第11章食品中有害污染物的檢驗

1、第十一章 食品中有害污染物的檢驗 第一節(jié) 概況一.特點1.被測定物質(zhì)含量低 通常以ppm、ppb計2.樣品基底組成復(fù)雜，測定干擾多第一節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留量的檢驗一、結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)：磷酸酯POOR OXR(S)有機磷農(nóng)藥多為磷酸酯類或硫代磷酸酯類，其結(jié)構(gòu)式中R1、R2多為甲氧基（CH3O-）或乙氧基（C2H5O-）；Z為氧（O）或硫（S）原子：X為烷氧基、芳氧基或其他取代基團?？梢院铣啥喾N有機磷化合物。過去我國生產(chǎn)的有機磷農(nóng)藥絕大多數(shù)為殺蟲劑，如常用的對硫磷、內(nèi)吸磷、馬拉硫磷、樂果、敵百蟲及敵敵畏等，近幾年來已先后合成殺菌劑、殺鼠劑等有機磷農(nóng)藥。敵敵畏，dichlorvos，O,O-二甲基-

2、O-（2，2-二氯乙烯基）磷酸酯。POM e OM e OOCHC C l2l甲拌磷，phorate，O,O-二乙基-S-乙硫基甲基二硫代磷酸酯PC2H5OC2H5OSSCH2S C2H5甲基對硫磷（O,O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯 ）對硫磷 （O,O-二乙基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯 ） PSCH3OCH3OONO2NO2OPC2H5OC2H5OS有機磷農(nóng)藥大多呈油狀或結(jié)晶狀，工業(yè)品呈淡黃色至棕色，除敵百蟲和敵敵畏之外，大多是有蒜臭味。不溶于水，易溶于有機溶劑不溶于水，易溶于有機溶劑如苯、丙酮、乙醚、三氯甲烷及油類，對光、熱、氧均較穩(wěn)定，遇堿易分遇堿易分解破壞解破壞，敵百蟲例外。所以

3、有機磷農(nóng)藥的提取與凈化應(yīng)在中性或酸性條件下進行。敵百蟲為白色結(jié)晶，能溶于水，遇堿可轉(zhuǎn)變?yōu)槎拘暂^大的敵敵畏。GB/T14553-2003 糧食、 水果和蔬菜中有機磷農(nóng)藥測定的 氣相色譜法一、氣相色譜法一、氣相色譜法 原理：樣品經(jīng)處理（提取、凈化和濃縮）后，有機磷農(nóng)藥組分經(jīng)氣相色譜柱分離進入火焰光度檢測器，在富氫焰上燃燒，以HPO碎片的形式，放射出波長526nm的特性光譜。檢測該波長光線的強度，用色譜峰保留時間定性，峰高或峰面積定量。 將蔬菜切碎混勻，稱取10.00g于250ml具塞錐形瓶中 加入無水硫酸鈉脫水 加入活性炭脫色（加入中性氧化鋁脫油） 加入二氯甲烷提取，濾紙過濾 揮發(fā)提取劑 二氯甲烷

4、定容至2.0ml。 樣品處理：樣品處理： 水果、蔬菜和谷物樣品中加入水果、蔬菜和谷物樣品中加入丙酮水丙酮水，以搗碎法用組織搗碎機勻漿提??；以搗碎法用組織搗碎機勻漿提??； 組織搗碎機組織搗碎機 勻漿液經(jīng)抽濾，勻漿液經(jīng)抽濾，真空抽濾裝置真空抽濾裝置 濾液中加入足夠的濾液中加入足夠的氯化鈉固體氯化鈉固體使溶液處于氯化鈉使溶液處于氯化鈉飽和狀態(tài)，猛烈振搖，靜置，丙酮與水相分層，收飽和狀態(tài)，猛烈振搖，靜置，丙酮與水相分層，收集丙酮層（上層）；集丙酮層（上層）； 水相用水相用二氯甲烷二氯甲烷提??；提?。?將將丙酮丙酮和和二氯甲烷二氯甲烷提取液合并，無水硫酸提取液合并，無水硫酸鈉脫水。鈉脫水。 漩渦振蕩器漩

5、渦振蕩器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，濃縮液用二氯甲烷旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，濃縮液用二氯甲烷轉(zhuǎn)移并定容。轉(zhuǎn)移并定容。 旋旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)蒸蒸發(fā)發(fā)儀儀氮吹儀氮吹儀小結(jié)樣品前處理 二氯甲烷提取 中性氧化鋁脫油 活性炭脫色 無水硫酸鈉脫水色譜測定： 氣相色譜法火焰光度檢測器（FPD） 526nm玻璃柱固定相擔(dān)體：Chromororb W AW DMCS固定液：QF-1, SE-30, OV-17, OV-101, PEGA, NPGA 火焰光度檢測器（火焰光度檢測器（FPD）通常用來）通常用來檢測含有檢測含有硫磷硫磷元素的有機物。用火焰元素的有機物。用火焰光度檢測器測定有機磷農(nóng)藥有高選擇光度檢測器測定有機磷農(nóng)藥有高選擇

