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1、第一頁(yè),共44頁(yè)。 檢測(cè)依據(jù)(yj):GB 5750-2006 生活飲用水衛(wèi)生檢驗(yàn)規(guī)范第二頁(yè),共44頁(yè)。 掌握水樣采集規(guī)則及注意事項(xiàng)。 熟悉常用水衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)。 熟悉菌落(jnlu)總數(shù)、大腸菌群、耐熱大腸菌群的測(cè)定方法及檢測(cè)意義。 學(xué)會(huì)對(duì)所檢測(cè)的水樣作綜合分析。第三頁(yè),共44頁(yè)。項(xiàng)目單位限值說(shuō)明總大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出一般性污染耐熱大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染大腸埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染菌落總數(shù)CFU/mL100一般性污染賈第鞭毛蟲(chóng)個(gè)/10 L1腸道原蟲(chóng)隱孢子蟲(chóng)個(gè)/10 L1腸道
2、原蟲(chóng)第四頁(yè),共44頁(yè)。水體的微生物污染問(wèn)題日趨嚴(yán)重。在各種水體,特別是污染水體中存在有大量的有機(jī)物質(zhì),適于各種微生物的生長(zhǎng)。水體中微生物污染的來(lái)源:土壤,以及人類、動(dòng)物的排泄物污染。水體中少數(shù)(shosh)致病微生物(主要來(lái)自人或動(dòng)物的糞便污染)可導(dǎo)致某些腸道傳染病傳播。水微生物檢測(cè)可用于評(píng)價(jià)水質(zhì)情況,預(yù)報(bào)水質(zhì)的污染趨勢(shì),以保證水質(zhì)的衛(wèi)生安全。第五頁(yè),共44頁(yè)。在實(shí)際工作中,對(duì)水質(zhì)衛(wèi)生質(zhì)量的評(píng)價(jià)(pngji)和控制,是無(wú)法對(duì)水體中各種可能存在的致病微生物一一進(jìn)行檢測(cè)。一般選擇有代表性的一種或一類微生物作為指示菌,通過(guò)對(duì)指示菌的檢測(cè),來(lái)了解水體是否受到過(guò)的微生物污染,是否有腸道病原微生物存在的可
3、能。第六頁(yè),共44頁(yè)。 菌落總數(shù)(aerobic bacterial count) 是指1ml水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中,于37經(jīng)48h培養(yǎng)后,所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落的總數(shù)。 檢測(cè)意義:作為一般性污染的指標(biāo)(zhbio),即評(píng)價(jià)被檢樣品的微生物污染程度和安全性。水樣菌落總數(shù)越多,說(shuō)明水被微生物污染程度越嚴(yán)重,病原微生物存在的可能性越大,但不能說(shuō)明污染的來(lái)源。第七頁(yè),共44頁(yè)。 總大腸菌群(coliform bacteria) 是指一群需氧及兼性厭氧的,37生長(zhǎng)時(shí)能使乳糖發(fā)酵,在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性(ynxng)無(wú)芽胞桿菌。 檢測(cè)意義:作為糞便污染的指標(biāo)。水樣總大腸菌群數(shù)的含量,表明水被糞便污染的
4、程度,而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。第八頁(yè),共44頁(yè)。耐熱大腸菌群(thermotoletant Coliform Organisms):在4444.5下具有與大腸菌群相同(xin tn)發(fā)酵及生物化學(xué)性能的菌群。注意:我國(guó)習(xí)慣上把耐熱大腸菌群稱為“糞大腸菌群”。第九頁(yè),共44頁(yè)。第十頁(yè),共44頁(yè)。水樣采集;菌落(jnlu)總數(shù)的測(cè)定;總大腸菌群的測(cè)定;耐熱大腸菌群的測(cè)定。第十一頁(yè),共44頁(yè)。水樣水樣總大腸菌群總大腸菌群菌落菌落(jnlu)總數(shù)總數(shù)報(bào)告報(bào)告(bogo)報(bào)告報(bào)告耐熱大腸菌群耐熱大腸菌群或大腸埃希氏菌或大腸埃希氏菌報(bào)告報(bào)告第十二頁(yè),共44頁(yè)。第十三頁(yè),共44頁(yè)。 采樣(ci
