探析HPLC法測(cè)定黃芪葉中黃芪甲苷的含量

1、探析 HPLC法測(cè)定黃芪葉中黃芪甲苷的含量摘要：目的建立一種準(zhǔn)確、 簡(jiǎn)便測(cè)定黃芪甲苷含量的分析方法。方法 色譜柱為 Nucleosil C18柱( ×250mm，5m)；流動(dòng)相為乙腈 - 水 12；流速為 /min ；檢測(cè)波長為 205 nm；速度為 /min 。靈敏度為 AUFS,測(cè)定了黃芪甲苷的含量，平均回收率為 %，RSD為%。結(jié)果 樣品濃度在 /ml 之間與峰面積成良好的線性關(guān)系。結(jié)論 本方法的重復(fù)性好、精密度高、穩(wěn)定性強(qiáng)。關(guān)鍵詞：HPLC黃芪葉黃芪葉中黃芪甲苷黃芪為常用中藥， 素有“補(bǔ)藥之長”之稱， 具有益氣固表， 利尿托毒等功效 . 黃芪藥用價(jià)值很高，臨床上常用來治療非特

2、異性免疫功能低下、乙肝和心血管系統(tǒng)疾病 . 黃芪甲苷作為黃芪成分之一，它具有降壓、抗炎、穩(wěn)定紅細(xì)胞膜、提高血漿CAMP含量，促進(jìn)小鼠再生肝DNA合成和增強(qiáng)免疫功能等多種作用 . 因此在研究黃芪過程中，我們對(duì)其成分黃芪甲苷進(jìn)行了含量測(cè)定方法研究，本文用 HPLC法測(cè)定黃芪甲苷的含量，其樣品濃度的范圍在/ml 之間與峰面積呈線性，該法靈敏度高，重現(xiàn)性好，可準(zhǔn)確地測(cè)定黃芪甲苷的含量。1 儀器與試劑Waters 高效液相色譜儀： 包括 510 型泵，991 光電二極管陣列型檢測(cè)器， U6K型進(jìn)樣器； NECPower Mate 型計(jì)算機(jī)，黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品購自遼寧省藥品檢驗(yàn)所。甲醇、正丁醇為分析純，乙腈為

3、色譜純、水為去離子水。試驗(yàn)用黃芪葉 6 月份采自沈陽醫(yī)學(xué)院草藥園。2 方法與結(jié)果色譜條件色譜柱為 Nucleosil C18柱( ×250mm， 5m);流動(dòng)相為乙腈 - 水 12；流速為 /min ；檢測(cè)波長為 205nm；速度為 /min 。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密稱取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品， 加流動(dòng)相定容至2ml，配制成 mg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別以10、20、 30、40、50 l 進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量作線性回歸，得回歸方程為Y× 10-5 × 10-4X(Y 為峰面積， X 為黃芪甲苷量 ) ， r ，黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品在g 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。提取方法

4、的選擇用 3 種不同提取方法 ( 索氏提取器提取1h；80溫浸提取 1h 和超聲波提取 1h) 提取樣品，后 2 種提取方法測(cè)得黃氏甲苷含量略低，故選索氏提取器提取方法。流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)試用多種溶劑系統(tǒng)， 最后確定以乙腈 - 水 12為流動(dòng)相，黃芪甲苷分離效果最好， 保留時(shí)間也較適宜。 色譜圖見上圖 2(A B C) 。樣品液制備 將黃芪葉陰干后研成粉過 40 目篩，然后精密稱取，放置索氏提取器中，用 100ml 80%甲醇加熱提取 2h，提取液減壓蒸去甲醇，用 20ml 正丁醇分別萃取 3 次，合并正丁醇萃取部分，減壓蒸干，殘?jiān)弥卣艏状级ㄈ葜?2ml，用 微孔濾膜過濾，濾液用于 HPLC

5、分析，每次進(jìn)樣 10l 。加樣回收率試驗(yàn)稱取黃芪葉粉份，分別精密加入黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，按樣品制備方法提取樣品并進(jìn)行定量分析，將測(cè)定結(jié)果扣除樣品中黃芪甲苷含量，與加入標(biāo)準(zhǔn)品的比為加樣回收率。結(jié)果為%(n 5), RSD%= (n=5) 。精密度試驗(yàn)取同一樣品液， 重復(fù)進(jìn)樣 5 次，根據(jù)測(cè)得的樣品中黃芪甲苷的濃度 ( g/ml) 計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 %。又取同一樣品5 份，制備 5 份樣品液，分別進(jìn)樣測(cè)出黃芪甲苷的濃度，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為%。穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液， 每隔2h 進(jìn)樣1 次，分別測(cè)定其色譜峰面積。 RSD%=(n=5)，結(jié)果表明，譜峰面積在 8h 內(nèi)基本無變化，表明本實(shí)驗(yàn)條件下

6、穩(wěn)定性良好。黃芪葉中黃芪甲苷的定量分析：依法測(cè)定黃芪葉中黃芪甲苷的含量3 討論黃芪甲苷是黃芪的主要有效成分之一， 根上部分幾乎全部落入地面，成為肥料，為了有效的利用自然資源， 我們?yōu)槎糠治鳇S芪葉黃芪甲苷的含量，本實(shí)驗(yàn)建立了黃芪甲苷的 HPLC測(cè)定法，測(cè)得黃芪葉中黃芪甲苷的含量為 %(干重 ) ，與黃芪標(biāo)準(zhǔn)含量 (%)相差 %。實(shí)驗(yàn)證明：黃芪葉中黃芪甲苷的含量非常高，人類應(yīng)該廣泛利用。本實(shí)驗(yàn)建立的 HPLC測(cè)定法加樣回收率高，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小，測(cè)試數(shù)據(jù)更可靠。參考文獻(xiàn)1張宇 , 沈德鳳 , 楊波 . 黃芪葉中黃芪甲苷的含量測(cè)定J 中國野生資源，20XX，（ 05） 020.王辰 , 侯連兵 , 劉嬋 .HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪注