可見紫外分光光法春實(shí)用教案

1、主講(zhjing)教師 高金波第一頁，共115頁。本章主要(zhyo)介紹:光學(xué)分析法定義光學(xué)分析法定義光學(xué)分析的三個(gè)主要過程光學(xué)分析的三個(gè)主要過程電磁輻射電磁輻射(din c f sh)和和電磁波譜電磁波譜電磁輻射電磁輻射(din c f sh)與與物質(zhì)的相互作用物質(zhì)的相互作用光學(xué)分析法的分類光學(xué)分析法的分類第二頁，共115頁。一、定義(dngy)（光學(xué)分析法）第三頁，共115頁。第四頁，共115頁。1. 1. 電磁輻射電磁輻射電磁波（光是其中電磁波（光是其中(qzhng)(qzhng)的的一部分）一部分） 它是一種以極高的速度傳播的光子流它是一種以極高的速度傳播的光子流 在傳播過程中不需

2、要任何的物質(zhì)作為傳播在傳播過程中不需要任何的物質(zhì)作為傳播媒介媒介 它具有波動(dòng)性和粒子性。它具有波動(dòng)性和粒子性。三、電磁輻射(din c f sh)和電磁波譜第五頁，共115頁。 (1) (1) 波動(dòng)性表現(xiàn)波動(dòng)性表現(xiàn)(bioxin)(bioxin)在在: : 每種電磁輻射都有確定不變的頻率每種電磁輻射都有確定不變的頻率 1 ，c hcchhE (2) 粒子性表現(xiàn)(bioxin)在: 每個(gè)粒子都具有能量 E第六頁，共115頁。2. 2. 電磁波譜電磁波譜: : 電磁輻射電磁輻射(din c f sh)(din c f sh)按波長(zhǎng)順序排列而成按波長(zhǎng)順序排列而成 五、光學(xué)分析法分類第七頁，共115頁

3、。四、電磁輻射(din c f sh)與物質(zhì)的相互作用五、光學(xué)(gungxu)分析法分類第八頁，共115頁。光學(xué)(gungxu)分析法光譜分析(un p fn x)法非光譜分析(un p fn x)法原子光譜分析法分子光譜分析法原子吸收光譜原子發(fā)射光譜原子熒光光譜X射線熒光光譜折射法圓二色性法X射線衍射法干涉法旋光法紫外光譜法紅外光譜法分子熒光光譜法分子磷光光譜法核磁共振波譜法第九頁，共115頁。光譜分析法吸收光譜法發(fā)射光譜法原子光譜法分子光譜法原子發(fā)射原子吸收原子熒光X射線熒光原子吸收紫外可見紅外可見核磁共振紫外可見紅外可見分子熒光分子磷光核磁共振化學(xué)發(fā)光原子發(fā)射原子熒光分子熒光分子磷光X射

4、線熒光化學(xué)發(fā)光第十頁，共115頁。第十章 可見(kjin)-紫外吸收光度法可見光區(qū)和紫外光區(qū)的劃分(hu fn):200400nm為紫外光區(qū)400760nm為可見光區(qū)可見紫外分光光度法的定義根據(jù)物質(zhì)的分子對(duì)200760nm這一光區(qū)電磁輻射的吸收特性進(jìn)行的物質(zhì)成分分析與分子結(jié)構(gòu)分析的方法第十一頁，共115頁。第一節(jié) 紫外-可見分光(fn un)光度法 的基本原理和概念轉(zhuǎn)動(dòng)(zhun dng)能級(jí)差0.0050.05V振動(dòng)(zhndng)能級(jí)差0.051eV外層價(jià)電子能級(jí)差120eV電子光譜25025m250001250nm125060nm吸收光譜分子光譜第十二頁，共115頁。預(yù)備預(yù)備(ybi)知