5、 yn)原則 所采集的樣品具有代表性。 采樣(ci yn)容器:選擇無(wú)菌硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。 不能是新的污染源;不吸收或吸附某些待測(cè)組分;不與待測(cè)組分發(fā)生反應(yīng)。保證從采樣(ci yn)到分析期間,樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。 微生物樣品必須按一般無(wú)菌操作的基本要求采集,并保證在運(yùn)送、貯存過(guò)程中不受污染。第十四頁(yè),共44頁(yè)。 自來(lái)水水樣:先將自來(lái)水龍頭用火焰燒灼3min滅菌,再開(kāi)放水龍頭使水流(shuli)5 min(經(jīng)常用水的水龍頭放水13min)后,采集水樣于無(wú)菌玻璃瓶,約占瓶容量80%,以便搖勻水樣。 水源水水樣:選有代表性的地點(diǎn)及可疑地方,一般距水面下1015cm采樣。采樣后,將瓶
6、塞蓋好,再?gòu)乃腥〕?。第十五?yè),共44頁(yè)。 注意事項(xiàng) 嚴(yán)格無(wú)菌操作。 做好標(biāo)記:采得水樣后應(yīng)立即記錄水樣名稱、地點(diǎn)、時(shí)間等內(nèi)容。 從速送檢。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過(guò)(chogu)2h,在4下保存不應(yīng)超過(guò)(chogu)24h。第十六頁(yè),共44頁(yè)。1、滅菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分別包好,160干烤2h滅菌2、9mL滅菌生理鹽水3、相應(yīng)的滅菌培養(yǎng)基4、檢驗(yàn)(jinyn)前 ,無(wú)菌室及超凈臺(tái)用紫外線燈照射30min第十七頁(yè),共44頁(yè)。定義: 是指水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上有氧條件(tiojin)下37培養(yǎng)48h后,所得1mL水樣所含細(xì)菌菌落的總數(shù) 。培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)瓊脂 設(shè)備:放大鏡/菌落計(jì)數(shù)器第十八頁(yè),共
7、44頁(yè)。1 m L 飲 用 水 水 樣平皿1 m L 水 源 水 水 樣1 0 倍系列稀釋5 0 營(yíng)養(yǎng)瓊脂3 6 1 培養(yǎng)4 8 h計(jì) 數(shù)平行樣空白樣第十九頁(yè),共44頁(yè)。方法水樣搖勻20次左右(zuyu),使細(xì)菌分散。傾注培養(yǎng):無(wú)菌吸取1ml水樣分別置于2個(gè)空平皿,另一個(gè)作空白對(duì)照。再傾注15ml瓊脂(約45)于平皿中旋轉(zhuǎn),混勻待瓊脂凝固后倒置3748h。菌落計(jì)數(shù):用肉眼或放大鏡檢查,計(jì)數(shù)平皿內(nèi)菌落數(shù)目。第二十頁(yè),共44頁(yè)。 結(jié)果分析與報(bào)告 計(jì)算平均菌落數(shù): 報(bào)告方式:菌落總數(shù)(cfu/ml)。 cfu:colony forming units 當(dāng)檢樣的菌落數(shù)為l100時(shí),按實(shí)有數(shù)報(bào)告;大于1
8、00時(shí),采用二位有效數(shù)字(yu xio sh z)報(bào)告。 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB5749-2006)規(guī)定生活飲用水菌落總數(shù)每毫升不得超過(guò)100個(gè)。第二十一頁(yè),共44頁(yè)。 器材與試劑(shj) 無(wú)菌1ml吸管6支/組,無(wú)菌10ml吸管1支/組。 無(wú)菌平皿9個(gè)/組,營(yíng)養(yǎng)瓊脂。 90ml滅菌鹽水1瓶(內(nèi)置適量玻璃珠),9ml滅菌鹽水管3支。第二十二頁(yè),共44頁(yè)。 方法 稀釋水樣: 無(wú)菌吸10ml混勻水樣注入(zh r)90ml滅菌水瓶中,混勻成1:10水樣。 取1:10水樣1ml注入(zh r)9ml滅菌試管中混勻成1:100水樣。同法稀釋成1:1000, 1:10000水樣。第二十三頁(yè),共44頁(yè)。 方法(
