法，常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。 1) 組織搗碎機、勻漿器：一般用于動物組織、植物肉質種子、柔嫩的葉芽等，勻漿器破碎細胞的程度比組織搗碎機高。 2) 研缽: 多用于細菌或其他堅硬植物材料， 研磨時常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨劑，以提高研磨效果。精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 2 頁，共 6 頁 - - - - -

7、 - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 2 頁，共 6 頁 - - - - - - - - - 2 物理法主要通過各種物理因素使組織細胞破碎的方法。1) 反復凍溶法 : 多用于動物性材料。 2)急熱驟冷法 : 用于細菌及病毒材料。 3) 超聲波處理 : 多用于微生物材料。3化學及生物化學法1) 自溶法: 在一定 ph和適當?shù)臏囟认?，利用組織細胞內自身的酶系統(tǒng)將細胞破碎的方法。2) 酶溶法: 利用各種水解酶，如溶菌酶、纖維素酶、半纖維素酶、脂酶等，將細胞壁分解，使細胞內含物釋放出來。 3) 表面活性劑處理 : 如十二烷基硫酸鈉。

8、6、什么是差速離心法、密度梯度離心法？各自的用途如何。差速離心法：是交替使用低速和高速離心， 用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。用途：此法適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大組分的分離， 采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。密度梯度離心法：用一定的介質在離心管內形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞懸液或者勻漿置于介質的頂部，通過重力或者離心力場的作用，使細胞分層分離。用途： 可用來分離核酸、蛋白質、核糖體亞基及其它成分。7、染色法有哪些方式？各自如何進行？蛋白電泳常用的染色方法主要是考馬斯亮藍法， 銀染法，熒光染色法和負染法。用適當濃度的 tritonx-100處

9、理細胞，再經(jīng)戊二醛固定和蛋白質染料考馬斯亮藍 r250染色，即可觀察細胞骨架結構。吉姆薩（giemsa）染色法：將細胞染色，使細胞器的輪廓顯示出來，便于觀察。染色體染色法：醋酸洋紅溶液或龍膽紫溶液先用 95% 的酒精解離，再用水漂洗10min, 然后用上述溶液染色35min。蘇木精 伊紅染色法 ：蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。8、顯示染色體的實驗，其材料往往需要作什么預處理？取材部位如何選擇？答：預處理：適宜濃度的秋水仙素。取材：生長旺盛或具有高度分裂能力的部位。9、試述用考馬斯亮藍r250 來顯示細胞

10、微絲骨架的原理及其精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 3 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 3 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -應注意的事項。原理：細胞骨架是由蛋白纖維組成的復雜網(wǎng)狀結構，可分為微管、 微絲和中間纖維。 用適當濃度的 tritonx-100處理細胞，可將細胞質膜中和細胞之中的蛋白質和全部脂質抽提， 單細胞骨架系統(tǒng)的蛋白質不受破壞而被保存，經(jīng)用戊二醛固定，考馬斯亮藍r250 染色后，可在光學顯微鏡下觀

11、察到由微絲組成的微絲束為網(wǎng)狀結構，就是細胞骨架。注意事項 ：1 洋蔥內表皮細胞在進行處理前必須在ph6.8 的磷酸緩沖液中下沉。 2 固定，染色時間必須足夠10、 試述細胞類壞死處理的原理和死活細胞鑒別的方法。原理：類壞死細胞是細胞介于生活和死亡之間的臨界狀態(tài)。引起類壞死的方法多種多樣如高溫、冷凍、紫外線照射、酸堿處理等。類壞死和死亡之間的區(qū)別在于前者發(fā)生的變化是可逆的而后者是不可逆的。鑒定方法 ：1、依據(jù)細胞膜的通透性差異，可用化學染色法鑒定死活細胞，2、依據(jù)細胞代謝的差異可用熒光染色法鑒定以及亞甲基藍法鑒別酵母細胞的死活。3、質壁分離法可鑒別植物細胞的死活；11、 如何進行線粒體的分離和鑒

12、定（并說明原理）？分離線粒體， 可將組織勻漿液懸浮在懸浮介質中進行差速離心。在一定的離心場中，大小不一的顆粒沉降速度取決于它的密度、半徑和懸浮介質的粘度。 在一個均勻懸浮介質中離心一定時間， 組織勻漿中的各種細胞器及其它內含顆粒按其大小、輕重分批沉降在離心管底部，從而分批收集。 細胞器中最先沉淀的是細胞核，其次是線粒體，其他更輕的細胞器和大分子可依次再分離。線粒體的鑒定可用詹納斯綠活染法， 由于線粒體中細胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)，呈藍綠色，而周圍的細胞質中的染料被還原成無色，從而鑒定。12、 在分離出線粒體后，若要對其進行深入研究，技術路線如何？答：將提取的線粒體制成懸濁液

