端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究

1、端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究馬立峰李玖能劉良炎炎李保龍（深圳市龍崗區(qū)骨科醫(yī)院廣東深圳518116）【摘要】目的：研究神經(jīng)端側(cè)縫合聯(lián)合局部應(yīng)用gm1對(duì)外周神經(jīng)缺損的修 復(fù)效果，為周圍神經(jīng)長(zhǎng)段距離缺損的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：sd大鼠60 只，隨機(jī)分為a、b、c三組，每組20只：將a、b、c組建立右側(cè)腓總神經(jīng)缺損 10mm的動(dòng)物模型，a組自體神經(jīng)移植修復(fù)（對(duì)照組）；b組為神經(jīng)端側(cè)縫合修復(fù) 組；c組為端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1修復(fù)組，與b組同樣的端側(cè)縫合方法縫合。 進(jìn)行大體指標(biāo)觀察及足印分析；術(shù)后20周進(jìn)行電牛理、透射電鏡、甲苯氨藍(lán)染 色、he染色、檢查計(jì)算神經(jīng)軸突數(shù)，測(cè)定肌濕重

2、、肌肉橫截面積比例分析。結(jié) 果：各組缺損遠(yuǎn)端腓總神經(jīng)都有一定程度再牛，在各個(gè)時(shí)期的脛神經(jīng)功能指數(shù)無 顯著差異，a組、c組的大鼠右側(cè)脛前肌復(fù)合動(dòng)作電位、右側(cè)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)纖維的傳 導(dǎo)速度、腓總神經(jīng)功能指數(shù)、脛前肌肉濕重及肌細(xì)胞橫截面積比例、神經(jīng)軸突數(shù) 目好于b組，而c組與a組無明顯差異。結(jié)論：1、端側(cè)縫合術(shù)后局部應(yīng)用外源 性gm1修復(fù)組神經(jīng)再生質(zhì)量、功能恢復(fù)情況和自體神經(jīng)移植組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差 異，h結(jié)果均優(yōu)于單純端側(cè)縫合組；2、外源性gm1能夠促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后的 牛長(zhǎng)防止骨骼肌萎縮；3、端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1能有效修復(fù)周圍神經(jīng)缺損?！娟P(guān)鍵詞】神經(jīng)節(jié)昔脂ml；腓總神經(jīng)；端側(cè)縫合；神經(jīng)缺損【中圖分類號(hào)】

3、r68【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】1007-8231 （2015） 15-0082-02目前臨床常用的神經(jīng)缺損修復(fù)方法是使用自體的神經(jīng)移植或神經(jīng)轉(zhuǎn)位方法, 但供體神經(jīng)干來源有限且需犧牲其支配區(qū)域的運(yùn)動(dòng)、感覺等功能，感覺神經(jīng)纖維 與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)纖維在兀配問題存在難題，需增加手術(shù)次數(shù)和部位。木實(shí)驗(yàn)通過對(duì)大 鼠腓總神經(jīng)缺損行端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1修復(fù)周圍神經(jīng)缺損，觀察大鼠腓總神 經(jīng)再牛情況及其支配區(qū)域功能恢復(fù)的研究來探索應(yīng)用的影響。1 .材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料spf級(jí)健康、成年雄性sd人鼠60只，每只體重約250克，實(shí)驗(yàn)所選用動(dòng)物 及飼料購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2實(shí)驗(yàn)方法將體重250g左右的雄

4、性sd大鼠60只，按隨機(jī)原則分為3組，hp：自體神 經(jīng)移植組（a組）、單純端側(cè)縫合組（b組）、端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1組（c組）， 每組20只。用10%水合氯醛（0.4ml/100g）行腹腔麻醉，于右后肢股骨坐骨神經(jīng)體 表投影處做長(zhǎng)約3cm的切口，分離出腓總神經(jīng)干、脛神經(jīng)干，在腓總神經(jīng)起始 部遠(yuǎn)側(cè)約5mm說處起切下腓總神經(jīng)干10mm,制作出10mm缺損模型。a組： 將切取的腓總神經(jīng)段10mm原位回植于腓總神經(jīng)缺損處，以11-0無創(chuàng)傷尼龍線 行端端外膜縫合，逐層關(guān)閉創(chuàng)面，術(shù)后14天每日予以局部注射lml生理鹽水。 b組:按a組方法將切斷的右側(cè)腓總神經(jīng)遠(yuǎn)斷端適當(dāng)修剪,制作成遠(yuǎn)斷端45&deg

