氨溴索聯(lián)合地塞米松對(duì)大鼠急性呼吸窘迫綜合征早期肺保護(hù)作用

1、氨漠索聯(lián)合地塞米松對(duì)大鼠急性呼吸窘迫綜合征早期肺保護(hù)作用摘要目的給予脂多糖(lps)誘導(dǎo)的急性呼吸窘 迫綜合征大鼠氨澳索(amb)及地塞米松(dxm)干預(yù)后，觀 察細(xì)胞因子的表達(dá)及病理學(xué)變化，探討兩藥聯(lián)合對(duì)急性呼吸 窘迫綜合征早期的肺保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。方法sd大 鼠42只，隨機(jī)分成6組，每組7只：空白對(duì)照組(c組)， 陰性對(duì)照組(n組)，陽性對(duì)照組(l組)，amb干預(yù)組(a組), dxm干預(yù)組(d組)和amb聯(lián)合dxm干預(yù)組(ad組)。c組無 處理，n組自尾靜脈注入生理鹽水2 ml,余各組均注入脂多 糖(lps) 5 mg/kg,各干預(yù)組分別給予amb (100 mg/kg)、 dxm

2、(6 mg/kg)o各組于6 h后進(jìn)行血?dú)夥治?；測(cè)定肺組織 濕重與干重比(w/d)；制備肺勻漿，測(cè)定其中髓過氧化物酶(mp0)、腫瘤壞死因子-a (tnf-a)、白介素-ib (il-ib) 水平并觀察肺組織病理變化。結(jié)果與對(duì)照組比較，各干預(yù) 組血?dú)夥治鲋笜?biāo)明顯改善氧分壓(po2)： c組：(106. 4±7. 8) mm hg (1 mm hg=0. 133 kpa), n 組：(104. 1 ±7. 2) mm hg, l 組：(69. 0±4. 5) mmhg, a 組：(77. 3±5. 4) mmhg, d 組：(78. 8 + 6. 2) m

3、m hg, ad 組：(86. 8±5. 6) mm hg,而在 w/d 比c 組：(4. 42±0. 12), n 組：(4. 39±0. 13), l 組:(5. 42±0. 05), a 組:(4.95±0.16), d 組:(4. 90±0. 12), ad 組:(4. 73±0. 10)、mp0c 組:(0. 35±0. 06) u/mg, n 組： (0. 33±0. 04) u/mg, l 組：(0.85±0.05) u/mg, a 組： (0. 55±0. 04) u/

4、mg, d 組：(0. 58±0. 05) u/mg, ad 組： (0. 48±0. 04) u/mg及 tnf-a c 組:(228. 2±18. 3) ng/l, n 組：(234. 6±19. 3) ng/l, l 組：(719. 4±60. 2) ng/l, a 組:(479. 1±29. 2) ng/l, d 組：(310. 9±20. 5) ng/l, ad 組：(294. 7± 17. 5) ng/lk il-1 b c 組:(0. 112±0. 005) ug/l, n 組：(0. 11

5、6±0. 002) ug/l, l 組：(0. 189±0. 008) u g/l, a 組:(0. 144±0. 009) u g/l, d 組:(0. 139±0. 013) ug/l, ad組：(0. 130±0. 007) ug/l各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)均明顯 降低；光鏡下觀察c組及n組肺組織學(xué)正常，l組出現(xiàn)彌漫 性肺泡間隔增厚、滲出及水腫明顯、透明膜形成，同時(shí)可見 大量炎癥細(xì)胞浸潤，肺間質(zhì)彌漫性出血，而a、d及ad組光 鏡下上述病理表現(xiàn)明顯減輕。上述結(jié)果在兩藥聯(lián)合干預(yù)組改 善更為明顯。結(jié)論氨漠索與地塞米松合用對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的 急性呼吸窘迫綜合征大

6、鼠具有協(xié)同肺保護(hù)作用，其機(jī)制考慮 為兩者的共同抗炎及促肺泡表面物質(zhì)生成作用所致。關(guān)鍵詞急性呼吸窘迫綜合征；氨漠索；地塞米松； 炎癥細(xì)胞因子中圖分類號(hào)r826. 51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼a 文章編號(hào) 1673-7210 (2014) 02 (c) -0007-05effects of ambroxol combined with dexamethasone on acute lung injury induced by lipopolysaccharide in ratstang jiajial zhang qian2a1. department of anesthesia, ren ji south

