一品紅灰霉菌抗病性篩選及其防治研究

1、    一品紅灰霉菌抗病性篩選及其防治研究    程東美+方小穩(wěn)+張志祥+勞子良摘要：采用離體葉片菌絲塊接種法測試了5個(gè)一品紅（euphorbia pulcherrima）品種對灰霉菌（botrytis cinerea）的抗性，并以含毒介質(zhì)培養(yǎng)法測定了11種殺菌劑對一品紅灰霉病的毒力，盆栽試驗(yàn)研究了4種殺菌劑對一品紅灰霉病的防治效果?？剐詼y定結(jié)果表明，sl屬于高抗品種，slw屬于中抗品種。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，氟硅唑、醚菌酯、咯菌腈和吡唑醚菌酯對一品紅灰霉菌有較高的活性，其抑制中濃度ec50分別為6.55、9.33、12.77和13.40 g/ml；盆栽

2、結(jié)果表明，250 g/l醚菌酯懸浮劑對灰霉病的田間防效最好，防效為83.19%，明顯優(yōu)于其他供試殺菌劑。關(guān)鍵詞：一品紅（euphorbia pulcherrima）；灰霉菌（botrytis cinerea）；抗性測定；殺菌劑；田間防效：s432.4+4 ：a ：0439-8114（2017）16-3078-03doi：10.14088/ki.issn0439-8114.2017.16.019screening of disease resistance of euphorbia pulcherrima tobotrytis cinerea and its control researchch

3、eng dong-mei1，fang xiao-wen1，zhang zhi-xiang2，lao zi-liang1（1.department of plant protection， zhongkai university of agriculture and engineering，guangzhou 510225，china；2.ministry of education， key laboratory of natural pesticide and chemical biology， south china agricultural university， guangzhou 51

4、0642，china）abstract： five cultivars of euphorbia pulcherrima were used to identify their resistance to botrytis cinerea，and the toxicities of 11 fungicides and pot experiment on b. cinerea were tested. the disease resistance tests by artificial inoculation in vitro showed that sl was highly resistan

5、ce cultivars and slw was moderate resistance cultivars. the results of toxicity showed that the ec50 of flusilazole，kresoxim-methyl， fludioxonil and pyraclostrobin on b. cinerea were 6.55，9.33，12.77，and 13.40 g/l， respectively. the results of pot experiment indicated that field efficacy of 250 g/l a

6、zoxystrobin sc was 83.19% and obviously higher than other tested fungicides.key words： euphorbia pulcherrima； botrytis cinerea； resistance identification； fungicide； field efficacy一品紅（euphorbia pulcherrima）又名圣誕花、猩猩紅、墨西哥紅葉等，原產(chǎn)墨西哥，是大戟科大戟屬多年生木本花卉。作為西方圣誕節(jié)用花，一品紅在歐美市場上占有舉足輕重的位置。近年來，一品紅的產(chǎn)值列歐美盆花植物的第二位，日本、荷蘭

7、、丹麥、英國、德國等國家的一品紅產(chǎn)值也均在盆花前10位。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2006年美國和歐洲一品紅的產(chǎn)量均在1.2億盆左右。在中國，由于一品紅苞葉紅色，具有喜慶氣氛，符合人民審美要求，消費(fèi)群體大，一方面作為家庭裝飾的盆花，另一方面大量一品紅以組盆方式用來裝點(diǎn)賓館、寫字樓、會場等公共場所1；一品紅還是重要的切花，可用于制作花籃、花圈及插花作品；一品紅的銷售季節(jié)長，通過花期調(diào)控，在國慶、圣誕、元旦、春節(jié)等節(jié)日都能出售2，使銷售季節(jié)綿延近半年。因此，一品紅成為中國盆花發(fā)展最快的種類。1998年全國的生產(chǎn)總量約50萬盆，1999年120萬盆，2002年500萬盆，2005年1 200萬盆，2007年1