5、; 斜面，然后在同側(cè)相鄰的脛神經(jīng)干適當(dāng)位置行脛神經(jīng)干外模開窗，將腓總神經(jīng)遠(yuǎn) 斷端與脛神經(jīng)干開窗處行“喇叭口”式外膜縫合，將近斷端結(jié)扎翻轉(zhuǎn)縫于鄰近肌 肉內(nèi)，逐層閉合傷口，術(shù)后同a組注射lml生理鹽水。端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用c組： 同b組方法建立模型，術(shù)后14天每日予以局部注射imigml溶液。神經(jīng)功能指數(shù)：對(duì)a、b、c三組進(jìn)行步態(tài)分析，吋間為第4周、8周、12 周、16周、20周吋進(jìn)行。收集大鼠在白紙上留下的左右側(cè)足印，分別測(cè)量出正 常側(cè)、實(shí)驗(yàn)側(cè)足印的最長(zhǎng)距離，足根、足尖之間的距離，每個(gè)變量都計(jì)算其平均 值，分別計(jì)算脛神經(jīng)功能指數(shù)和腓總神經(jīng)功能指數(shù)1；電生理檢測(cè)：在術(shù)后20 周，實(shí)驗(yàn)側(cè)脛前肌、坐骨神經(jīng)

6、用雙極刺激電刺激神經(jīng)干，測(cè)量脛前肌復(fù)合動(dòng)作電 位的復(fù)合動(dòng)作電位強(qiáng)度及傳導(dǎo)速度；檢測(cè)肌肉濕重恢復(fù)率：切取實(shí)驗(yàn)鼠雙后肢脛 前肌肉，計(jì)算出脛前肌肌肉濕重比值（恢復(fù)率），統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較a、b、c三組 間脛前肌肉濕重恢復(fù)率的情況。組織學(xué)檢測(cè)：肌肉濕重檢測(cè)后，將稱重的脛 前肌肌腹中上部切標(biāo)本，he染色，在光學(xué)顯微鏡和電鏡下觀察其形態(tài)觀察，統(tǒng) 計(jì)學(xué)分析用mias-300生物圖像分析儀測(cè)量脛前肌肌纖維截面積、再生神經(jīng)軸突 數(shù)目。將實(shí)驗(yàn)中所得數(shù)據(jù)，使用spss16.0軟件包進(jìn)行方差分析，若三組間差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，再行兩兩lsdt檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05, p<0.05有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué) 差異。2 結(jié)果大體指標(biāo)觀察：術(shù)后1220周，a、b、c組實(shí)驗(yàn)側(cè)足功能基本恢復(fù)，趾展 反射、趾展寬度及背伸情況，a、c組優(yōu)于b組，術(shù)后20周取材吋，手術(shù)顯微鏡 下可見各組縫合口處組織粘連輕微，神經(jīng)外膜包繞，豐富的微小血管走行于神經(jīng) 外膜。步態(tài)分析：術(shù)后4周，a組腓總神經(jīng)功能恢復(fù)速度不及b、c組；術(shù)后4 周到術(shù)后12周，b組恢復(fù)情況不及a、c組；術(shù)后12周至術(shù)后20周，其結(jié)果 同12周水平，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析三組間各吋間段均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。電生理檢測(cè)結(jié)果： 術(shù)后20周作電生理檢測(cè)得到脛前肌復(fù)合動(dòng)作電位，a組，c組均與b組有統(tǒng)計(jì) 學(xué)差異，均好于b組。肌肉濕重恢復(fù)率:術(shù)后20周，a組、b組、c組右側(cè)脛前 肌