7、courtyard affiliated to shanghai jiaotong university, shanghai 201112 , china ；2.department of emergency, thepeoplez s hospital of shanghai pudong new area , shanghai 201200, chinaabstract objective to observe the effects and possible mechanismsof ambroxol (amb) /dexamethasone ( dxm ) -co-administra

8、tion on the changes of inflammatory cytokines expression as well as the pathological variations of lung in 1ipopolysaccharide (lps) -induced acute respiratory distress syndrome (ards) met hods 42 sd rats were divided randomly into 6 groups with 7 each： blank control group (group c), negative control

9、 group (group n), positive control group (group l), amb intervention group (group a), dxm intervention group (group d), amb and dxm combined intervention group (group ad) . group c was without treatment, group n was given 2 ml of 0. 9% ns injection via tail vein； all the other four groups were given

10、 lps of 5 mg/kg； the intervention groups were given amb(100 mg/kg), dxm (6 mg/kg) all the rats were killed in 6 hours to analysis art erial blood gas and lung tissue wet/dry weight ratio, and then to observe the levels of myeloperxidase ( mpo ) , tumor necrosis factor- a (tnf- a ), interleukinl (ilt

11、b), as well as the pathological changes in lung. results compared with group c , the blood gas analysisimproved significantly p02： group c： (106. 4±7. 8) mm hg (1 mm hg=0. 133 kpa), group n： (104. 1 ±7. 2) mm hg, group l： (69. 0±4. 5) mmhg, group a： (77. 3±5. 4) mm hg, group d： (

12、78. 8±6. 2) mmhg, group ad： (86. 8±5. 6) mm hg , whilethe levelof w/d ratiogroupc:(4. 42±0. 12),group n：(4. 39±0. 13),groupl：(5. 42±0.05),group a：(4. 95±0. 16),groupd：(4. 90±0. 12), group ad： (4. 73±0. 10) , mpo group c： (0. 35±0. 06) u/mg, group n： (0. 3

13、3±0. 04) u/mg, group l： (0. 85±0. 05) u/mg, group a： (0. 55±0. 04) u/mg, group d:(0. 58±0. 05 ) u/mg, group ad:(0. 48±0. 04) u/mg, tnf-a group c： (228. 2±18. 3) ng/l, group n:( 234. 6± 19.3) ng/l, group l:(719. 4±60. 2) ng/l, group a： (479. 1±29. 2) ng/l,

14、 group d： (310. 9±20. 5) ng/l, group ad： (294. 7± 17. 5) ng/l, and ilt b group c： (0. 112±0. 005) u g/l,group n :( 0. 116±0. 002 ) u g/l , group l :(0. 189±0. 008) ng/l, group a： (0. 144±0. 009) u g/l, group d： (0. 139±0. 013) u g/l, group ad： (0. 130±0. 007)

15、u g/l decreased signif ica.ntly in all the intervention groups the group c and group n showed normal under optical microscope diffused alveolar septum thickening, exudation, edema, ards membrane, and the inflammatory granulocyte infiltrating and significant spotty hemorrhage were observed in group l

16、. the histological changes of group a, d, and ad were better than group l all the resuits were much more significantly changed in the group which two drugs were combined conclusion the combination use of amb and dxm has cooperative protective effects on acute respiratory distress syndrome induced by

17、 lps in rats. the mechanism may be associated with the common anti-inflammatory effects, the promotion effect of pulmonary surfactant, and also probably related to the common anti-fibrosis and ontioxidant effect, leading to the reconstruetion of the balance of oxidation and antioxidant system as we

18、11 as the resluting lungprotection.key words acute respiratorydistress syndrome ； ambroxol ； dexamethasone ；inflammatory cytokines急性呼吸窘迫綜合征(ards)通常存在彌漫的肺泡炎癥、 肺泡毛細(xì)血管壁損害、肺水腫，并導(dǎo)致嚴(yán)重的低氧血癥1。 2012年柏林會(huì)議將ards分為輕、中、重度，其中輕度ards 即以往所說的急性肺損傷2。ards發(fā)病率高而預(yù)后差，其 診斷及治療擁有很大的挑戰(zhàn)性3-4 o過去十余年中，隨著對(duì)ards的研究進(jìn)展以及肺保護(hù)性通氣策略的使用，很多患