8、800萬盆，目前的產(chǎn)量已經(jīng)超過2 000萬盆，并呈現(xiàn)持續(xù)上揚(yáng)的發(fā)展態(tài)勢。據(jù)業(yè)內(nèi)人士估計(jì)，在未來幾年，中國的一品紅產(chǎn)量每年仍有10%30%的增長空間3?；颐共∈锹兜?、保護(hù)地作物常見且比較難防治的一種真菌性病害，在一品紅的整個(gè)生長季都可能發(fā)病，是一品紅栽培中最常見的病害，病菌可引起葉片、花器、插穗腐爛和莖部潰瘍4，在冬季苞葉變色期間，發(fā)生尤其嚴(yán)重，一旦遇陰雨綿綿、潮濕寡日照，往往防治困難5。在廣東地區(qū)，一品紅灰霉病發(fā)病率較高，45月扦插的插條莖、葉均可表現(xiàn)癥狀，1112月則以植株上部幼嫩枝葉和苞片感染為主，其中以14月發(fā)病最為頻繁，尤其是重瓣花品種發(fā)病重4。一品紅灰霉病防治主要采用化學(xué)藥劑，合理密

9、植和降低濕度等措施在生產(chǎn)中使用不多，抗病品種的選育研究較少。本研究測試了東莞市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心選育的5個(gè)一品紅品種的抗病性，并測定11種殺菌劑對灰霉病的毒力，以當(dāng)前廣東省種植最為普遍的品種金獎(jiǎng)為對象，比較4種殺菌劑對灰霉病的盆栽防治效果。endprint1 材料與方法1.1 材料1.1.1 供試植物 供試一品紅品種有hh（紅荷）、hhw、sl（閃亮）、slw和金獎(jiǎng)，其中hh、sl是新品種，是以威望為母本，金獎(jiǎng)為父本的雜交后代。室內(nèi)接種試驗(yàn)的所有供試一品紅苗均由東莞市花卉種子研究所提供。大田試驗(yàn)的一品紅種苗品種為金獎(jiǎng)，由廣州怡華園藝有限公司提供。1.1.2 供試菌種 一品紅灰霉菌（botryti

10、s cinerea）分離自東莞市花卉種子研究所提供的感病一品紅植株，由仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院植物病理研究所分離鑒定。1.1.3 供試藥劑 400 g/l氟硅唑乳油，美國杜邦公司；50%異菌脲懸浮劑，美國富美實(shí)公司；50%卉友（咯菌腈）懸浮劑、250 g/l阿米西達(dá)（醚菌酯）懸浮劑、50%繪綠（嘧菌酯）水分散粒劑、10%世高（苯醚甲環(huán)唑）水分散粒劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司；250 g/l凱潤（吡唑醚菌酯）乳油、50%潤澤（啶酰菌胺）水分散粒劑，德國巴斯夫公司；50%速克寧（腐霉利）可濕性粉劑，日本住友化學(xué)株式會社；400 g/l嘧霉胺懸浮劑，陜西上格之路生物科學(xué)有限公司；10%多抗霉素可濕性粉劑，

11、績溪農(nóng)華生物科技有限公司。1.2 方法1.2.1 不同品種一品紅對灰霉病的抗性測定 采用離體葉片菌絲塊接種法。每個(gè)一品紅品種選3株苗（苗高10 cm，盆徑7 cm），每株苗分別從上、中、下3個(gè)部位摘取葉片，共摘取9片葉。葉片以清水沖洗，酒精擦拭干凈，晾干，備用。用直徑為0.6 cm的打孔器將在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基上生長5 d的灰霉菌打成菌絲塊，每片葉接種2個(gè)菌絲塊，接種后將葉片置于9 cm的培養(yǎng)皿中，于25 條件下保濕培養(yǎng)，于處理后連續(xù)調(diào)查葉片的發(fā)病情況，一品紅灰霉病的分級標(biāo)準(zhǔn)為：0級，無病斑；1級，葉片病斑較少，病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；3級，病斑較多，病斑面積占整個(gè)葉面積的5%30%；5

12、級，病斑較多，病斑面積占整個(gè)葉面積的31%50%；7級，病斑很多或融合成大斑，病斑面積占整個(gè)面積的50%以上。1.2.2 品種抗性的劃分方法 參考朱麗梅等6的方法，以病情指數(shù)為基礎(chǔ)，采用相對抗病性的方法評價(jià)其抗病程度，根據(jù)相對抗性指數(shù)進(jìn)行抗性劃分。病情指數(shù)=（發(fā)病級值×各級病株或病葉數(shù)目）/（樣本總數(shù)×最高發(fā)病級值）。抗性水平分為免疫（i）、高抗（hr）、中抗（mr）、中感（ms）、高感（hs）；相對抗性指數(shù)：免疫（i）為1.00，高抗（hr）為0.700.99，中抗（mr）為0.400.69，中感（ms）為0.200.39，高感?。╤s）為<0.20。相對抗性指數(shù)=

