倒置熒光顯微鏡ppt課件

1、倒置熒光顯微鏡操作倒置熒光顯微鏡操作及本卷須知及本卷須知李玉紅顯微鏡部件及稱號 顯微鏡機(jī)體 明視場BF鏡檢 關(guān)鍵點： 從光路中卸下其它方式察看需求的一切光學(xué)組件，聚光器調(diào)理好調(diào)理聚焦和對中，轉(zhuǎn)動孔徑光闌調(diào)理好似的明晰度。 1，復(fù)位 1 逆時針轉(zhuǎn)動，松開透射照明器中的“聚光器再聚焦指緊螺釘。 2 把“目鏡筒轉(zhuǎn)盤設(shè)置到O位。 3 把顯微鏡右側(cè)的“中間放大倍數(shù)刻度盤打到1X。 4 逆時針轉(zhuǎn)動，松開顯微鏡右側(cè)粗微調(diào)旋鈕后面的“物鏡再聚焦定位環(huán)。 2. 翻開透射照明器 1 把電源后部的“外部開關(guān)打到開的位置。 2 把電源“電源開關(guān)翻開。把開關(guān)撥至 3 按下顯微鏡左側(cè)的“照明器開關(guān)接通燈泡。3. 調(diào)理燈泡

2、亮度保證顏色真實。 1 把顯微鏡左側(cè)的“亮度調(diào)理盤設(shè)置成12V100W。 2 把透射照明器中的“NCB11濾色片插入光路中。3 把透射照明器中的“ND4濾色片插入光路中。4. 調(diào)理光路 1 把10X物鏡轉(zhuǎn)到光路中。 2 把顯微鏡右側(cè)的“光路轉(zhuǎn)換盤轉(zhuǎn)到1的位置。100%光到察看口 3 向上推透射照明器上的“視場光闌桿完全翻開視場光闌。 4 將系統(tǒng)聚光器上的“孔徑光闌桿轉(zhuǎn)至右側(cè)極限處把“孔徑光闌完全翻開。 5 轉(zhuǎn)動聚光器調(diào)焦旋鈕把聚光器調(diào)至最低位置。 5. 明視場察看時對顯微鏡的調(diào)整 1 把“聚光器轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)到A位置。 6 調(diào)理視度及瞳距 1將顯微鏡前部的“攝影取景框轉(zhuǎn)盤逆時針旋轉(zhuǎn)，使攝影取景框進(jìn)入光

3、路。 2用左眼對著左側(cè)目鏡，轉(zhuǎn)動目鏡 “屈光度調(diào)理環(huán)，使取景框中的雙十字線明晰成像。 3用右眼對著右側(cè)目鏡，轉(zhuǎn)動目鏡 “屈光度調(diào)理環(huán)，使取景框中的雙十字線明晰成像。 4將顯微鏡前部的“攝影取景框轉(zhuǎn)盤順時針旋轉(zhuǎn)，使其退出光路。 5調(diào)理目鏡瞳距，將兩目鏡視場所見的影像重合在一同。7. 調(diào)焦 1將樣品放置載物臺中。 2轉(zhuǎn)動同軸粗微調(diào)旋鈕，將標(biāo)本對好焦。 8. 聚光器中心調(diào)理 1確信10X物鏡在光路中。 2將“視場光闌調(diào)理桿降低直到能從目鏡看到視場光闌像。 3轉(zhuǎn)動“聚光器調(diào)焦鈕升降聚光器，使視場光闌像清晰地成象在標(biāo)本面上。 4轉(zhuǎn)動兩個“聚光器中心調(diào)理螺釘，使視場光闌像在視場中心。 5改換40X物鏡。

4、6調(diào)理“視場光闌調(diào)理桿，使視場光闌的象與視場大致一樣。 7轉(zhuǎn)動兩個“聚光器中心調(diào)理螺釘，使視場光闌像在視場正中。 9. 進(jìn)展察看 1選擇要運用的物鏡 2挪動系統(tǒng)聚光器上的“孔徑光闌調(diào)理桿，使孔徑為物鏡數(shù)值孔徑的 7080%?！鞍涯跨R筒轉(zhuǎn)盤設(shè)到B位置，轉(zhuǎn)動勃氏鏡調(diào)焦螺釘使其聚焦，當(dāng)察看到物鏡的出瞳和孔徑光欄的象時，調(diào)理其大小。3調(diào)理“視場光闌調(diào)理桿使視場光闌像與視場相大致一樣。 4把透射照明器里的“ND減光片進(jìn)入或退出光路以調(diào)節(jié)視場亮度。 補充闡明 假設(shè)不需求色溫很準(zhǔn)確的顏色，可以經(jīng)過顯微鏡左側(cè)的“亮度調(diào)理盤，改動燈泡電壓來調(diào)理亮度。 10. 改換樣品 利用顯微鏡主體上的“物鏡再聚焦定位環(huán)，照明

