乳酸菌的分離與初步鑒定

1、學(xué)院：漓江學(xué)院年級專業(yè)： 09 生物技術(shù)組員：吳漢川 7005楊隆荷 7006李 翠 7007王志遠(yuǎn) 7008乳酸菌的分離及初步鑒定一、實驗?zāi)康? 了解和掌握放線菌的菌種特性和分離方法2 初步掌握軍中篩選方法設(shè)計3 掌握平菌種的選育二、實驗原理乳酸菌是指以糖為原料， 屬于真細(xì)菌綱真細(xì)菌目中的乳酸細(xì)菌科。 乳酸細(xì)菌 科根據(jù)細(xì)胞呈球狀或呈桿狀，又分成乳酸桿菌族和鏈球菌族。在BCG 牛乳培養(yǎng)基瓊脂平板上，乳酸菌菌落大約 1-3 mm，圓形隆起，表面光 滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黃色；在產(chǎn)酸菌落周圍還能產(chǎn)生CaCO3的溶解圈。乳酸菌革蘭氏染色呈陽性，涂片鏡檢細(xì)胞桿狀或鏈球狀。乳酸桿菌呈桿狀，成單

2、桿、雙桿或長絲狀；乳酸桿菌，呈球狀，成對或短鏈 或長鏈狀。乳酸菌革蘭氏染色后呈藍(lán)紫色。平板涂布法 平板涂布法是將樣品經(jīng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單 個細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上， 經(jīng)過培養(yǎng)， 由每個單個細(xì)胞生長繁殖 而形成肉眼可見的菌落，即一個但菌落代表原樣品中的一個單細(xì)胞。生理鹽水：稱取 9g氯化鈉，溶解在少量蒸餾水中，稀釋到 1000毫升。四、實驗器材與試劑含乳酸菌的酸奶、結(jié)晶紫、盧哥氏碘液、 95%乙醇、蕃紅溶液、滅菌 CaCO3 粉末、 NaCl；BCG 牛乳培養(yǎng)基： (A) 溶液：脫脂乳粉 100g，水 500mL，加入 1.6%溴甲酚 綠 (，80滅菌 20min。(

3、B)溶液：酵母膏 10g，水 500mL，瓊脂 20g, pH6.8, 121 濕熱滅菌 20min。以無菌操作趁熱將 (A) 、(B)溶液混合均勻后倒平板。1000ml燒瓶一個, 無菌培養(yǎng)皿 9個, 500ml容量三角瓶 2個，25ml 無菌移液 管 1 只，20ml 無菌試管 7 只，1ml 無菌移液管 6只，培養(yǎng)基分裝器一個，玻棒 2 根, 無菌涂布器 3 只，酒精燈一盞，接種環(huán)一個，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架， 載玻片，蓋玻片， pH 試紙若干，液體石蠟，棉塞，吸管，牛皮紙，線繩、標(biāo)簽 等。五、實驗步驟1. 菌懸液的配制取 1 潔凈三角瓶，盛以 225ml 生理鹽水； 7 只潔凈試管，

4、各盛 9ml 的生理鹽 水；加塞包扎于在 103kPa 121高壓蒸汽滅菌 20Min，得到無菌生理鹽水。將酸奶樣品攪拌均勻，用無菌移液管吸取樣品 25ml 加入盛有 225ml 無菌生 理鹽水的三角瓶中，在旋渦均勻器上充分振搖，使樣品均勻分散，即為 10-1 的 樣品稀釋液；將 7 只裝 9ml 生理鹽水的無菌試管，依次標(biāo)記 10 -2、 10-3 、10-4 、10-5、10-6 、 10-7，再用無菌移液管吸 10-1的菌懸液 1ml 放入依次裝有 9ml 無菌水的試管中， 稀釋混勻便得到 10-2 稀釋液，如此重復(fù)依次制得 10-3 10-7的稀釋液。2. 倒平板把滅菌的 CaCO3加

5、入融化了的培養(yǎng)基中 ,于自來水中迅速冷卻培養(yǎng)基至 46 左右 （手感覺到有點燙 ,但能長時間握住 ）,邊冷卻邊搖晃使 CaCO3混勻 ,但不得產(chǎn) 生氣泡。取無菌平板 9 個，編號標(biāo)明 10-5、10-6、10-7各三套；將經(jīng)高溫消毒的培養(yǎng)基 冷卻到 50左右，按無菌操作法倒 9 只平板，每皿約 15ml；平置使培養(yǎng)基均勻 分布在皿底，待凝固。3. 分離方法用三支 1ml無菌移液管分別吸取 10-5、10-6 和 10-7的稀釋菌懸液各 1ml，對號 接種于與之對應(yīng)的 3 個無菌平板中，每個平皿放 0.1ml ；盡快用無菌玻璃涂棒將 菌液在平板上涂布均勻，平放于試驗臺上 20 Min ；然后倒置于 40恒溫箱中培 養(yǎng) 48 小時。4. 菌落觀察恒溫培養(yǎng) 48 小時過后，取出培養(yǎng)平板；選擇菌落分布較好的平板，先對其 菌落形態(tài)進(jìn)行觀察，初步找出乳酸菌菌落。乳酸菌的菌落很小，大約1-3 mm，圓形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黃色；在產(chǎn)酸菌落周圍還 能產(chǎn)生 CaCO3 的溶解圈。5. 鏡檢 取干凈載玻片一塊，在載玻片中央加一滴生理鹽水，無菌操作法取少量菌體 涂片；結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復(fù)染