實(shí)驗(yàn)二消毒與滅菌

1、實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌（2012.09.19）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、區(qū)分消毒與滅菌；消毒與滅菌的方法可分為加熱、過濾、照射和使用化學(xué)藥品等方法；消毒（disinfection）是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌（Steriliaztion）是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2、了解微生物實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常用到的各種消毒與滅菌的方法，重點(diǎn)掌握高壓蒸汽滅菌法。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理1、加熱法分為干熱滅菌和濕熱滅菌（1）干熱滅菌 利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固性與其本身蛋白質(zhì)凝固性與其

2、本身的含水量有關(guān)的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快；反之，含水量越小，凝固就慢。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理1、加熱法分為干熱滅菌和濕熱滅菌（1）干熱滅菌 有火焰灼燒和干熱空氣兩種?；鹧孀茻哼m用于接種環(huán)、接種針、鑷子、玻璃棒、試管口、瓶口。干熱空氣滅菌：160170，12h，適用于培養(yǎng)皿、吸管、三角瓶等， 180，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。電熱鼓風(fēng)干燥箱實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地 將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)

3、閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時，由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。其原因有三：一是濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；二是濕熱的穿透力比干熱大；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加了滅菌效力。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要。因?yàn)槔淇諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸汽中含有

4、空氣時，在同一壓力下，含空氣的蒸汽溫度低于飽和蒸汽的溫度。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌121持續(xù)1530min。適用于培養(yǎng)基、工作服、橡膠物品、玻璃器皿等。是微生物實(shí)驗(yàn)室最常用的滅菌方法，使用頻率很高，所以要求每個同學(xué)都需要掌握。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌常壓蒸汽滅菌明膠、牛乳、含糖培養(yǎng)基等，可用阿諾氏流動蒸汽滅菌器，也可用普通蒸籠。含芽孢細(xì)菌，采用間歇滅菌，每天加熱到100，持續(xù)30min，連續(xù)3天。第1天， 100，30min，殺滅其中的營養(yǎng)體，取出常溫放置1824h；第2天， 100，30min，芽孢萌發(fā)的營養(yǎng)體被殺死；第3天， 100，30min，徹底

5、滅菌。 實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌煮沸消毒法100下煮沸1015min，一般適用于飲用水和食具的消毒、膠管、玻璃注射器和一般外科器械的簡單消毒。延長煮沸時間，并加入1%的NaHCO3或2%的石炭酸，效果更好。 實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌1、加熱法 濕熱滅菌超高溫消毒（ultra high temperature sterilization，簡稱UHTS）135150，28s。適用于牛乳或其他液態(tài)食品（如果汁、果汁飲料、豆乳、茶及礦泉水等）。特點(diǎn)：既能殺死產(chǎn)品中的微生物，又能較好地保持食品品質(zhì)與營養(yǎng)價值。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理2、紫外線滅菌紫外線滅菌時用紫外燈進(jìn)行的。波長為20030

6、0nm左右紫外線的殺菌力最強(qiáng)。紫外燈管實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理2、紫外線滅菌殺菌機(jī)制：紫外線誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制；紫外線輻射能使空氣中的氧電離稱o，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成過氧化氫（H2O2）。 O3和H2O2均有殺菌作用。但是紫外線的穿透力不強(qiáng)，一般是只適用于無菌室、接種箱、手術(shù)室內(nèi)以及病房的空氣及物體表面的滅菌。紫外燈照射物體以不超過紫外燈照射物體以不超過1.2m為為宜。宜。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理2、紫外線滅菌殺菌無菌室（或接種箱內(nèi)）噴灑35%石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也

7、可以殺死一部分細(xì)菌。無菌室內(nèi)的桌面、凳子也可用23%的來蘇兒擦洗，然后打開紫外線照射，即可增強(qiáng)殺菌效果，達(dá)到滅菌目的。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理3、過濾除菌（了解）通過機(jī)械作用濾去液體或氣體中細(xì)菌的方法。優(yōu)點(diǎn)：可以不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分；缺點(diǎn)：濾量有限。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌二、實(shí)驗(yàn)原理4、使用化學(xué)藥品化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能抑制或殺死微生物的化學(xué)制劑進(jìn)行消毒滅菌的方法。能破壞細(xì)菌代謝機(jī)能并有致死作用的化學(xué)藥劑為殺菌劑，如重金屬離子等；只是阻抑細(xì)菌代謝機(jī)能，使細(xì)菌不能增殖的化學(xué)藥劑為抑菌劑，如磺胺類及大多數(shù)抗生素等。微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)藥品有2%煤酚皂溶液(來蘇爾)，0.25%新

8、潔爾滅，0.1%升汞，35%的甲醛溶液，75%乙醇溶液等。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌三、實(shí)驗(yàn)儀器與用具高壓蒸汽滅菌鍋； 電熱鼓風(fēng)干燥箱； 紫外照射燈； 酒精燈； 75%的酒精棉球；培養(yǎng)皿（包好的）、試管等。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌四、實(shí)驗(yàn)步驟干熱滅菌1裝入待滅菌物品將包好的待滅菌物品(培養(yǎng)皿試管，吸管等)放入電烘箱內(nèi)，關(guān)好箱門。物品不要擺放太擠，以免妨褐空氣流通滅菌物品不物品不要擺放太擠，以免妨褐空氣流通滅菌物品不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌 2、設(shè)定溫度、升溫 通過數(shù)顯板設(shè)定溫度為160170，之后開始升溫。 3、恒溫 當(dāng)溫度升到1

9、60170時，開始計(jì)時，持續(xù)溫度12h。 4、降溫 切斷電源、自然降溫。 5、開箱取物 待電烘箱內(nèi)溫度降到70以下后，打開箱門，取出滅菌物品。 電烘箱內(nèi)溫度末降到電烘箱內(nèi)溫度末降到70 以前，切勿自行打開箱門，以前，切勿自行打開箱門，以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌四、實(shí)驗(yàn)步驟濕熱滅菌1、檢查水位、添加蒸餾水；2、放入待滅菌的物品；3、加蓋；4、設(shè)定程序，121，1530min；5、排冷空氣（非常重要，切勿忘記）；6、降溫、降壓，直到降為“0”；7、取出滅好菌的物品；8、無菌檢驗(yàn)； 滅菌培養(yǎng)基放入37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，檢驗(yàn)有無雜菌生長。實(shí)驗(yàn)二 消毒與滅菌四、實(shí)驗(yàn)步驟紫外線滅菌（針對超凈工作臺上的紫外燈）1、使用前75%的酒精棉球擦拭工作臺面，進(jìn)行表面消毒；2、打開紫外燈，拉下玻璃擋板，持續(xù)照射30min；3、關(guān)閉紫外燈，510min后開始工作。注意事項(xiàng)：因紫外線對眼結(jié)膜及視神經(jīng)有損傷作用，注意事項(xiàng)：因紫外線對眼結(jié)膜及視神經(jīng)有損傷作用，對皮膚有刺激作用，故不能直視紫外線，更不能在對皮膚有刺激作用，故不能直視紫外線，更不能在紫外線燈光下工作。紫外線燈光下工作。實(shí)驗(yàn)