13、，滴一滴放在載玻片上， 然后用詹姆斯綠b染色 20 到 30 分鐘后，在顯微鏡下觀察即可。13、在使用高速離心機時，要注意哪些問題？1. 放置離心管的時候一定要對稱的放置，同時保持重量相當。 2. 在開啟離心機的時候一定要將離心機的蓋子蓋實。3. 開啟和關閉離心機應該讓速度緩慢增速或減速啟動。精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 4 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 4 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -4. 如果是有

14、毒試劑還要做好通風處理。14、 在分離葉綠體時發(fā)現(xiàn)分離出來的葉綠體很小，如何驗證是否是由于該材料的葉綠體本來就小還是由于在分離時破碎造成的？答： 將所獲得的葉綠體懸液小心加到做好的percoll梯度上，10500g， 4離心 10min，如果條帶位于較上方的梯度，則為破碎的葉綠體，如果條帶接近于梯度底部，則為完整葉綠體，葉綠體本身較小。15、 在葉綠體分離出來后進行熒光觀察，能清楚的觀察到嗎？可以, 有些生物體內的物質受激發(fā)光照射后直接發(fā)出熒光，稱為自發(fā)熒光( 或直接熒光 ) ，如葉綠索的火紅色熒光和水質素的黃色熒光等。有的生物材料本身不發(fā)熒光， 但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光，這種熒光稱

15、為次生熒光 (或間接熒光 ) ，如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)桔紅色熒光。16、 敘述“細胞膜的滲透性”實驗的原理、主要步驟和應注意的問題。原理：細胞膜允許一些物質通透， 又能降低甚至阻擋另一些物質的通透，此即細胞膜的選擇通透性。當紅細胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細胞內，可使細胞脹破，血紅蛋白釋放到溶液中， 使溶液由不透明的紅細胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。 發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短， 可作為測量物質進入紅細胞速度的一種指標。脂溶性物質如甘油等分子容易透過細胞膜，當這些分子進入紅細胞時，會使細胞內的滲透壓增加，細胞吸水膨脹，細胞膜破裂發(fā)生溶血。主要步驟：1、血紅細胞懸液制

16、備：取兔血2-3ml ，加入 85% 生理鹽水 4ml, 在 1000 轉每分離心 5min, 取 50ml 燒杯，將上述離心的紅細胞用等滲溶液進行適當稀釋；2、用注射器取 10ml 稀釋過的細胞懸液備用；3、取試管架， 10支洗干凈的試管，分別標號；4、分別一一取 10 支試管，依次加入 nacl 溶液，丙酮、乙醇、na2so4, 甘油、硝酸鈉、葡萄糖溶液、 nh4cl 溶液、草酸銨溶液、乙酸銨溶液等量；5、再取上述試管，每支試管分別加入1ml 兔血，計時，看其能否發(fā)生溶血，若溶血，記錄所需時間；6、取幾種能夠發(fā)生溶血的試管中的溶液放入離心管中，3000 轉每分離心5分鐘后，取上層細胞懸液制

17、成裝片觀察。精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 5 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 5 頁，共 6 頁 - - - - - - - - -注意問題 ：1. 離心機使用時，要將配平后的離心管對稱放置。2. 試管中有紅細胞和測試溶液時，不應強力搖晃，以免造成人為的紅細胞破裂。3. 溶血較快的試管， 用顯微鏡觀察時要注意滴加血液后立即鏡檢，否則會看不到實驗結果。17、 進行細胞內的物質或結構原位顯示的方法有哪些？各有什么特點。細胞化學活體染色的方法、熒光標記免疫抗體的方法細胞化學活體染色的方法特點： 活體染色是利用某些無毒或毒性很小的染料來顯示細胞內某些天然結構， 而不影響細胞的生命活動或產(chǎn)生任何物理、化學變化以致引起細胞的死亡。熒光標記免疫抗體的方法特點： 熒光抗體標記是將熒光素以化學方法與特異性抗體共價結合，形成熒光素 -結合蛋白質化合物 （即熒光標記抗體） ，此結合物仍保留著抗體活性，同時具有熒光素的示蹤作用。18、 如何進行馬鈴薯塊莖細胞及其淀粉粒的制片與觀察？用刀片切取馬鈴薯