8、濕重恢復(fù)率，其結(jié)果表明三組之間的右側(cè)脛前肌濕重恢復(fù)率a組、c組明顯優(yōu) 于b組，a組、c組間無顯著差異。組織學(xué)檢測(cè)及圖像分析結(jié)果：1 肌肉纖維截面積恢復(fù)率：術(shù)后20周，三 組之間右側(cè)脛前肌肌纖維截面積不完全相同，a組、c組恢復(fù)率明顯好于b組, 而a組、c組間恢復(fù)率無顯著差異。2、神經(jīng)組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果及分析：三組的腓 總神經(jīng)纖維和髓鞘均有不同程度生長(zhǎng)。從三組組織學(xué)鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，無論是再生的有髓神經(jīng)纖維密度、直徑還是在形態(tài)、 和髓鞘成熟度等上b組均不及a、c組，而a、c組相似。軸突計(jì)數(shù)b組與a組、c組都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而a組與c組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在觀察神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)中 發(fā)現(xiàn)，b組神經(jīng)再生數(shù)量及質(zhì)量均與a

9、、c組有較犬差距，而a組c組相似，但 c組再生神經(jīng)纖維的成熟度和數(shù)量和a組仍有一定差距。3 .討論3.1神經(jīng)節(jié)卄脂促進(jìn)神經(jīng)再生的影響神經(jīng)節(jié)昔脂(ganglioside, gs),在人大腦內(nèi)至少有7種，實(shí)驗(yàn)證明神經(jīng)節(jié) 昔脂具有廣泛的生物學(xué)功能，神經(jīng)節(jié)昔脂ml是其主要的一種，能夠促進(jìn)神經(jīng)的 修復(fù)與再生3、4、5o冷承浩、郝鐵成等在ngf和gm1聯(lián)合應(yīng)用對(duì)去細(xì)胞異 種神經(jīng)支架修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)陳i口性缺損的影響實(shí)驗(yàn)表明ngf及gm1聯(lián)合應(yīng)用 能夠促進(jìn)神經(jīng)再生和功能恢復(fù)。國(guó)外有學(xué)者在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)神經(jīng)節(jié)昔脂應(yīng)用于交感 神經(jīng)切斷后可以加速神經(jīng)的再生。guzman-harty等在坐骨神經(jīng)損傷后應(yīng)用 gm1的大鼠

10、實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)gm1有促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的生 物性能。在本實(shí)驗(yàn)中，大鼠的神經(jīng)功能指數(shù)、肌肉恢復(fù)率、電生理分析、神經(jīng)軸 突計(jì)數(shù)結(jié)果表明，在周圍神經(jīng)損傷后外源性神經(jīng)節(jié)昔脂是可以促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)和成 熟速度，并能夠有效增加神經(jīng)軸突數(shù)量和防止肌肉萎縮改善術(shù)后肢體功能恢復(fù)效 果。3.2端側(cè)縫合與自體神經(jīng)移植神經(jīng)再生以及術(shù)后肢體功能恢復(fù)的比較19世紀(jì)90年代年viterbo等通過神經(jīng)端側(cè)縫合使橫斷的神經(jīng)遠(yuǎn)端重新獲 得神經(jīng)支配，端側(cè)縫合由于既不損傷供體神經(jīng)。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)神經(jīng)端側(cè)縫合后神 經(jīng)能否再生、再生情況、功能重建效果進(jìn)行了大量的的相關(guān)研究，其結(jié)果不盡相 同10、11,但多數(shù)學(xué)者12、13獲得