5、識(shí)：知識(shí)：第十三頁，共115頁。圖示b1SH1SH*第十四頁，共115頁。 一、電子(dinz)躍遷類型：第十五頁，共115頁。3. n *躍遷：含雜原子(yunz)不飽和基團(tuán)（C N C O ）E 最小， 200400nm（近紫外區(qū)）4. n *躍遷：含雜原子(yunz)飽和基團(tuán)（OH， NH2 ，X，S）E 較大， 150250nm 按能量(nngling)大?。?*n * *n *第十六頁，共115頁。續(xù)前第十七頁，共115頁。1 吸收光譜（吸收曲線吸收光譜（吸收曲線(qxin)）：）： 不同波長(zhǎng)光對(duì)樣品作用不同，吸收強(qiáng)度不同不同波長(zhǎng)光對(duì)樣品作用不同，吸收強(qiáng)度不同 以波長(zhǎng)以波長(zhǎng)吸光度吸光

6、度A作圖，所描繪的曲線作圖，所描繪的曲線(qxin)為為2 吸收光譜特征：定性依據(jù)吸收光譜特征：定性依據(jù) 吸收峰吸收峰最大最大 吸收谷吸收谷最小最小 肩峰肩峰 sh 末端吸收末端吸收靠近靠近200nm的呈現(xiàn)的呈現(xiàn)第十八頁，共115頁。圖示第十九頁，共115頁。3 生色生色(shngs)團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）：團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）：第二十頁，共115頁。續(xù)前本身無紫外吸收，但可以本身無紫外吸收，但可以(ky)使生色團(tuán)使生色團(tuán)吸收吸收 峰加強(qiáng)，同時(shí)使吸收峰長(zhǎng)移的基團(tuán)峰加強(qiáng)，同時(shí)使吸收峰長(zhǎng)移的基團(tuán)有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán)有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán)例：例：OH，OR，NH2，SR， X4 助色團(tuán)第二十一頁，共11

7、5頁。續(xù)前叫藍(lán)移（紫移，短移）叫藍(lán)移（紫移，短移）第二十二頁，共115頁。續(xù)前6 增色效應(yīng)和減色效應(yīng) 結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時(shí) 增色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度(qingd)增強(qiáng)的效應(yīng) 減色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度(qingd)減小的效應(yīng)7 強(qiáng)帶和弱帶： 104 強(qiáng)帶 102 弱帶第二十三頁，共115頁。三、吸收帶類型(lixng)和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系1 R 帶：由含雜原子的不飽和基團(tuán)的帶：由含雜原子的不飽和基團(tuán)的 n *躍遷躍遷(yuqin)產(chǎn)生產(chǎn)生CO ； CN ；NN ， NO, NO2特點(diǎn)：特點(diǎn)：E 小，小， max250400nm，最大最大200nm，最大最大104( CH CH )n ， CH C CO 共軛體系增長(zhǎng)，

8、共軛體系增長(zhǎng)，最大最大紅移，紅移，最大最大溶劑極性溶劑極性，最大最大紅移紅移第二十五頁，共115頁。續(xù)前3 B 帶：由帶：由*躍遷產(chǎn)生躍遷產(chǎn)生芳香族化合物的主要特征吸收帶芳香族化合物的主要特征吸收帶最大最大 =254nm，寬帶，具有，寬帶，具有(jyu)精細(xì)結(jié)構(gòu)；精細(xì)結(jié)構(gòu)；最大最大=200極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失三、吸收帶類型(lixng)和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系精細(xì)結(jié)構(gòu)第二十六頁，共115頁。圖示第二十七頁，共115頁。續(xù)前4 E 帶：由苯環(huán)的環(huán)形共軛系統(tǒng)中的帶：由苯環(huán)的環(huán)形共軛系統(tǒng)中的*躍遷產(chǎn)生的躍遷產(chǎn)生的芳香族化合物的特征芳香族化合