5、器上的“傾斜安裝，“聚光器再聚焦指緊螺釘，可容易更換樣品。 11. 顯微鏡操作終了后 1 封鎖電源開關(guān)開關(guān)撥至O 2 燈室冷卻后，把顯微鏡上的聚乙烯防塵罩蓋好。 相差PH顯微術(shù) 關(guān)鍵點： 將有ph標(biāo)志的物鏡與物鏡一樣ph標(biāo)志的聚光器模塊一同送入光路，在進(jìn)展顯微術(shù)前，校正對中物鏡里的相差板及聚光器模塊里的環(huán)形光闌。1. 用明視場BF顯微術(shù)對樣品聚焦。 2. 相差察看時對顯微鏡的調(diào)整。 1 將ph物鏡轉(zhuǎn)入光路。 2 轉(zhuǎn)動“聚光器轉(zhuǎn)盤，使其與在光路中的物鏡步驟1中所安排的具有一樣的ph標(biāo)志。 3 向右轉(zhuǎn)動聚光器上的“孔徑光闌調(diào)理桿，完全翻開孔徑光闌。 補充闡明 假設(shè)孔徑光闌沒有完全翻開，光路中的環(huán)形

6、光闌將遭到限制，影響相差效果。 4 提高透射照明器中的“視場光闌調(diào)理桿位置，使視場光闌完全翻開。 3. 對中環(huán)形光闌 1 把“目鏡筒轉(zhuǎn)盤設(shè)到位置，轉(zhuǎn)動勃氏鏡聚焦螺釘，使環(huán)形光闌像明晰。 2 用六角起子轉(zhuǎn)動聚光器模塊中的兩個“環(huán)形光闌對中螺釘，使環(huán)形光闌像與物鏡中的相差板環(huán)形像同心。3 把目鏡筒轉(zhuǎn)盤位置再轉(zhuǎn)到上。 4. 進(jìn)展察看 1 把聚光器“孔徑光闌完全翻開。 2 挪動透射照明器上的“視場光闌調(diào)理桿，使視場光闌像大小與視場大小接近。 3 把透射照明器上的“NCB11 濾色片從光路中移開，把“GIF濾色片移進(jìn)光路。提高反差 4 可經(jīng)過把“ND濾色片移進(jìn)或移出光路來調(diào)理視場亮度。 補充闡明 假設(shè)不

7、需求色溫準(zhǔn)確的顏色，可以經(jīng)過顯微鏡左側(cè)的“亮度調(diào)理盤，改動燈泡電壓來調(diào)理亮度。 5. 運用不同放大倍數(shù)的物鏡進(jìn)展察看 1 把所需放大倍數(shù)的相差物鏡移入光路。 2 轉(zhuǎn)動“聚光器轉(zhuǎn)盤，使其與在光路上物鏡步驟 1中所安排的具有一樣的ph標(biāo)志。 3 調(diào)理放入光路中的環(huán)形光闌中心。見程序3 6. 改換樣品 利用運用顯微鏡主機(jī)上的“物鏡再聚焦定位環(huán)，透射照明器上的“傾斜安裝及“聚光器再聚焦指緊螺釘，可容易改換樣品。 調(diào)焦安裝 當(dāng)運用TE2000-U/時： 不要同時反方向轉(zhuǎn)動顯微鏡左右兩側(cè)的調(diào)焦鈕，否那么會導(dǎo)致顯微鏡損壞。 粗動調(diào)焦鈕到達(dá)限定位置后，假設(shè)繼續(xù)向同一方向旋轉(zhuǎn)會引起顯微鏡缺點。請不要旋轉(zhuǎn)過度。

8、旋鈕的轉(zhuǎn)動量與物鏡的挪動量關(guān)系如下所示。粗微調(diào)焦鈕所提供的物鏡往復(fù)范圍為：基準(zhǔn)位置上方 7 毫米，下方3毫米。 粗微調(diào)旋轉(zhuǎn)量 物鏡的垂直挪動量 微動調(diào)焦鈕旋轉(zhuǎn)一個刻度 1微米 微動調(diào)焦鈕旋轉(zhuǎn)一周 0.1微米 粗動調(diào)焦鈕旋轉(zhuǎn)一周 4.9毫米 聚光器座的轉(zhuǎn)動 擰松聚光器座旋轉(zhuǎn)指緊螺釘，聚光器座就可以轉(zhuǎn)動。 此功能主要用于微分干涉顯微術(shù)時調(diào)理偏振方向。 當(dāng)用系統(tǒng)聚光器及無起偏器時例如進(jìn)展明場顯微術(shù)或相差顯微術(shù)時，此功能可用來左右挪動聚光器轉(zhuǎn)盤位置，為顯微操作器或其它系統(tǒng)留下空間。 缺點及對策維護(hù) 1. 鏡頭的清潔 不要將灰塵、指紋等留在鏡頭上。鏡頭、濾色片上的灰塵將影響視場中的圖像。假設(shè)鏡頭變臟，按