9、fngf) 傾注培養(yǎng): 用1ml無(wú)菌吸管吸取23個(gè)適當(dāng)濃度的稀釋液1ml,分別注入無(wú)菌平皿中,每個(gè)稀釋度應(yīng)同時(shí)做2個(gè)平皿,另取一平皿作空白對(duì)照。再做傾注培養(yǎng)(方法(fngf)同飲用水)。 菌落計(jì)數(shù):方法(fngf)同飲用水。第二十四頁(yè),共44頁(yè)。第二十五頁(yè),共44頁(yè)。 結(jié)果分析(fnx)與報(bào)告 計(jì)算不同稀釋度的平均菌落數(shù): 稀釋度的選擇和菌落總數(shù)報(bào)告方式: 首先選擇平均菌落在30300之間者進(jìn)行計(jì)算。 計(jì)算方法和報(bào)告方式如表1所示。第二十六頁(yè),共44頁(yè)。第二十七頁(yè),共44頁(yè)。 由表2可判定水質(zhì)被污染的程度(chngd)。 表2 一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度(chngd)的關(guān)系 水的類別最清
10、潔水清潔水不太清潔水不清潔水極不清潔水菌落總數(shù) cfum110100100100010001000010000100000100000第二十八頁(yè),共44頁(yè)。注意事項(xiàng)菌落總數(shù)測(cè)定中,應(yīng)選擇合適的稀釋(xsh)度進(jìn)行。(生活飲用水,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過(guò)100個(gè),因此可以直接吸取1毫升到平板進(jìn)行培養(yǎng))各稀釋(xsh)管、相應(yīng)平皿做好標(biāo)記。包括:水樣名稱、稀釋(xsh)度、時(shí)間、小組。嚴(yán)格無(wú)菌操作。進(jìn)行水樣稀釋(xsh)時(shí),每一稀釋(xsh)度均需更換吸管。傾注時(shí),要注意營(yíng)養(yǎng)瓊脂的溫度。傾入瓊脂后要混勻,待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)。第二十九頁(yè),共44頁(yè)。分為(fn wi)三步:初發(fā)酵試驗(yàn)平板分離復(fù)發(fā)酵
11、證實(shí)試驗(yàn)第三十頁(yè),共44頁(yè)。定義: 總大腸菌群指一群在37培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性(ynxng)無(wú)芽孢桿菌。培養(yǎng)基:乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基 設(shè)備:顯微鏡第三十一頁(yè),共44頁(yè)。二 倍乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管1 0 m L1 m L1 m L水 樣10倍稀釋陰 性報(bào) 告未 檢 出陽(yáng) 性EM B3 6 1 培 養(yǎng) 2 4 h3 6 1 培 養(yǎng) 2 4 h革 蘭 氏 染 色顯 微 鏡 檢報(bào) 告陰 性無(wú) 典 型菌 落無(wú) 典 型 細(xì) 菌報(bào) 告陰 性G -無(wú) 芽 孢
12、桿 菌乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液3 6 1 培養(yǎng)2 4 h無(wú) 產(chǎn) 酸 產(chǎn) 氣報(bào) 告陰 性陽(yáng) 性M P N 表結(jié) 果 報(bào) 告 乳 糖 發(fā)酵 試 驗(yàn)2 4 h 分 離培 養(yǎng)2 4 h 證 實(shí)試 驗(yàn)2 4 h1 5 管 法 檢 測(cè) 步 驟第三十二頁(yè),共44頁(yè)。 初發(fā)酵試驗(yàn):采用乳糖蛋白(dnbi)胨培養(yǎng)液37培養(yǎng)24h,觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。 