9、物的特征(tzhng)吸收帶吸收帶 見圖見圖E1 180nm最大最大104 （常觀察不到）（常觀察不到）E2 200nm最大最大= 7000 強(qiáng)吸收強(qiáng)吸收苯環(huán)有發(fā)色團(tuán)取代且與苯環(huán)共軛時(shí)，苯環(huán)有發(fā)色團(tuán)取代且與苯環(huán)共軛時(shí)， E2 帶與帶與 K 帶合并一起紅移（長(zhǎng)移）。帶合并一起紅移（長(zhǎng)移）。三、吸收帶類型(lixng)和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系第二十八頁，共115頁。圖示第二十九頁，共115頁。圖示第三十頁，共115頁。*下列(xili)化合物 K 帶的吸收波長(zhǎng)最大的是：A： H2C=CH-CH= CH2 ； B：H2C=CH2；C：H2C=CH-CH=CH-CH=CH2； D ： H2C=CH-C=OR

10、帶是由_躍遷(yuqin)引起，其特征是波長(zhǎng)_。K 帶是由_躍遷(yuqin)引起，其特征是波長(zhǎng)_。*丙酮能吸收 280nm， 187nm和 154nm的紫外光，其中最長(zhǎng)波長(zhǎng)的吸收所對(duì)應(yīng)的電子躍遷(yuqin)類型為_，該吸收帶為_ 帶。*符合比耳定律的有色溶液稀釋時(shí)，其吸收曲線的最大吸收峰 A上移； B 下移；C 左移；D 右移*在分光光度法中，吸收曲線指的是：A. A一c 曲線； B. A一曲線；C. T一c曲線； D. A一T 曲線練習(xí)：第三十一頁，共115頁。續(xù)前1 1 溶劑效應(yīng)：溶劑效應(yīng)：對(duì)對(duì)最大影響：最大影響： n-n-* *躍遷：溶劑極性躍遷：溶劑極性，最大最大藍(lán)移藍(lán)移-* *躍

11、遷：溶劑極性躍遷：溶劑極性，最大最大紅移紅移 見圖解見圖解對(duì)吸收光譜精細(xì)結(jié)構(gòu)影響對(duì)吸收光譜精細(xì)結(jié)構(gòu)影響 溶劑極性溶劑極性，苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失，苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失溶劑的選擇溶劑的選擇(xunz)(xunz)極性；純度高；截止波長(zhǎng)極性；純度高；截止波長(zhǎng)E2， A值減少(jinsho)，產(chǎn)生負(fù)誤差;E2E1， A值增大，產(chǎn)生誤差第四十三頁，共115頁。續(xù)前第四十四頁，共115頁。影響測(cè)定(cdng)結(jié)果的相對(duì)誤差兩個(gè)因素：T和T lETlEAClCETAlglgTTTCClg434. 0 濃度的相對(duì)誤差濃度的相對(duì)誤差第四十五頁，共115頁。續(xù)前1 ）暗噪音與檢測(cè)器和放大電路不確切性有關(guān) 與光訊號(hào)(xn

12、ho)無關(guān)0)lg()lg434. 0(434. 0)lg434. 0(2 TTTTTTTdTd對(duì)應(yīng)最小的測(cè)量誤差對(duì)應(yīng)最小的測(cè)量誤差， %80.36434. 0lgTT%5 . 0%1%2 . 0 TT今假設(shè)今假設(shè)大多數(shù)分光光度計(jì)的大多數(shù)分光光度計(jì)的適適宜宜測(cè)測(cè)量量范范圍圍7 . 02 . 0%20%65：AT測(cè)測(cè)定定結(jié)結(jié)果果相相對(duì)對(duì)誤誤差差較較小小第四十六頁，共115頁。續(xù)前2 ）訊號(hào)(xn ho)噪音與光訊號(hào)(xn ho)有關(guān)表明測(cè)量誤差較小的范圍一直可延至較高吸光度區(qū)，對(duì)測(cè)定(cdng)有利第四十七頁，共115頁。第二節(jié) 可見(kjin)-紫外分光光度計(jì) 分光光度計(jì)構(gòu)成(guchng)的