19、者的臨床癥狀得以改善，但其病死率仍高達(dá)30%40%5, 且部分患者出現(xiàn)肺纖維化或遺留永久性的肺功能損傷。ards 發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，但公認(rèn)的機(jī)制之一為ards是肺組織對(duì) 各種致病因素打擊后產(chǎn)生的廣泛而過度的炎癥反應(yīng)2, 6 o 糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid, gc)具有強(qiáng)大的抗炎作用， 它可以干擾由細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎性通路7,并阻礙肺纖維 化的發(fā)展5。近年來大劑量氨澳索(amb)在ards早期的 治療中倍受關(guān)注，amb可通過抑制腫瘤壞死因子a (tnf- a ) 的合成和分泌，發(fā)揮抗炎作用8。此外，amb還具有顯著的 抗氧化及抗細(xì)胞凋亡的作用9。對(duì)于ards的治療，目前建 議針對(duì)其不

20、同機(jī)制聯(lián)合用藥，但當(dāng)目前為止，大劑量amb聯(lián) 合gc在ards的應(yīng)用報(bào)道尚少。本研究擬觀察在大鼠ards早期合用大劑量amb與gc的效果，明確兩藥是否具有協(xié)同 作用，并探討其可能的機(jī)制。1材料與方法1.1材料及檢測(cè)試劑、儀器1. 1. 1實(shí)驗(yàn)材料脂多糖（lps,血清型0111和b4,美 國sigma公司，均以5%葡萄糖溶液配制）；注射用氨漠索 （ambroxol hydrochloride for injection,沈陽新馬藥業(yè) 有限公司，批號(hào)：h20050242）；地塞米松注射液（山東魯抗 辰欣藥業(yè)有限公司，1 ml : 5mg,批號(hào)：h37021969）；健康、 雄性 sprague d

21、awley （sd）大鼠 42 只，體重 250300 g。1. 1.2檢測(cè)試劑、儀器髓過氧化物酶（mp0）、白介素 -ib （il-ib）、tnf-a elisa 試劑盒（美國 peprotech 公 司）；血?dú)夥治鰞x（雅培，istat型）。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2. 1動(dòng)物分組與準(zhǔn)備清潔及健康、雄性sd大鼠42 只，隨機(jī)分6組，分別為空白對(duì)照組（c組）、陰性對(duì)照組（n 組）、陽性對(duì)照組（l組）、amb干預(yù)組（a組）、dxm干預(yù)組 （d組）和amb聯(lián)合dxm干預(yù)組（ad組），每組7只。c組無 處理,n組自尾靜脈注入生理鹽水2 ml丄組注入脂多糖（lps） 5 mg/kg 7, a組、d組分別注入

22、相同劑量的lps以及amb 100 mg/kg8, dxm 6 mg/kg7, ad組同時(shí)注入上述劑量的lps、 amb 及 dxmo1. 2. 2標(biāo)本制作 各組于給藥后6 h以3. 5%水合氯醛10ml/kg腹腔內(nèi)注射麻醉成功后，固定大鼠，取腹正中縱行切 口，分離腹主動(dòng)脈并穿刺采集動(dòng)脈血待檢；腹主動(dòng)脈放血處死大鼠，開胸,暴露心肺,肉眼觀察肺組織大體病理改變后剝離結(jié)締組織，并結(jié)扎右主支氣管后剪下右肺，剪下部分右 肺上葉組織，稱重后放存凍存管中，標(biāo)簽標(biāo)注，置入液氮桶, 備用于肺勻漿；取右肺中葉稱取濕重后置入8(rc烤箱中烘干 至恒重，再稱取干重；取右肺下葉，以4%體積分?jǐn)?shù)的甲醛溶 液固定、石蠟包

