8食品中辛基酚等5種酚類物質(zhì)的測定

1、附件2食品中辛基酚等5種酚類物質(zhì)的測定BJS 2019131范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)左了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的液相色譜-串聯(lián)質(zhì) 譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰兒配方食品、畜肉、禽蛋、水產(chǎn)品、罐頭食品、植物油中辛基酚、正辛基 酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的測立。2原理試樣中加入同位素內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)乙臘提取，離心，取上淸液經(jīng)固相萃取柱凈化，采用液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測左，內(nèi)標(biāo)法左量。3試劑和材料除另行規(guī)泄外，本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)泄的一級水。3.1試劑3.1.1甲醇（CHsOH）：質(zhì)譜級。3.1.2乙臘（CHsCN）：質(zhì)譜級。3.1.3氨水（NH_|OH）：色譜

2、級。3.2試劑配制0.05%氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3） 0.5mL用水稀釋至1000 mL.3.3標(biāo)準(zhǔn)品辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和辛基酚-13C6、正辛基酚 壬基酚-13C6、正壬基酚-6、雙酚A -D4同位素內(nèi)標(biāo)的中文名稱、英文需稱、CAS登錄號、分 子式、相對分子量見附錄A表A.1,純度98%o3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制341標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(100mg/L)：分別稱取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A標(biāo) 準(zhǔn)物質(zhì)(3.3 ) 10 mg (精確至0.000 lg),用甲醇(3.1.1)溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中， 泄容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)儲備液濃度為10

3、0 mg/L.溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，貯存于-20 °C冰箱中，有效 期12個(gè)月。3.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1 mg/L)：分別準(zhǔn)確吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙 酚A標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 mg/L)(3.4.1) 1 mL至100mL容量瓶中，用甲醇左容至刻度，搖勻，制成 1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，宜于4 °C冰箱中保存，有效期3個(gè)月。3.4.3同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(100 mg/L)：分別稱取辛基酚-13C6.正辛基酚-Dm壬基酚-13C6. 正壬基酚小4、雙酚A-D4同位素內(nèi)標(biāo)(3.3) 10 mg (精確至0.000 1 g),用

4、甲醇(3.1.1)溶解, 并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，啟容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)儲備液濃度為100 mg/Lo溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中， 貯存于-20 °C冰箱中，有效期12個(gè)月。3.4.4同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1 mg/L)：分別準(zhǔn)確吸取辛基酚-13C6、正辛基酚-D“、壬 基酚-13C6、正壬基酚-6、雙酚A-Di同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100mg/L)(3.4.3)并1 mL至100 mL 容疑瓶中，用甲醇左容至刻度，搖勻，制成1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中， 宜于4 °C冰箱中保存，有效期3個(gè)月。3.4.5同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100卩0L)：分別準(zhǔn)確

5、吸取同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 mg心(344)各1 mL至10mL容量瓶中，用甲醇左容至刻度，搖勻，制成100 pg /L的混合標(biāo) 準(zhǔn)工作液。臨用時(shí)配制。3.4.6混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(1 mg/L)(3.4.2)適量，加入同位素內(nèi)標(biāo) 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1 mg/L) (3.44),使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A濃度 分別為0.5 pgL. 1 ng/L> 5賂L、10pg/L、20 和50 pg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用 時(shí)配制。3.5材料固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200 mg, 6 mLo4儀器和設(shè)備4.1髙效液相色譜

6、-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。4.2天平：感量分別為0.00lg和0.000 lg。4.3渦旋混合器。4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速>8000 r/mino4.5超聲波涓洗器。5分析步驟5.1試樣制備5.1.1乳粉、米粉：試樣混合均勻，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20C冰箱冷藏保存。5.1.2禽蛋：取代表性試樣約200 g,去殼后用組織勻漿機(jī)攪拌均勻，裝入潔凈容器中，密封并 標(biāo)明標(biāo)記，于-20 °C冰箱中冷藏保存。5.1.3水產(chǎn)品、畜肉：取代表性試樣約200 g,用勻漿機(jī)勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo) 明標(biāo)記，于-20 °C冰箱中冷藏保存。5.1.4植物油：試樣混合均勻，裝