13、主要部件 分光光度計(jì)的類型：第四十八頁，共115頁。第二節(jié) 紫外-可見(kjin)分光光度計(jì) 光路示意圖0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器放大顯示器第四十九頁，共115頁。第二節(jié) 紫外-可見(kjin)分光光度計(jì)一、主要部件1.光源：用于提供足夠強(qiáng)度和穩(wěn)定的連續(xù)光譜(lin x un p)。分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源 (鎢燈) 和氣體放電光源 (氫燈) 兩類。（ 1 ）鎢燈或鹵鎢燈 在 350nm2500nm連續(xù)用于可見光區(qū)（ 2 ）氫燈或氘燈 在 150nm400nm連續(xù)用于紫外光區(qū)配穩(wěn)壓器配穩(wěn)流器第五十頁，共115頁。第二節(jié)紫外-可見(kjin)分光光度計(jì)作用：將光源發(fā)出的復(fù)色光按波

14、長(zhǎng)順序分離成單色光。組成：狹縫2、準(zhǔn)直鏡2、色散元件(棱鏡、光柵)。第五十一頁，共115頁。入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫12800 600 500400第五十二頁，共115頁。單色器光路示意圖第五十三頁，共115頁。3 3 吸收池：吸收池： 玻璃玻璃能吸收紫外線光，僅適用于可能吸收紫外線光，僅適用于可見光區(qū)見光區(qū) 石英石英不能吸收紫外光，適用于紫外不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū)和可見光區(qū) 要求：匹配要求：匹配(ppi)(ppi)性（對(duì)光的吸收和性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）反射應(yīng)一致）第五十四頁，共115頁。4 4 檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變(zhunbin)

15、(zhunbin)為電信號(hào)的裝置為電信號(hào)的裝置光電池光電管光電倍增管二極管陣列檢測(cè)器5 記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示(xinsh)系統(tǒng)第五十五頁，共115頁。 1 1 、光電池：用半導(dǎo)體材料、光電池：用半導(dǎo)體材料(cilio)(cilio)制成的，用得最多的是硒光電池。制成的，用得最多的是硒光電池。其結(jié)構(gòu)和作用原理為：其結(jié)構(gòu)和作用原理為：硒光電池第五十六頁，共115頁。 光電管：它是在抽成真空或充有惰性氣體的玻璃或石英泡內(nèi)裝上 2 個(gè)電極構(gòu)成(guchng)，其結(jié)構(gòu)如圖：2. 光 電 管1234第五十七頁，共115頁。紅敏管 625-1000 nm藍(lán)敏管 200-625 nm光電管第五十八頁，共1

16、15頁。 光電倍增管：它是一個(gè)非常靈敏的光電器件，可以把微弱的光轉(zhuǎn)換成電流其靈敏度比前 2 種都要高得多。它是利用(lyng)九次電子發(fā)射以放大光電流，3.光電倍增(bi zn)管：第五十九頁，共115頁。光電倍增(bi zn)管1 個(gè)光電子可產(chǎn)生(chnshng) 106 107 個(gè)電子第六十頁，共115頁。訊號(hào)(xn ho)處理及顯示系統(tǒng)放大器表頭(bio tu)顯示熒屏顯示(xinsh)數(shù)字顯示第六十一頁，共115頁。二、分光(fn un)光度計(jì)的類型：第六十二頁，共115頁。二、分光光度計(jì)的類型(lixng)：（一）單光束分光光度計(jì)：0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示第六十三頁，共1

17、15頁。第六十四頁，共115頁。（二）單波長(zhǎng)(bchng)雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分裂器第六十五頁，共115頁。第六十六頁，共115頁。光源單色器單色器檢測(cè)器切光器狹縫吸收池（三）雙光束雙波長(zhǎng)(bchng)分光光度計(jì)：第六十七頁，共115頁。第六十八頁，共115頁。第三節(jié) 紫外-可見(kjin)分光光度分析方法 一、定性分析 二、純度檢測(cè) 三、單組份的定量分析(dnglingfnx)* 四、多組分的定量分析(dnglingfnx)-同時(shí)測(cè)定法* 五、結(jié)構(gòu)分析 六、比色分析法*第六十九頁，共115頁。定性鑒別的依據(jù)定性鑒別的依據(jù)吸收光譜吸收光譜 吸收光譜的形狀吸收光譜的

18、形狀 吸收峰的數(shù)目吸收峰的數(shù)目 吸收峰的位置（波長(zhǎng)）吸收峰的位置（波長(zhǎng)） 吸 收 峰 的 強(qiáng) 度 （ 相 應(yīng)吸 收 峰 的 強(qiáng) 度 （ 相 應(yīng)(xingyng)的吸光系數(shù)）的吸光系數(shù)）第七十頁，共115頁。續(xù)前1對(duì)比(dub)吸收光譜的特征值第七十一頁，共115頁。續(xù)前例：45. 315. 388. 170. 155036127836155036127812 AAAAVB，三處最大吸收三處最大吸收，定性鑒別：定性鑒別：藥典規(guī)定藥典規(guī)定 第七十二頁，共115頁。續(xù)前3對(duì)比(dub)吸收光譜的一致性第七十三頁，共115頁。續(xù)前第七十四頁，共115頁。續(xù)前2雜質(zhì)限量(xinling)的測(cè)定：例：腎上

19、腺素中微量雜質(zhì)例：腎上腺素中微量雜質(zhì)腎上腺酮含量計(jì)算腎上腺酮含量計(jì)算 2mg/mL -0.05mol/L 2mg/mL -0.05mol/L的的HCLHCL溶液，溶液，310nm310nm下測(cè)定下測(cè)定(cdng)(cdng) 規(guī)定規(guī)定 A3100.05 A3100.05 即符合要求的雜質(zhì)限量即符合要求的雜質(zhì)限量0.06%0.06%06. 01002101 . 1%/101 . 1100/101 . 1143505. 0334%11 腎上腺酮腎上腺酮mlmgmlglEACcm第七十五頁，共115頁。 1)本身調(diào)零;2)空白調(diào)零;3)測(cè)量樣品溶液(rngy)的濃度A=0.20.8第七十六頁，共11

20、5頁。1 吸光系數(shù)法2 標(biāo)準(zhǔn)曲線法3 對(duì)照法：外標(biāo)一點(diǎn)(y din)法4 增量法lECA 定量依據(jù)：定量依據(jù)：三、單組分的定量(dngling)方法第七十七頁，共115頁。續(xù)前1 吸光系數(shù)(xsh)法（絕對(duì)法）要要求求單單色色光光前前提提：lEAmLgCi %1cm1100/lALmolCi /或或%100% 樣樣CCii第七十八頁，共115頁。例：維生素例：維生素 B12 B12 的水溶液的水溶液(rngy)(rngy)在在 361nm 361nm處處的百分吸光系數(shù)為的百分吸光系數(shù)為 207 207 ，用，用 1cm 1cm比色池測(cè)得某比色池測(cè)得某維生素維生素B12B12溶液溶液(rngy)

21、(rngy)的吸光度是的吸光度是 0.414 0.414 ，求該溶液求該溶液(rngy)(rngy)的濃度的濃度 解：mLgmLglEAC/0 .20100/00200. 01207414. 0 第七十九頁，共115頁。練習(xí)(linx)例：精密稱取例：精密稱取 B12 B12 樣品樣品 25.0mg 25.0mg，用水溶液，用水溶液配成配成 100ml 100ml，精密吸取，精密吸取 10.00ml 10.00ml，又置，又置 100ml 100ml 容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在 1 cm 1 cm 的吸收池中，于的吸收池中，于 361 nm 361 nm

22、處測(cè)定吸光度處測(cè)定吸光度為為 0.507 0.507 ，求，求 B12 B12 的百分的百分(bi fn)(bi fn)含含量？。量？。解：mLgmLgCi/1045. 2100/1045. 21207507. 053 mLgC/1050. 2100101001050. 252 樣樣%0 .98%1001050. 21045. 2%100%5512 樣樣CCBi第八十頁，共115頁。續(xù)前2 標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)曲線法條條件件前前提提：固固定定儀儀器器和和測(cè)測(cè)定定CACKA 過程：配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收度 繪制工作曲線CA曲線求出方程(fngchng) 樣品溶液 測(cè)定A值由方程(

23、fngchng)求出濃度第八十一頁，共115頁。A200 240 280 320 360 400 440nm2. 標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)曲線法max第八十二頁，共115頁。CxAxA0Concentration要 求 1. r 0.999 2. n = 5-7 3.待測(cè)濃度盡量在標(biāo)準(zhǔn)曲線(qxin)中間位置標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)曲線(A=aC+b,r)第八十三頁，共115頁。續(xù)前3 對(duì)照(duzho)法(外標(biāo)一點(diǎn)法)注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)(bish)相同相同時(shí)時(shí)標(biāo)樣與樣品濃度相近標(biāo)樣與樣品濃度相近；截距為截距為固定儀器和測(cè)定條件；固定儀器和測(cè)定條

24、件；前提：前提：0標(biāo)標(biāo)樣樣和和分分別別測(cè)測(cè)定定一一定定過過程程：AA SiSiAACC sCiCCSiSiAAmm %100% mmii第八十四頁，共115頁。(三)對(duì)照(duzho)法待測(cè)樣品(Unknown sample)標(biāo)準(zhǔn)樣品(Reference sample)第八十五頁，共115頁。要求-標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度應(yīng)盡量(jnling)接近樣品濃度 =A標(biāo)A樣C標(biāo)C樣C樣=C標(biāo) A樣A標(biāo)第八十六頁，共115頁。練習(xí)(linx) 例：維生素例：維生素 B12 B12 的含量測(cè)定的含量測(cè)定 精密吸取精密吸取 B12 B12 注射液注射液 2.50mL 2.50mL ，加水稀釋至，加水稀釋至 10.0

25、0mL 10.00mL ；另配制對(duì)照液，；另配制對(duì)照液，精密稱定對(duì)照品精密稱定對(duì)照品 25.00mg 25.00mg，加水稀釋至，加水稀釋至 1000 1000 毫升在毫升在 361 nm 361 nm 處，用處，用 1 cm 1 cm 吸吸收池，分別測(cè)定吸光度為收池，分別測(cè)定吸光度為 0.508 0.508 和和 0.518 0.518 ，求，求 B12 B12 注射液的濃度以及注射液的濃度以及(yj)(yj)標(biāo)示量的百分含量（該標(biāo)示量的百分含量（該 B12 B12 注射液的標(biāo)示量為注射液的標(biāo)示量為 100g/ 100g/毫升）。毫升）。第八十七頁，共115頁。mLgCCii/1 .9851

26、8. 0508. 01000100000.25105 . 2 %1 .98%100%12 標(biāo)示量標(biāo)示量標(biāo)示量標(biāo)示量iCB第八十八頁，共115頁。練習(xí)(linx)2 2 ）吸光系數(shù)）吸光系數(shù)(xsh)(xsh)法法1207508. 01050. 2 iiClEACmLgCi/1 .98 %1 .98%100%12 標(biāo)示量標(biāo)示量標(biāo)示量標(biāo)示量iCB第八十九頁，共115頁。續(xù)前四、多組分的定量四、多組分的定量(dngling)(dngling)方方法法 cbaAAAA總總定定量量依依據(jù)據(jù)： 三種情況：1 兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾） 兩組分在各自最大下不重疊分別(fnbi)按單組分定量aaaaaa

27、EACCEA1111 由由bbbbbbEACCEA2222 由由bbaaAEAE222111；測(cè)定測(cè)定；測(cè)定測(cè)定過程：過程： 第九十頁，共115頁。續(xù)前2 兩組分(zfn)吸收光譜部分重疊 1 測(cè) A1 b 組分(zfn)不干擾可按單組分(zfn)定量測(cè) Ca 2 測(cè) A2 組分(zfn)干擾不能按單組分(zfn)定量測(cè) CababaaaAEEAE 2222111；和和測(cè)定測(cè)定；測(cè)定測(cè)定過程：過程： aaaaaaEACCEA1111 由由bbaababaCECEAAA 22222由由baababECEAC222 第九十一頁，共115頁。續(xù)前3 3 兩組分吸收光譜(x shu un p)(x s

28、hu un p)完全重疊 混合樣品測(cè)定（ 1 ）解線性方程組法（ 2 ）等吸收(xshu)點(diǎn)法（ 3 ）等吸收(xshu)雙波長(zhǎng)消去法（ 4 ）系數(shù)倍率法第九十二頁，共115頁。（1 ）解線性方程組法 步驟步驟(bzhu)：babababaAEEAEE 22221111；和和測(cè)定測(cè)定；和和測(cè)定測(cè)定 bbaababaCECEAAA 11111bbaababaCECEAAA 22222bababbabbaaEEEEEAEAC12211221 babaabaababEEEEEAEAC12212112 第九十三頁，共115頁。等吸收(xshu)點(diǎn)：兩物質(zhì)在某波長(zhǎng)處的吸收(xshu)系數(shù)相等，該波長(zhǎng)為b

29、beaaebeaebaeCECEAAA ebeaeEEE bbaababaCECEAAA 11111)(11abaaCCECE 總總總總CEACCebaeba 第九十四頁，共115頁。3 等吸收(xshu)雙波長(zhǎng)法 步驟步驟(bzhu)：消除(xioch)a的影響后測(cè) bbabababaAAAAAA222111 bbbbababaAAAAAA)(2121aaAAa2121 和和的的等等吸吸收收點(diǎn)點(diǎn)選選bbbbbbbbaCECEEAAA )(2121bbabbbabEAEEAC 21ab第九十五頁，共115頁。續(xù)前 消去 b 的影響，測(cè)定(cdng)a組分注：須滿足兩個(gè)基本條件注：須滿足兩個(gè)基本

30、條件選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下干擾組分選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下干擾組分(zfn)具有等吸收點(diǎn)具有等吸收點(diǎn)選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下待測(cè)物的吸光度差值應(yīng)足夠大選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下待測(cè)物的吸光度差值應(yīng)足夠大bbAAb 2 1 2 1 和和的的等等吸吸收收點(diǎn)點(diǎn)選選aaaaaaabaCECEEAAA )(21 2 1abaaabaaEAEEAC 2 1 ab第九十六頁，共115頁。五、有色五、有色(yu s)(yu s)化合物的測(cè)定方法化合物的測(cè)定方法 光電比色法光電比色法 （一）顯色反應(yīng)和顯色劑：（一）顯色反應(yīng)和顯色劑： 1.1.顯色反應(yīng)：顯色反應(yīng)： 在光度分析中將試樣在光度分析中將試樣(sh yn)(sh yn)中的待測(cè)組分轉(zhuǎn)變

31、成有色化中的待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。第九十七頁，共115頁。 顯色反應(yīng)一般顯色反應(yīng)一般(ybn)分為兩大類：一類分為兩大類：一類是配位反應(yīng)；另一類是氧化還原反應(yīng)。是配位反應(yīng)；另一類是氧化還原反應(yīng)。 Fe3 SCN =FeSCN2+ ； Mn25e4H2O =MnO48H 在這兩類反應(yīng)中，用得較多的是配位反在這兩類反應(yīng)中，用得較多的是配位反應(yīng)。應(yīng)。第九十八頁，共115頁。（2 2）有機(jī)）有機(jī)(yuj)(yuj)顯色劑：顯色劑： 1）有機(jī)顯色劑的優(yōu)點(diǎn)：）有機(jī)顯色劑的優(yōu)點(diǎn)： A.具有鮮明的顏色，具有鮮明的顏色，都很大（一般可達(dá)都很大（一般可達(dá)到到 104 以上

32、），所以測(cè)定的靈敏度很高；以上），所以測(cè)定的靈敏度很高； B.生成生成(shn chn)的一般為螯合物，的一般為螯合物，穩(wěn)定性很好，一般離解常數(shù)都很小；穩(wěn)定性很好，一般離解常數(shù)都很??；2.顯色劑： （1）無機(jī)(wj)顯色劑：第九十九頁，共115頁。C.C.選擇性好選擇性好D.D.有些有色配合物易溶于有機(jī)溶劑，有些有色配合物易溶于有機(jī)溶劑，可進(jìn)行萃取可進(jìn)行萃取(cuq)(cuq)光度分析，提高光度分析，提高了測(cè)定的靈敏度和選擇性。了測(cè)定的靈敏度和選擇性。第一百頁，共115頁。（ 3 ）常見(chn jin)的有機(jī)顯色劑：1）磺基水楊酸：其結(jié)構(gòu)式如下：第一百零一頁，共115頁。 2 2 ）鄰二氮菲

