實(shí)驗(yàn)二植物組織中可溶性糖的薄層層析分離與鑒定（頁(yè)）

1、實(shí)驗(yàn)二植物組織中可溶性糖的薄層層析分離與鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康奶穷?lèi)是自然界存在的數(shù)量最多的冇機(jī)化合物，它既是植物軀體和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)成份，又是 住命活動(dòng)能量的主要來(lái)源，并且與植物體內(nèi)各類(lèi)物質(zhì)的代謝密切相關(guān)，分離鑒定植物紐織屮 可溶性糖的種類(lèi)及其變化，對(duì)了解植物體內(nèi)的組織代謝和農(nóng)產(chǎn)站的品質(zhì)，具有重要意義。本 實(shí)驗(yàn)采用硅膠g薄層層析法，分離鑒定栢物組織中可溶性糖的種類(lèi)，要求通過(guò)木實(shí)驗(yàn)，學(xué) 習(xí)提取植物材料中可溶性糖的一般方法，掌握吸附薄層層析的原理，操作及其在糖類(lèi)鑒定屮 的作用。實(shí)驗(yàn)原理植物組織屮的町溶性糖町用一定濃度的乙醇捉取出來(lái)，經(jīng)除去雜質(zhì)，即可獲得較純的可 溶性糖混合物。薄層層析是層析法的一種,層析法是利用

2、被分離樣品混合物中各組分的物理、化學(xué)差別, 使各組分以不同程度分布在兩個(gè)相中，這兩個(gè)相通常使一個(gè)被固定在一定的支持物上的，稱 為固定相；另一個(gè)是移動(dòng)的，稱為流動(dòng)相；當(dāng)流動(dòng)和流過(guò)固定相時(shí)，在移動(dòng)過(guò)程中由于各組 分在兩相中的分配情況不同，或吸附性質(zhì)不同，或電荷分布不同，或離子親和力不同等，而 以不同速度前進(jìn)，從而達(dá)到分離的目的。薄層層析是一種快速而微雖的層析方法，它是將一種固定支持物均勻地涂在薄板上，對(duì) 物質(zhì)進(jìn)行層析的方法，本實(shí)驗(yàn)只討論吸附薄層層析，即所有支持物是吸附劑（如硅膠粉），層 析時(shí)，主要是根據(jù)吸附劑對(duì)樣品中各組分的吸附能力不同，因此個(gè)組分的移動(dòng)速度不同，從 而達(dá)到分離混合物的目的。糖為多

3、疑基化合物，具有較強(qiáng)的極性，在硅膠g薄板上展層時(shí)，糖與硅膠分了有一定 的吸附力。硅膠分子與糖的吸附能力人小取決于糖的分子量和拜基數(shù)目，不同的糖分子由于 分子量及疑棊數(shù)的不同，因而它硅膠分子間的吸附力不同。造成各種糖分子在展層過(guò)程屮 移動(dòng)的距離不同，從而將各種糖分離岀來(lái)，一般吸附力的大小為：三糖雙糖己糖戊糖。 其屮各種糖移動(dòng)的速率對(duì)川rf值表示。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)糖的rf值比較。即可鑒定出植物紐織提 取液中糖的種類(lèi)。溶質(zhì)斑點(diǎn)中心到樣點(diǎn)的距離：rf（值）=溶劑前沿到點(diǎn)樣點(diǎn)的距離器材與試劑1、材料：蘋(píng)果或其他植物材料2、儀器：離心機(jī)及離心管、天平、研缽、量筒（25訕、移液管（10別）、恒溫水浴、毛細(xì) 管、層