7、入潔凈容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20 °C冰箱中冷藏保存。5.1.5罐頭食品：取罐頭中固形物試樣約50 g,用勻漿機(jī)勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo) 明標(biāo)記，于-20 °C冰箱中冷藏保存。冷藏保存后的樣品解凍后需再次經(jīng)勻漿機(jī)均質(zhì)后使用。5.2提取準(zhǔn)確稱取1 g （精確至0.001 g）樣品于15 mL具塞玻璃試管中，加入0.1 mL同位素內(nèi)標(biāo)混 合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100 pg/L) (3.4.5)和5 111L乙臘(3.1.2),渦旋混勻,超聲提取15 min, 8000 r/min 離心5 min,取上層乙臘相：殘留部分再用5mL乙購重復(fù)提取一次，合并乙臘相，置冰箱-20

8、°C 冷凍2h,取岀于8000 r/min離心5 min,取上淸液待凈化。5.3凈化取固相萃取柱(3.5),使用前用18 mL甲醇活化,6mL水平衡。將5.2項(xiàng)所得上淸液加30 mL水稀釋，充分搖勻后以1 mL/min2 mL/min的速度上樣，棄去濾液，用12 mL60 %甲醇水溶 液(V/V)淋洗，棄去淋洗液，再用6mL乙臘洗脫，洗脫液于50°C用氮?dú)獯抵两伞Ｓ肐mL 甲醇溶解殘?jiān)?，待測。5.4空白試驗(yàn)除不加樣品外，采用相同的分析步驟進(jìn)行操作。5.5儀器參考條件5.5.1色譜條件a) 分析柱：Cis柱(3 pm, 50 mm x 3 mm),或性能相當(dāng)者；捕集柱：Cw

9、柱(5 jim, 50 mm x 4.6 mm),或性能相當(dāng)者：捕集柱位于進(jìn)樣閥之前。b) 流動(dòng)相:A為0.05%氨水溶液(3.2), B為甲醇(3.1.1),洗脫梯度見表1。c )流速：400 jiL/min。d) 柱溫：300e) 進(jìn)樣量：10 pL。表1梯度洗脫程序表時(shí)間(min)A(%)B(%)07030959514.559514.5170301870305.5.2質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）。c）碰撞氣為髙純氮?dú)?，干燥氣、霧化氣、鞘氣等均為氮?dú)饣蜍谒线m氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng) 參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度

10、、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、 碰撞能戢、碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測離子對和立量離子對等信息詳見附錄B。 5.6定性測定按照超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜條件測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn) 溶液中各化合物的色譜保留時(shí)間，當(dāng)試樣中檢出與某標(biāo)準(zhǔn)品色譜H金保留時(shí)間一致的色譜穌（變 化范用在±2.5%之內(nèi)），并且試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶 液的離子相對豐度比（k）的偏差不超過表2規(guī)泄的范用，可以確衛(wèi)試樣中檢岀相應(yīng)化合物。表2定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（）k>50%50%k>20%20%k>10%k

11、lO%允許的最大偏差（）±20±25±30±505.7定呈測定5.7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（346）分別按儀器參考條件（5.5）進(jìn)行測定，得到目標(biāo)化合物峰面 枳與內(nèi)標(biāo)峰而積的比值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中目標(biāo)化合物的濃度。對照品色譜圖參見附錄C。5.7.2試樣溶液的測定將試樣溶液（5.3）按儀器參考條件（5.5）進(jìn)行測左，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜山筆面積。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度，平行測怎次數(shù)不少于兩次：樣品中各待測組分的響應(yīng) 值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性響應(yīng)范國內(nèi)，若超岀標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范用，應(yīng)用甲醇（3.1.1）稀釋后進(jìn)行 分析。6結(jié)果