平板分離:對(duì)陽(yáng)性管培養(yǎng)物,接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基,觀察菌落特征,并進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。 復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn):對(duì)典型和可疑菌落,接種于乳糖蛋白(dnbi)胨培養(yǎng)液,進(jìn)行復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)., 結(jié)果報(bào)告(MPN):根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)所附檢索表報(bào)告結(jié)果(MPN”最可能數(shù)”)。 第三十三頁(yè),
13、共44頁(yè)。初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)(shyn)結(jié)果結(jié)果第三十四頁(yè),共44頁(yè)。多管發(fā)酵法結(jié)果(ji gu)大腸菌群在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的典型(dinxng)菌落特征大腸菌群革蘭氏染色(rns)顯微鏡下的形態(tài) 第三十五頁(yè),共44頁(yè)。 多管發(fā)酵(f jio)法 耐熱大腸菌群(thermotoletant Coliform Organisms):在4444.5下具有與大腸菌群相同發(fā)酵(f jio)及生物化學(xué)性能的菌群。第三十六頁(yè),共44頁(yè)。1.1基本性質(zhì) 培養(yǎng)溫度提高到4444.5,在此條件下仍能生長(zhǎng)和發(fā)酵乳糖的菌群。 埃希氏菌屬:糞源特異性 耐熱大腸菌群 克雷伯菌屬 腸桿菌屬總大腸菌群 檸
14、檬酸菌屬 其它(陰溝腸桿菌和弗氏檸檬酸桿菌) 注意:耐熱大腸菌在配水系統(tǒng)中是不能繁殖的,除非管網(wǎng)中有充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(升華需氧量超過(guò)10/mgL),以及(yj)管網(wǎng)中沒(méi)有余氯。第三十七頁(yè),共44頁(yè)。1.2 主要用途 埃希氏大腸菌是最準(zhǔn)確和專一(zhuny)的糞便污染指示 。耐熱大腸菌的檢出,可認(rèn)為近期水體直接或者間接地受到了糞便污染。注意:GB/5749-2006規(guī)定,如果飲用水檢出總大腸菌群,就必須檢測(cè)耐熱大腸菌或者埃希氏大腸菌。 第三十八頁(yè),共44頁(yè)。定義(dngy): 用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開(kāi),在44.5仍能生長(zhǎng)的大腸菌群,稱為耐熱大腸菌群。培養(yǎng)基
15、: EC培養(yǎng)基 伊紅美藍(lán)瓊脂 設(shè)備:無(wú)特殊設(shè)備第三十九頁(yè),共44頁(yè)。 初發(fā)酵(同總大腸菌群),24h 耐熱培養(yǎng)(piyng):陽(yáng)性管接種(44.5度),24h 平板培養(yǎng)(piyng):陽(yáng)性管接種EMB平板,24h第四十頁(yè),共44頁(yè)。乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管二 倍乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管1 0 m L1 m L1 m L水 樣10倍稀釋陰 性報(bào) 告未 檢 出陽(yáng) 性EM B3 6 1 培 養(yǎng) 2 4 h36 1培 養(yǎng) 24h報(bào) 告陰 性結(jié) 果 報(bào) 告 乳 糖發(fā) 酵試 驗(yàn)24h 證 實(shí)試 驗(yàn)24h多 管 發(fā) 酵 法 檢 測(cè) 步 驟EC 培養(yǎng) 液44.5 培養(yǎng) 24h不 產(chǎn) 氣產(chǎn) 氣有 典 型 菌 落檢 索 M PN表 耐 熱培 養(yǎng)24h無(wú) 典 型 菌 落報(bào) 告陰 性第四十一頁(yè),共44頁(yè)。菌落總數(shù)細(xì)菌學(xué)指標(biāo)總大腸菌群耐熱大腸菌群大腸埃
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