6、性和高靈敏性的特點。性和高靈敏性的特點。第二節(jié) 黃曲霉毒素B1黃曲霉毒素（AFT）是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉 (aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高。 黃曲霉毒素在紫外線照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光黃曲霉毒素在紫外線照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為顏色不同，將其分為B族和族和G族族兩大類及其衍生物。兩大類及其衍生物。 B1是最危險的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種是最危險的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常

7、能檢測到。子，一些干果中常能檢測到。 AFT目前已發(fā)現(xiàn)目前已發(fā)現(xiàn)20余余種。種。AFT主要污染糧油食品、動植物食品等；如花主要污染糧油食品、動植物食品等；如花生、玉米，大米、生、玉米，大米、小麥小麥、豆類、豆類、堅果堅果類、肉類、乳類、肉類、乳及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。其中以及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。其中以花生和玉米污染最嚴(yán)重花生和玉米污染最嚴(yán)重。家庭自制發(fā)酵食品也能檢。家庭自制發(fā)酵食品也能檢出黃曲霉毒素，尤其是高溫高濕地區(qū)的糧油及制品出黃曲霉毒素，尤其是高溫高濕地區(qū)的糧油及制品種檢出率更高。種檢出率更高。 黃曲霉毒素相對分子量為312-346.難溶于水,易溶于油,甲醇

8、,丙酮和氯仿氯仿等有機溶劑,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中.一般在中性溶液中較穩(wěn)定,但在強酸性溶液中稍有分解,在pH9-10的強堿溶液中或在氧化劑存在下分解迅速.其純品為無色結(jié)晶,耐高溫,黃曲霉毒素B1的分解溫度為268紫外線對低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性. 黃曲霉毒素主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)黃曲霉毒素主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生生化學(xué)結(jié)構(gòu)上，黃曲霉毒素屬于二呋喃氧化學(xué)結(jié)構(gòu)上，黃曲霉毒素屬于二呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?，即含有一個二呋喃雜萘鄰?fù)难苌?，即含有一個二呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀┉h(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀〣1和和G1的二呋喃環(huán)末端有雙鍵。二呋喃的二呋喃環(huán)末端有雙鍵。二呋喃環(huán)末端有

9、雙鍵者毒性較強并有致癌性環(huán)末端有雙鍵者毒性較強并有致癌性主要為肝臟主要為肝臟急性中毒的動物主要表現(xiàn)為肝臟損傷、肝實質(zhì)急性中毒的動物主要表現(xiàn)為肝臟損傷、肝實質(zhì)細(xì)胞消失延遲、膽管增生、肝細(xì)胞脂質(zhì)消失延細(xì)胞消失延遲、膽管增生、肝細(xì)胞脂質(zhì)消失延遲和肝出血遲和肝出血慢性中毒主要表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩、肝臟出現(xiàn)慢性中毒主要表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩、肝臟出現(xiàn)亞急性或慢性損傷?？梢鹪l(fā)性肝細(xì)癌亞急性或慢性損傷?？梢鹪l(fā)性肝細(xì)癌也可作用于其他器官，如腎臟、胃、直腸、乳也可作用于其他器官，如腎臟、胃、直腸、乳腺、卵巢等腺、卵巢等 黃曲霉毒素檢驗黃曲霉毒素檢驗高效液相色譜法高效液相色譜法1、原理、原理 樣品中的黃曲霉毒素

10、經(jīng)樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)C18柱分離，用柱分離，用帶熒光檢測器的高效液相色譜儀檢測，帶熒光檢測器的高效液相色譜儀檢測，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。以保留時間定性，峰高或峰面積定量。2、樣品處理、樣品處理 （1）樣品提取）樣品提取 稱取適量樣品，加少量水浸潤，混勻稱取適量樣品，加少量水浸潤，混勻后加入后加入三氯甲烷三氯甲烷，振搖提取，再加入無水，振搖提取，再加入無水硫酸鈉，經(jīng)快速定性濾紙濾于具塞量筒中。硫酸鈉，經(jīng)快速定性濾紙濾于具塞量筒中。2、樣品處理、樣品處理 （2）樣品凈化和衍生化反應(yīng)）樣品凈化和衍生化反應(yīng) 將少量提取液通過裝有硅鎂吸附劑的層將少量提取液通過裝有硅鎂吸附劑的層析管，用三氯

