土壤過(guò)氧化氫酶的測(cè)定方法

1、T/NAIA XXXX2020B10團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/NAIA XXXX2020土壤過(guò)氧化氫酶活性的測(cè)定（高錳酸鉀滴定法）2020-XX-XX發(fā)布2020-XX-XX實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)發(fā) 布T/NAIA XXXX2020前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)定編寫(xiě)。本標(biāo)準(zhǔn)由寧夏昊標(biāo)檢測(cè)服務(wù)研究院（有限公司）提出。本標(biāo)準(zhǔn)由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：寧夏昊標(biāo)檢測(cè)服務(wù)研究院（有限公司）、寧夏大學(xué)、寧夏農(nóng)林科學(xué)院荒漠所、銀川能源學(xué)院、寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：任亞麗、白玲、張亮亮、卜姣姣、楊潔、季波、魯靜、張小飛、劉娜娜。

2、本標(biāo)準(zhǔn)于 2020 年 XX月 XX 日首次發(fā)布。T/NAIA XXXX2020土壤過(guò)氧化氫酶的測(cè)定（高錳酸鉀滴定法）1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了土壤過(guò)氧化氫酶的測(cè)定方法（高錳酸鉀滴定法）。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類(lèi)土壤過(guò)氧化氫酶的測(cè)定（高錳酸鉀滴定法）。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的應(yīng)用文件， 僅注日期的版本適用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 601 化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法NY/T 1121.1土壤檢測(cè)第一部分：土壤樣品的采集、處理和貯存3 原理在 4 條件下，土

3、壤過(guò)氧化氫酶酶促分解過(guò)氧化氫，用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定反應(yīng)剩余過(guò)氧化氫，所消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積數(shù)來(lái)表示過(guò)氧化氫酶的活性。4 試劑和溶液除非另有說(shuō)明外，本方法均使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?，分析用水為?guī)定的三級(jí)水。GB/T 66824.1甲苯 （C7H8）。4.2濃硫酸（H2SO4）。4.3過(guò)氧化氫（H 2O2）。4.44高錳酸鉀（K 2MnO）。4.5硫酸溶液（ 0.2mol/L ）準(zhǔn)確移取 5.43mL濃硫酸， 緩緩注入400 mL水中，冷卻后用水定容至 500 mL。置于 4 冰箱貯存。4.6高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液c（1/54）=K2MnO0.1 mol/L稱(chēng)取 3.3 g（精確至0.000

4、1g ）高錳酸鉀，溶于1050 mL 水中，緩緩煮沸15 min，冷卻，于暗處放置兩周，過(guò)濾。貯存于棕色瓶中，并按照GB/T 601 對(duì)其進(jìn)行標(biāo)定。4.7過(guò)氧化氫水溶液（3%）準(zhǔn)確量取 30 % 過(guò)氧化氫溶液25 mL，用水定容至250 mL，配成 3%過(guò)氧化氫水溶液，置T/NAIA XXXX2020于 4冰箱貯存，臨用時(shí)用0.1 mol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 4.6 ）標(biāo)定。準(zhǔn)確吸取1.00 mL3 %過(guò)氧化氫溶液于 50mL三角瓶中，加入 5 mL水，5 mL 0.2mol/L 的硫酸溶液（ 4.5 ），用 0.1 mol/L 的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 4.6 ）標(biāo)定，所消耗的體積數(shù)為16.

5、51 mL。備注：由于不同批次的過(guò)氧化氫濃度存在差異，因此需要每次滴定前標(biāo)定， 若消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 4.6 ）的體積大于或小于16.51 mL時(shí)，說(shuō)明過(guò)氧化氫的實(shí)際濃度大于或小于3 %，這種情況就要重新配制過(guò)氧化氫溶液重新標(biāo)定，直到過(guò)氧化氫實(shí)際濃度等于3 %時(shí)才能使用。5 儀器設(shè)備5.1電子天平:感量 0.0001g 。5.2冰箱 （4 ）。5.3酸式 滴定管。6 操作步驟分別稱(chēng)取 5 g（精確至0.0001g ）土壤（如含量高可適當(dāng)減少稱(chēng)樣量）樣品于具塞三角瓶中（用不加土樣的作空白對(duì)照） ，加入 0.5 mL甲苯（4.1 ），搖勻，于 4 冰箱中放置30 min。取出，立刻加入 25

6、mL4 冰箱貯存的3 %過(guò)氧化氫水溶液 （4.7 ），充分混勻后， 再置于 4 冰箱中放置 1 h。取出，迅速加入 25mL貯存于4 冰箱的 0.2 mol/L 硫酸溶液（ 4.5 ），搖勻后過(guò)濾。準(zhǔn)確吸取1.00 mL濾液于 50 mL 三角瓶中，加入5 mL水和 5 mL 0.2 mol/L硫酸溶液（ 4.5 ），用 0.1 mol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 4.6 ）滴定，滴定至紫色褪去出現(xiàn)淺粉色為終點(diǎn)。 根據(jù)空白和樣品的滴定差，求出相當(dāng)于分解過(guò)氧化氫的量所消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 4.6 ）。7 結(jié)果計(jì)算過(guò)氧化氫酶活性以1 h，1 g 風(fēng)干土壤所消耗0.1mol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積數(shù)來(lái)表示，按式（ 1）計(jì)算：(V0 V)T(1)Xfm高錳酸鉀滴定度的矯正值，按式（2）計(jì)算：c（1/ 5KM nO4 )T( 2)0.025式中：X 過(guò)氧化氫酶活性，單位為毫升每克每小時(shí)（ mL/g·h） ；V0空白所消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的滴定體積，單位為毫升（mL）；V 樣品所消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的滴定體積，單位為毫升（mL） ；T 高錳酸鉀滴定度的矯正值；