33、（鄰菲羅啉）：）鄰二氮菲（鄰菲羅啉）：結(jié)構(gòu)式為：結(jié)構(gòu)式為：直接在 PH = 3 9 時(shí)與 Fe2+生成紅色(hngs)螯合物用于鐵的測(cè)定。NN第一百零二頁，共115頁。3 3 ）雙硫腙：也叫二苯）雙硫腙：也叫二苯- -硫腙結(jié)構(gòu)式為：硫腙結(jié)構(gòu)式為：測(cè)定(cdng)很多重金屬離子，如：鉛、鋅、銅、銀、汞、鎘等。第一百零三頁，共115頁。（二）對(duì)顯色（二）對(duì)顯色(xin s)反應(yīng)的要求：反應(yīng)的要求：1 定量反應(yīng)；有色化合物的組成要恒定，定量反應(yīng)；有色化合物的組成要恒定，2 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。3 顯色顯色(xin s)劑的顏色與有色化合物的顏色差別要大劑的顏色與有色化合物的顏色差別要大4 靈

34、敏度要高；靈敏度要高； 要足夠大要足夠大103 1055 選擇性要好：反應(yīng)的條件要易于控制。選擇性要好：反應(yīng)的條件要易于控制。第一百零四頁，共115頁。（三）反應(yīng)（三）反應(yīng)(fnyng)(fnyng)的條件：的條件：1.顯色劑用量：顯色劑用量：顯色反應(yīng)就是將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有顯色反應(yīng)就是將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)，其反應(yīng)一般可用下式色化合物的反應(yīng)，其反應(yīng)一般可用下式代表：代表：MR = MR反應(yīng)具有一定反應(yīng)具有一定(ydng)的可逆性，當(dāng)?shù)目赡嫘?，?dāng)加大加大 R 的用量時(shí)，有利于反應(yīng)向右進(jìn)的用量時(shí)，有利于反應(yīng)向右進(jìn)行。行。第一百零五頁，共115頁。 但要注意，加入的顯色劑用量也不能太但要注

35、意，加入的顯色劑用量也不能太多，否則產(chǎn)生多，否則產(chǎn)生(chnshng)副反應(yīng)，對(duì)副反應(yīng)，對(duì)測(cè)定產(chǎn)生測(cè)定產(chǎn)生(chnshng)不利例如：用不利例如：用 SCN-與與 Fe3+反應(yīng)生成紅色配合物測(cè)定反應(yīng)生成紅色配合物測(cè)定鐵時(shí)，當(dāng)加入的顯色劑太多時(shí)，就會(huì)對(duì)鐵時(shí)，當(dāng)加入的顯色劑太多時(shí)，就會(huì)對(duì)測(cè)定產(chǎn)生測(cè)定產(chǎn)生(chnshng)不利。不利。第一百零六頁，共115頁。實(shí)驗(yàn)的方法為：固定待測(cè)組分的濃度實(shí)驗(yàn)的方法為：固定待測(cè)組分的濃度和其它條件，分別和其它條件，分別(fnbi)(fnbi)加入不同加入不同量的顯色劑，分別量的顯色劑，分別(fnbi)(fnbi)測(cè)定它們測(cè)定它們的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，顯色的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，顯色劑用量為橫坐標(biāo)作圖，可得到吸光劑用量為橫坐標(biāo)作圖，可得到吸光度度顯色劑用量的曲線，其結(jié)果分為顯色劑用量的曲線，其結(jié)果分為三種情況：三種情況：第一百零七頁，共115頁。2.2.溶液酸度：溶液酸度： 酸度對(duì)顯色反應(yīng)