12、計(jì)算結(jié)果按式（1）計(jì)算:(c-q)xVx f(1)式中：X試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（pg/kg）；c由標(biāo)準(zhǔn)曲線得岀的樣液中某種組分的濃度，單位為納克每亳升（pg/L）；J由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的過程空白樣品中某種組分的濃度，單位為微克每升ggZL）V試樣溶液左容體積，單位為亳升（mL）：皿一試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）：f-稀釋因子。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測泄結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效 數(shù)字。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測泄結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。8檢出限和定呈限當(dāng)稱樣量為lg,泄容體積為ImL時(shí)，本方法中辛基酚、正辛基酚、壬基酚

13、、正壬基酚和雙酚A的檢出限均為10j.ig.4cg,立量限均為2.Ojig'kg 9其他9.1實(shí)驗(yàn)中所用的器具均為玻璃材質(zhì)，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的管線均為不銹鋼或聚四氟乙烯材 質(zhì)。9.2嚴(yán)格控制試劑空白，空白值應(yīng)不得對檢測結(jié)果產(chǎn)生明顯影響，否則扣除空白時(shí)會引起較大的誤差。附錄A辛基酚等5種酚類物質(zhì)相關(guān)信息表A.1辛基酚等5種酚類物質(zhì)英文名稱、中文名稱、分子式、CAS號、相對分子質(zhì)呈序號中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量1辛基酚4-tert-Octyl phenol140-66-9c14h22o206.332正辛基酚4-n-Octyl phenol1806-26-4CHH22O

14、206.333壬基酚Nonylphenol25154-52-3c15h24o220.354正壬基酚4-n-Nonylphenol104-40-5C15H24O220.355雙酚ABisphenol A80-05-7CI5H16O2228.296辛基酚-13C64-tert-Octylphenol-13C61173020-24-0G4H22O212.287正辛基酚4-n-Octyl phenol-D171219794-55-4CD3（CD2）?C（、H4OH223.438壬基酚-13C63,63-Nonylphenol-13C61173020-38-6G5H24O226.409正壬基酚-Da4-

15、n-Nonylphenol -2,3,5.6D4,OD358730-95-7CI5HI9D50225.3810雙酚A-D4Bisphenol A 33,5,5'D4347841-41-2C15H12D4O2232.314附錄B超高效液相三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件a）電離方式：電噴霧負(fù)離子模式：b）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）：c）離子源溫度（TEM）:650°C;d）霧化氣（Gasl）: 55;c）輔助氣（Gas2）: 65；f）氣簾氣（Gurtain Gas）: 20;g）電噴霧電壓:-4500V：h）干燥氣流速:llL/min；i）左性離子、左量離子、碎裂電

16、壓和碰撞能量見表B.1。表B化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)化合物QIQ3DPVCE/V辛基酚205133*-80-28205117-80-80正辛基酚205106*-80-28205119-80-54牛壬基酚219133*-80-40219147-80-404-正壬基酚219106*-80-30219119-80-45雙酚A227212*-80-25227133-80-35辛基酚-13C6211139*-73-32正辛基酚門222108*-80-28壬基酚-13C6225138.9*-90-38正壬基酚-D4223110*-80-28雙酚A-D4231216*-80-28*定量離子。附錄c

17、超高效液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖畑？停 “ -MRN(2O 231.M216.000 Ds ID: XK cf44RM (20 pa矇 2270X1212.033 Da ID:璉ATime, minB.511834 正壬基酚50e4B.611.81壬基酚Da3.0e42M-ZCi1 r”； 10.010.511.011.5120Time, min »Cd.MRM<20 paiGrMOOQmOOO Da ID <4 趟仁12.513.013514.010.511.011.512.012513.013.514.0Time, minMax.25e4申 »Cr

18、f4.(%l20ps211.Md39.400DaIIXto.cf-MRM (20 pariy 21S.0W10S.OJ0 Di ID: 25.曲彳加:a XCofAflM 01 血 205.MC 103.400 Di ID;應(yīng)樋.Ms. ft6H cps XC cf-MRM 應(yīng) pa琲 222000*101.000 Da ID.浚XB.980.11454 正辛基酚B.1O1140辛基酚D17畑.3俯2妙10.010511011512D12.513.0Tire, ming o!Lt_T_t_rTn_T_t_rTn_t_T_T_rt_t_T_t_rT_t_t-匕 | | | | | | | ll9510.010.5H.311512.012