試驗九甲醛滴定法測定氨基酸

1、實驗九 甲醛滴定法測定氨基酸一、目的 掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點。二、原理氨基酸是兩性電解質，在水溶液中有如下平衡： +H3N+RCOOH2NRCOO+H+-N%是弱酸，完全解離時pH為1112或更高，若用堿滴定-NH3所釋放的H+來測量氨基酸，一般指示劑變色域小于 10，很難準確指示終點。常溫下，甲醛能迅速與氨基酸的氨基結合，生成羥甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3釋放H,使溶液的酸度增加，滴定終點移至酚酞的變色域內(pH9.0左右)。因此，可用酚酞作指示劑，用標準氫氧化鈉溶液滴定。R-CH(COO)-NH 3R-CH(COO)-NH2+H+ NaOH 中和R-CH(

2、COO)-NH2 HCHO R-CH(COO)-NHCH2OH HCHO R-CH(COO)-N(CH2OH)2 如樣品為一種已知的氨基酸，從甲醛滴定的結果可算出氨基氮的含量( 脯氨酸與甲醛作用生成不穩(wěn)定的化合物，使滴定 mL數偏低。酪氨酸的滴定mL數偏高)。如樣品是多種氨基酸的混合物，如蛋白水解液，則滴定結果不能作為氨基酸的定量依據。但此法簡便快速，常用來測定蛋白質的水解程度。隨水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加時，表 示水解作用已完全、器材藥25 mL 錐形瓶；3 mL微量滴定管；吸管；0.1 mol/L標準甘氨酸溶液300 mL準確稱取750 mg甘氨酸，溶解后定容至100 mL

3、0.1 m01 /L標準氫氧化鈉溶液500 mL；（標準氫氧化鈉溶液應在使用前標定，并在密 閉瓶中保存。不可使用隔日貯在微量滴定管中的剩余氫氧化鈉。）酚酞指示劑20 mL 0.5 %酚酞的50%乙醇溶液中性甲醛溶液400mL在50 mL 3637%分析純甲醛溶液中加入1 mL 0.1 %酚酞乙醇 水溶液，用0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液滴定到微紅，貯于密閉的玻璃瓶中。此試劑在臨用 前配制。如已放置一段時間，則使用前需重新中和。四、操作1 取3個25 mL的錐形瓶，編號。向第1、2號瓶內各加入2mL0.1 mo1/L的標準甘 氨酸溶液和5 mL水，混勻。向3號瓶內加入7mL水。然后向3個瓶中各

4、加入5滴酚酞指示 劑，混勻后各加2 mL甲醛溶液，再混勻，分別用 0.1 mo1 /L標準氫氧化鈉溶液滴定至溶 液顯微紅色。重復以上實驗2次，記錄每次每瓶消耗標準氫氧化鈉溶液的 mL數。取平均值，計算甘 氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率 =實際測得量X 100加入理論量公式中實際測得量為滴定第1和2號瓶耗用的標準氫氧化鈉溶液 mL數的平均值與3號 瓶耗用的標準氫氧化鈉溶液mL數之差乘以標準氫氧化鈉的摩爾濃度，再乘以 14.008。2mL乘以標準甘氨酸的摩爾濃度再乘 14.008。即為加入理論量的mg數。2 取未知濃度的甘氨酸溶液 2 mL,依上述方法進行測定，平行做幾份，取平均值。 計算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的 mg數。氨基氮（mg/mL）=（A B） mol/LNaOH 體008 2式中：A為滴定待測液耗用標準氫氧化鈉溶液的平均 mL數。B為滴定對照液（3號瓶）耗用標準氫氧化鈉溶液的平均 mL數。mo/Lnroh為標準氫 氧化鈉溶液的真實摩爾濃度。思考題