23、埋、切片、蘇木精-伊紅(he)染色,待用 觀察病理學(xué)改變。制備1%肺勻漿9,于4工、3000 r/min離心10 min,取上清液置于-7(tc保存。1.2.3檢測(cè)指標(biāo)觀察各組在給藥后6 h內(nèi)臨床表現(xiàn)。 動(dòng)脈血做血?dú)夥治?；?jì)算肺組織濕重與干重比(w/d)比值; 光鏡下觀察病理學(xué)改變，并根據(jù)肺組織結(jié)構(gòu)損傷、肺不張程 度、透明膜形成、肺泡壁增厚程度、炎癥細(xì)胞浸潤程度進(jìn)行 04分半定量分析，共分5級(jí)，0級(jí)為無該項(xiàng)病理改變，1 級(jí)為病理變化輕且很局限，2級(jí)為病理變化中等且局限，3 級(jí)為病變中等但廣泛或局部很顯著，4級(jí)為非常顯著的廣泛 性病理改變；取肺組織勻漿，按試劑盒說明方法分別測(cè)定mpo 及、tnf

24、-a以及il-13水平。1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量數(shù)據(jù) 以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較行單因素方差分析, 多組間的兩兩比較方差齊性檢驗(yàn)采用lsd及snk法，以p 0. 05）； l組顯著低于c組和n組（p 0. 05）；各組間pac02 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p > 0. 05）o見表1。表1各組血?dú)夥治黾皐/d比值比較（x±s）注：與c組比較，*p 0. 05）； l組明顯高于c組（p 0. 05）o見表1。2.4炎癥指標(biāo)統(tǒng)計(jì)肺組織勻漿中mp0活性、tnf-a及ilt b水平在n組 與c組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p

25、> 0.05）,而l組均 較c組顯著升髙（p 0. 05）； il-1 3在d組及ad組下降較 之a(chǎn)組更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0.05）, ad組與l組 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0. 05）o見表3。表3光鏡下病理評(píng)分比較（分）3討論ards是在各種致病因素作用下導(dǎo)致的急性彌漫性肺損 傷，其特點(diǎn)是炎性反應(yīng)使得肺毛細(xì)血管通透性增加，引起肺 水腫、透明膜形成以及肺泡內(nèi)出血2。其發(fā)生機(jī)制錯(cuò)綜復(fù) 雜，因而也缺乏特定的治療方案，但采用低潮氣量通氣以及 抗炎性反應(yīng)是目前認(rèn)為有效的治療方法之一。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 及臨床研究證實(shí)，ards時(shí)肺組織內(nèi)的炎癥因子明顯增多，通 過抑制炎癥因子可減輕肺損傷程

26、度10。lps誘導(dǎo)的大鼠模 型是一個(gè)經(jīng)典的ards動(dòng)物模型，本組實(shí)驗(yàn)中，大鼠在被注 射lps后均出現(xiàn)了 p02下降，各項(xiàng)炎癥指標(biāo)顯著上升，病理 學(xué)肺損傷改變明顯，提示模型建立成功。amb作為一種黏液調(diào)節(jié)劑被廣泛在臨床上應(yīng)用多年，近 年有不少研究證實(shí)大劑量amb存在抗氧化、減少炎癥介質(zhì)和 細(xì)胞因子釋放、促進(jìn)肺泡表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant, ps)生成等作用9t2,從而在ards中發(fā)揮 肺保護(hù)作用。本組實(shí)驗(yàn)表明amb干預(yù)組mpo、tnf- a和il-1 b 水平下降，肺組織病理損傷減輕，存在肺保護(hù)作用。同時(shí)本 實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，amb干預(yù)組雖然在血?dú)夥治?、炎癥介質(zhì)水平及 病理

27、改變方面均有一定程度的改善，但其效果不如ad組明 顯，考慮其原因可能在于ards時(shí)，由于眾多的炎癥介質(zhì)釋 放形成了級(jí)聯(lián)反應(yīng)或瀑布樣效應(yīng)，而amb只是抑制了部分炎 癥介質(zhì)的產(chǎn)生，因而在ards的治療中需考慮到其復(fù)雜的致 病機(jī)制，針對(duì)不同的環(huán)節(jié)聯(lián)合用藥方可取得較滿意的療效。gc被用于ards的治療已有很長時(shí)間，但近年來對(duì)于gc 在ards中的作用爭議不斷，反對(duì)者主要認(rèn)為長時(shí)間大劑量 使用gc存在諸多副作用，如高血糖、骨質(zhì)疏松、感染加重 等，但在ards的治療中，gc確實(shí)有其積極作用。本實(shí)驗(yàn)可 看出，即使給予小劑量gc, d組較之l組在血?dú)夥治觥⒀装Y 指標(biāo)及組織病理學(xué)變化上仍有明顯的改善，在一定程度

28、上證 實(shí)了 dxm對(duì)lps誘導(dǎo)的ards具有肺保護(hù)作用。gc在ards治療中的作用機(jī)制體現(xiàn)在多方面。它可以直接或間接作用于炎 癥細(xì)胞或細(xì)胞因子7, 13,降低mpo活性，減輕中性粒細(xì) 胞(pmn)過度激活對(duì)組織的損傷14； gc通過上調(diào)肺組織 絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 (mkp-1)表達(dá)15,以及阻 礙單核細(xì)胞趨化蛋白t (mcp-1)、中性粒細(xì)胞趨化因子 (cinc)、p-選擇素和細(xì)胞間黏附分子t (icam-1)的表達(dá)16 ,起到減輕氣道和肺實(shí)質(zhì)炎性反應(yīng)的作用；gc可以在缺 氧情況下保留部分鈉離子通道的活性，減輕肺水腫的發(fā)生17 ； gc還可以部分逆轉(zhuǎn)肺泡表面活性物質(zhì)的紊亂10 o本

29、組實(shí)驗(yàn)雖然證實(shí)了 gc在ards中所產(chǎn)生的積極的效果，觀察 時(shí)間還不夠，考慮到gc治療可能帶來的相關(guān)副作用，gc在 ards中后續(xù)治療的影響還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本組實(shí)驗(yàn)證實(shí)了 ad組在給予了兩藥聯(lián)合治療的方案后, 在氧合情況、w/d比以及肺組織勻漿中的炎性介質(zhì)水平上， ad組均在不同程度上較單藥使用組改善，部分具有顯著統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義，提示amb及dxm的聯(lián)合使用對(duì)ards具有一定的協(xié) 同保護(hù)作用，而在病理學(xué)改變上ad組雖然較之單藥聯(lián)合使 用組改善無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但較之l組仍改善明顯，這一 點(diǎn)考慮到可能與本組實(shí)驗(yàn)干預(yù)治療早、觀察時(shí)間節(jié)點(diǎn)較短、 ards處于早期階段、病變較輕、組織病理學(xué)改變可

30、能未能完 全呈現(xiàn)相關(guān)，有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。由此得出如下結(jié)論： amb及dxm對(duì)lps誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷在一定程度上有 保護(hù)作用，可在一定程度上改善氧合，減輕炎癥介質(zhì)的釋放, 減輕肺部損傷。amb與dxm對(duì)lps誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷 具有協(xié)同保護(hù)作用，在血?dú)夥治觥⒀装Y指標(biāo)及病理學(xué)表現(xiàn)上 均優(yōu)于單藥使用，可有效改善氧和，減輕炎癥介質(zhì)的釋放， 從而減輕全身炎性反應(yīng)在肺部的集中表現(xiàn)。兩藥聯(lián)合使用的協(xié)同作用的機(jī)制考慮是基于兩種藥物 對(duì)于炎癥介質(zhì)的釋放均有抑制作用，聯(lián)合使用可使這一作用 進(jìn)一步強(qiáng)化，從而減輕肺泡上皮細(xì)胞和肺間質(zhì)的損傷，改善 血管通透性，減輕肺滲出及出血；此外兩藥均可促進(jìn)ps的 合成，從

31、而起到防止肺泡萎陷、減輕肺不張的作用。因而兩 種藥物的聯(lián)合應(yīng)用在急性肺損傷的防治中具有良好的應(yīng)用 前景。參考文獻(xiàn)1 van s, deroost k, deckers j, et al. pathogenesis of ma 1 ar i a.-a.s s oc i a ted acu te respira tory dis tress syndrome j. trends in parasitology, 2013, 29 (7)： 346-358.2 thompson bt, moss m. a new definition for the acute respiratory distre

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