11、了神經(jīng)纖維可通過側(cè)支發(fā)芽的方式再生并 使受損神經(jīng)功能得到恢復(fù)的研究依據(jù)。國(guó)外學(xué)者14實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)周圍神經(jīng)損傷 后進(jìn)行端側(cè)縫合修復(fù)后其運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)良好，肌力能達(dá)到正常的60%,其至達(dá)到 自體神經(jīng)移植的修復(fù)水平。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果中，周圍神經(jīng)缺損遠(yuǎn)端神經(jīng)再生可通 過端側(cè)縫合方法實(shí)現(xiàn)，且恢復(fù)一定功能,但其效果仍然與自體神經(jīng)移槓相差勝遠(yuǎn), 從肌肉濕重恢復(fù)率、肌纖維截面積恢復(fù)率、肌電圖、組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果看，其再生 質(zhì)量及肢體功能恢復(fù)情況，單純端側(cè)縫合方法修復(fù)周圍神經(jīng)缺損傷的效果與自體 神經(jīng)移植相差明顯，說明神經(jīng)單純的端側(cè)縫合方法仍然不能取代傳統(tǒng)的自體神經(jīng) 移植方法來修復(fù)周圍神經(jīng)缺損傷。4 結(jié)論周圍神經(jīng)缺損傷后

12、通過單純的端側(cè)縫合方法修復(fù)后神經(jīng)有一定的再生能力 功能也有一定程度的恢復(fù)，但效果欠佳。外源性gm1能夠促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷神 經(jīng)生長(zhǎng)及防止骨骼肌萎縮，對(duì)后期神經(jīng)纖維的成熟、肢體功能恢復(fù)也有促進(jìn)作用o 端側(cè)縫合聯(lián)合應(yīng)用gm1后神經(jīng)再生及功能恢復(fù)情況與自體神經(jīng)移植無明顯 差異，優(yōu)于單純端側(cè)縫合法，有望替代傳統(tǒng)的自體移植神經(jīng)方法修復(fù)周圍神經(jīng)缺 損傷?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 atchabahia n a, macki nnon se, hun ter da,et al.cold preservati on of n erve grafts decreases expression of icamand class

13、 ii mhc antigensj. j reconstr microsurg. 1999;15(4):307-311.2 trumble te, shon fg,et a i.the physiology of n erve tran spla ntati onj .hand clin. 2000;16(l):15-122.3 寧那，陳乃宏。神經(jīng)節(jié)昔脂的生物學(xué)活性生理科學(xué)進(jìn)展，2009, 40(1) :25-30.4 張克良，張東等。經(jīng)皮電刺激對(duì)端側(cè)縫合后神經(jīng)再生作用的研究j中華 手外科雜志，2001, 17 (1) :45-475 趙勁民，舒?zhèn)サ?，神?jīng)節(jié)背脂促進(jìn)異體周圍神經(jīng)再生的實(shí)驗(yàn)觀察j

14、廣西 醫(yī)學(xué)，2004, 26 (4) :470-4726 冷承浩、郝鐵成等.ngf和gm1聯(lián)合應(yīng)用對(duì)去細(xì)胞異種神經(jīng)支架修復(fù)大 鼠坐骨神經(jīng)陳i口性缺損的影響j.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2014,30 (1)： 86-92.7 gorio.cholinerrge deficits in aged rat spinal cord:restoration by gm1 gangliosidej.brain res, 2007,761(2):250-256.8 guzman-hartym,warner jk, mancinime,et al effectofcrush lesion ongan glioside

15、 radio labelli ng patter ns in ratsciatic n erve j jn europatholexp neuro,i 2010, 49 (3): 225-361.9 王民生等。神經(jīng)節(jié)昔脂gm1促進(jìn)擠壓傷坐骨神經(jīng)再生卩中華顯微外科雜 志，1995, 18 (3) :205-20710 zhang z,soucacos pn, bo j, et al evaluation of collateral sprouting after end-to-side n erve coaptati on using a fluoresce nt double-labeli ng tech niq uej.microsurgery. 1999;19 :281286.11 zhu qe zhu jk, chen gy. location of collateral sprouting ofdonor nerve following end-to-side neurorrhaphyj. muscle nerve.2008;38(5):1506-1509.12 陳琳,鵬峰等端側(cè)縫合后神經(jīng)再生方式的實(shí)驗(yàn)研究j中華手外