9、以下方法進(jìn)展清潔。 將灰塵用軟刷刷去，或用紗布悄然擦掉。 假設(shè)鏡頭上有指紋或油脂，可用一塊沾有純酒精乙醇或甲醇的柔軟清潔的棉布、鏡頭紙或紗布擦去。 當(dāng)擦物鏡上的浸油時，運用石油醚。假設(shè)沒有石油醚，請用乙醇。但是，由于乙醇的清潔效果沒有石油醚效果好，需求反復(fù)擦外表。通常清潔鏡頭要三到四次。 勿用石油醚清潔目鏡筒底部的鏡頭或目鏡筒外表。 純酒精和石油醚均為高度易燃品。因此在運用、保管、搬運過程中應(yīng)格外小心。操作電源開關(guān)或臺燈尚熱時，勿將它們放在燈泡附近。 運用純酒精時，請遵守廠家提供的運用闡明書。簡易操作程序：倒置顯微鏡中最常用的察看方法就是相差。由于這種方法不要求染色，是察看活細(xì)胞和微生物的理想

10、方法。在此提供各種聚光器來滿足需求，這種方法提供帶有自然背風(fēng)光的、高對比度的、高明晰度的圖像。1.開機(jī)。接連電源。翻開鏡體下端的電控開關(guān)。2.運用1預(yù)備：將待察看對象置于載物臺上。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇較小的物鏡。察看，并調(diào)理鉸鏈?zhǔn)诫p目目鏡，溫馨為宜。2調(diào)理光源：推拉調(diào)理鏡體下端的亮度調(diào)理器至適宜。經(jīng)過調(diào)理聚光鏡下面的光柵來調(diào)理光源的大小。3調(diào)理像距：轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇適宜倍數(shù)的物鏡；改換并選擇適宜的目鏡；同時調(diào)理升降， 以消除或減小圖像周圍的光暈，提高了圖像的襯度。4察看：經(jīng)過目鏡進(jìn)展察看結(jié)果；調(diào)整載物臺，選擇察看視野。3.關(guān)機(jī)取下察看對象，推拉光源亮度調(diào)理器至最暗。封鎖鏡體下端的開關(guān)，并斷開

11、電源。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡片置于載物臺下側(cè)，防止灰塵的沉降。 相差是倒置顯微鏡最常用的察看方法。該方相差是倒置顯微鏡最常用的察看方法。該方法不要求標(biāo)本染色，用于察看活體細(xì)胞和微生物法不要求標(biāo)本染色，用于察看活體細(xì)胞和微生物最為理想。最為理想。 相差成像技術(shù)提供了帶中性背景的亮堂、高相差成像技術(shù)提供了帶中性背景的亮堂、高對比度、高分辨率的圖像。對比度、高分辨率的圖像。 尼康采用了尼康采用了“切趾切趾 相襯的新技術(shù)，減少了相襯的新技術(shù)，減少了成像光暈，從而產(chǎn)生對比度優(yōu)越、顏色范圍更廣成像光暈，從而產(chǎn)生對比度優(yōu)越、顏色范圍更廣的圖像。的圖像。 熒光：在涉及熒光蛋白質(zhì)這樣的活體細(xì)胞顯微術(shù)熒光：在涉

12、及熒光蛋白質(zhì)這樣的活體細(xì)胞顯微術(shù)中，這種方法不可或缺。中，這種方法不可或缺。 尼康獨創(chuàng)的消雜光機(jī)構(gòu)最大限制地消除了背景雜尼康獨創(chuàng)的消雜光機(jī)構(gòu)最大限制地消除了背景雜光，從而在動態(tài)活細(xì)胞成像實驗中察看發(fā)微弱熒光，從而在動態(tài)活細(xì)胞成像實驗中察看發(fā)微弱熒光的標(biāo)本時能產(chǎn)生更高信噪比的圖像。光的標(biāo)本時能產(chǎn)生更高信噪比的圖像。 霍夫曼調(diào)制相襯霍夫曼調(diào)制相襯HMC方法運用尼康的公用方法運用尼康的公用物鏡和標(biāo)鏡，它將相們梯度轉(zhuǎn)換為光強(qiáng)度變化，物鏡和標(biāo)鏡，它將相們梯度轉(zhuǎn)換為光強(qiáng)度變化，使透明的活體標(biāo)本產(chǎn)生生動、具有三維立體感的使透明的活體標(biāo)本產(chǎn)生生動、具有三維立體感的圖像。圖像。HMC成像技術(shù)中，標(biāo)本可以置于塑料培育皿中察成像技術(shù)中，標(biāo)本可以置于塑料培育皿中察看，彌補了諾馬斯基微分干涉相襯技術(shù)的缺乏?？?，彌補了諾馬斯基微分干涉相襯技術(shù)的缺乏。 微分干涉相襯微分干涉相襯DIC方法讓未經(jīng)染色的活體細(xì)方法讓未經(jīng)染色的活體細(xì)胞和微生物所察看到的圖像具有三維浮雕狀的立胞和微生物所察看到的圖像具有三維浮雕狀的立體感，且對比度和靈敏度出眾。體感，且對比度和靈敏度出眾。 尼康尼康DIC系統(tǒng)采用塞拿蒙方法，運用該系統(tǒng)時，系統(tǒng)采用塞拿蒙方法，運用該系統(tǒng)時，您只需轉(zhuǎn)動聚光器頂