4、析缸、吹風(fēng)機(jī)、烘箱、噴霧器、燒杯、鉛筆，尺子，硅膠gf254薄層層析板。3、試劑展開(kāi)劑（氯仿：冰醋酸：水=30： 35： 5）5%標(biāo)準(zhǔn)糖溶液（lomg/ml）：木糖，葡萄糖，果糖，蔗糖等。顯色劑：2ml苯胺，10ml85%磷酸，2g二苯胺，iml濃鹽酸，looml丙酮，溶解示混勻） 實(shí)驗(yàn)步驟1、硅膠板活化：將硅膠板置于120°c烘干箱屮，烘干30mino2、水果中可溶性糖提取液的制備：取洗凈的蘋(píng)果（或其他水果）削去果皮，稱3g果肉在硏缽 中研成勻漿后，倒在雙層洗凈的紗布上。包起置于漏斗，用干凈玻璃棒將果汁壓出。取果汁 lml于離心管中,加無(wú)水乙醇3ml,充分混勻后,在3000轉(zhuǎn)/分下

5、離心20分鐘,上清夜即為 可溶性糖提取液。3、蘋(píng)果提取液中可溶性糖的分離鑒定：取活化后的硅膠g板一塊，距底邊1.5厘米水平線 上確定5個(gè)點(diǎn)，相互間隔1厘米，其中4個(gè)點(diǎn)，分別點(diǎn)上5%的木糖，衙萄糖，果糖，蔗糖 標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)滴，另一點(diǎn)點(diǎn)上蘋(píng)果提取液數(shù)滴。在川毛細(xì)管點(diǎn)樣時(shí)，毛細(xì)管應(yīng)垂直于硅膠g 板的方向點(diǎn)樣，而月毛細(xì)管接觸g板的時(shí)間應(yīng)盡量短，不然點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑難以控制，點(diǎn)樣 量約20 30j.il,分次滴加，使點(diǎn)擴(kuò)散后的直徑不超過(guò)3mm。4、展層將點(diǎn)樣后的薄層板置于密閉的薄層層析缸中，用新配制的展開(kāi)劑，采用上行法展層，至 展開(kāi)劑距薄層板的上端約1 cm時(shí)取出，用吹風(fēng)機(jī)吹干。硅膠g薄層邊緣 濬劑前沿 濾娥

6、襯里 薄層板展開(kāi)劑層析缸s2氮仿一甲醇薄層層析裝置5、顯色把一塊薄板放在通風(fēng)櫥內(nèi)，采川苯胺一二苯胺一磷酸（2g二苯胺，加2ml苯胺，10ml 85%磷酸，iml濃鹽酸，looml丙酗，溶解后混勻）顯色劑丙酮溶液噴霧法顯色，然后于 85°c烘箱中烘1030分鐘，各種糖即顯示出不同色斑與標(biāo)準(zhǔn)糖比較，根據(jù)斑點(diǎn)顏色及rf值 即可鑒定出蘋(píng)果捉取液中所存在的可溶性糖的種類(lèi)。顯色劑處理后不同單糖顯現(xiàn)的顏色單糖顏色葡萄糖藍(lán)紫半乳糖藍(lán)紫果糖橙紅木糖藍(lán)綠鼠李糖綠實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確雖出原點(diǎn)至溶劑前沿，以及各斑點(diǎn)中心的距離，計(jì)算出它們的&值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)糖 的顏色和rf值，鑒定出樣品中糖的種類(lèi)，并繪出層析圖譜。原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離rf=。原點(diǎn)至展開(kāi)劑前沿的距離注意事項(xiàng)11、點(diǎn)樣時(shí)，要注意點(diǎn)樣點(diǎn)不能太大，操作時(shí)，應(yīng)待笫一次點(diǎn)樣風(fēng)干后，再在原點(diǎn)樣點(diǎn) 上繼續(xù)點(diǎn)樣，為少量多次點(diǎn)樣。2、每個(gè)點(diǎn)樣點(diǎn)不宜距離太近，點(diǎn)樣點(diǎn)不宜靠近硅膠板邊緣，注意邊緣效應(yīng)。3、放置硅膠板時(shí)，不能碰著層析缸的內(nèi)壁。4、在川多元系統(tǒng)進(jìn)行展層時(shí)，其中極性較弱的和沸點(diǎn)較低的溶劑（例如氯仿卬醇系統(tǒng) 小的氯仿）在薄層板的兩邊易揮發(fā)，因此，它們?cè)诒觾蛇叺臐舛缺仍阱康臐?/p>