11、甲烷析管，用三氯甲烷-正己烷、三氯甲烷正己烷、三氯甲烷-甲醇甲醇淋洗除去雜質(zhì)，最后用丙酮淋洗除去雜質(zhì)，最后用丙酮-水洗脫水洗脫AFT，收，收集于燒杯內(nèi)，集于燒杯內(nèi)， 在水浴上將溶劑揮干，用少量三氯甲烷溶解殘渣在水浴上將溶劑揮干，用少量三氯甲烷溶解殘渣并轉(zhuǎn)移到具塞小試管中。取部分溶液加入正己烷、并轉(zhuǎn)移到具塞小試管中。取部分溶液加入正己烷、三氟乙酸，將試管塞緊，混勻，靜置三氟乙酸，將試管塞緊，混勻，靜置30min，使，使AFTB1衍生為衍生為AFTB2a，用氮氣吹干，加入少量流動，用氮氣吹干，加入少量流動相溶解供高效液相色譜測定。相溶解供高效液相色譜測定。3、測定、測定 將按上述方法處理的將按上述

12、方法處理的衍生和未衍生樣品和標(biāo)衍生和未衍生樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀分析。注入高效液相色譜儀分析。 熒光檢測器，熒光檢測器，Ex=360nm,Em=425nm C18色譜柱（色譜柱（2504mm） 甲醇甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀（磷酸二氫鉀（1+1） 1.3ml/min樣品用三氟乙酸衍生的目的是確證樣品樣品用三氟乙酸衍生的目的是確證樣品中是否含有中是否含有AFTBAFTB1 1。確證樣品中是否含有黃曲霉毒素？確證樣品中是否含有黃曲霉毒素？未衍生化的未衍生化的衍生化的衍生化的標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液（AFTB1）標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液（AFTB2a）樣品溶液樣品溶液(出峰情況判斷，出峰

13、情況判斷，有？無有？無?)樣品溶液衍生化后在此樣品溶液衍生化后在此出峰，可判斷樣品中檢出峰，可判斷樣品中檢出出AFTB1一、四環(huán)素類抗生素的殘留檢驗一、四環(huán)素類抗生素的殘留檢驗 由放線菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，由放線菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，是家畜、家禽常用的防病治病藥物。包是家畜、家禽常用的防病治病藥物。包括括金霉素金霉素 (CTC) 、土霉素、土霉素(OTC) 、四環(huán)、四環(huán)素素（TC）及半合成衍生物及半合成衍生物。其結(jié)構(gòu)均為其結(jié)構(gòu)均為十二氫化并四苯十二氫化并四苯基本骨架?；竟羌?。 第三節(jié)第三節(jié) 抗生素殘留量抗生素殘留量57R5R7HCl金霉素金霉素OHH土霉素土霉素HH四環(huán)素四環(huán)素 抗生素結(jié)

14、構(gòu)中都含有酸性的酚羥抗生素結(jié)構(gòu)中都含有酸性的酚羥基和烯醇羥基及堿性的二甲氨基，該基和烯醇羥基及堿性的二甲氨基，該類藥物均為類藥物均為酸堿兩性化合物酸堿兩性化合物。57 易溶于稀酸和稀堿。易溶于稀酸和稀堿。 在我國四環(huán)素、土霉素和金霉素是允在我國四環(huán)素、土霉素和金霉素是允許使用，但有最高殘留限量規(guī)定。許使用，但有最高殘留限量規(guī)定。家家禽禽高效液相色譜法的檢出限： 四環(huán)素：0.15mg/kg 土霉素：0.20mg/kg 金霉素：0.65mg/kgHPLCHPLC法測定四環(huán)素類獸藥殘留法測定四環(huán)素類獸藥殘留 取一定量切碎的肉樣食品，用適量取一定量切碎的肉樣食品，用適量5%5%高氯酸高氯酸振蕩提??；振

15、蕩提?。?將提取液離心后，取上清液經(jīng)將提取液離心后，取上清液經(jīng)0.45um0.45um濾膜過濾；濾膜過濾； 反相色譜分離，紫外檢測器檢測，保留時間反相色譜分離，紫外檢測器檢測，保留時間定性，定性，工作曲線法工作曲線法定量。定量。檢測波長：檢測波長：355nm；色譜柱色譜柱:ODS柱；柱；流動相：乙腈流動相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氫磷酸二氫鈉溶液（鈉溶液（35+65）（）（ pH2.5 ），），使用前用超聲波脫氣；使用前用超聲波脫氣；柱溫：室溫，流速是柱溫：室溫，流速是1.0ml/min.工作曲線的制作：工作曲線的制作： 取切碎的肉樣，分別加入不同濃度的取切碎的肉樣，分別加入不同濃度的四環(huán)素類抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，四環(huán)素類抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按樣品前處按樣品前處理方法處理后理方法處理后，進樣測定，記錄保留時，進樣測定，記錄保留時間和峰高。以峰高為縱坐標(biāo)，以待測物間和峰高。以峰高為縱坐標(biāo)，以待測物濃度為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。濃度為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。 CmAU工作曲線工作曲線 CmAU工作曲線工作曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線C1C2使用工作曲線可以保證標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品處于完全相同的實使用工作曲線可以保證標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品處