13、1-相對病情指數(shù)；相對病情指數(shù)=鑒定品種平均病情指數(shù)/對照品種平均病情指數(shù)（以病情指數(shù)最高的品種為對照品種）。1.3 殺菌劑對一品紅灰霉菌的毒力殺菌劑活性篩選采用含毒介質(zhì)培養(yǎng)法7，將田間推薦使用濃度稀釋50倍作為預(yù)備試驗(yàn)濃度，根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)的抑菌率結(jié)果，確定毒力測定的濃度范圍。以無菌水將藥液配制供試濃度稀釋50倍的母液，然后分別取1 ml母液加入到50 左右的定量（49 ml）培養(yǎng)基內(nèi)，倒3個(gè)平板，使平板內(nèi)藥劑濃度為供試濃度，待平板凝固后在平板中央接入供試菌絲塊。對照以無菌水處理。處理后放入培養(yǎng)箱，25 培養(yǎng)，定期測量對照及處理的菌落直徑，計(jì)算抑菌率，求得毒力回歸方程、抑制中濃度ec50和相關(guān)系

14、數(shù)r。1.4 田間藥效試驗(yàn)試驗(yàn)期間（2014年4月822日），溫度為1731 ，有5 d為陣雨轉(zhuǎn)多云，其余皆是陰天或陰轉(zhuǎn)多云，微風(fēng)。1.4.1 一品紅的種植 試驗(yàn)選用的一品紅為金獎(jiǎng)的810葉苗，2014年3月25日由廣州怡華園藝有限公司提供，種植基質(zhì)為泥炭土，植株置于帶紗網(wǎng)的大棚內(nèi)，按常規(guī)栽培方式管理。1.4.2 殺菌劑的處理方法 取定植一周的盆栽一品紅，將配制好的殺菌劑溶液用噴壺均勻噴在植株葉片上，噴至葉片上有水滴滴下，噴藥2 d后，接灰霉菌，7 d后進(jìn)行第2次噴藥處理。每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10盆一品紅苗，各小區(qū)間隔20 cm以上，采用隨機(jī)區(qū)組排列。1.4.3 一品紅灰霉菌接種物的準(zhǔn)備

15、及接種處理 將菌種無菌操作接種在pda培養(yǎng)基上，28 培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 d，用無菌水清洗，配成1×106個(gè)孢子/ml的孢子懸浮液（0.1%吐溫），在第一次施藥后2 d將孢子懸浮液均勻噴施于一品紅植株，至葉片有水滴流下為止。噴灑孢子懸浮液處理后的一品紅植株按正常栽培方式管理。1.4.4 病害統(tǒng)計(jì)及殺菌劑防效 分別于處理前、殺菌劑處理后3、7、14、21 d調(diào)查植株的發(fā)病率、病情指數(shù)，并計(jì)算防治效果。統(tǒng)計(jì)病害情況，按“1.2.1”灰霉病的分級標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)病害級數(shù)，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。相對防治效果=（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/（對照病情指數(shù)）×100%。2 結(jié)果與分析2.1 一品

16、紅不同品種對灰霉病的抗病性供試的5個(gè)品種離體葉片人工接種灰霉病菌后的發(fā)病情況見表1。由表1可知，不同品種一品紅對灰霉病的抗病性差異明顯，未發(fā)現(xiàn)完全免疫品種。5個(gè)品種可分為3種抗病類型，hh、hhw和金獎(jiǎng)的發(fā)病率分別為75%、100%和100%，病情指數(shù)分別為0.75、0.64和0.71，相對抗病指數(shù)分別為0.25、0.36和0.29，屬于中感品種；sl的發(fā)病率、病情指數(shù)和相對抗性指數(shù)分別為50%、0.11和0.89，屬于高抗品種；slw的發(fā)病率、病情指數(shù)和相對抗性指數(shù)分別為63%、0.37和0.63，屬于中抗品種。2.2 離體接種條件下一品紅不同品種的病情發(fā)展動(dòng)態(tài)對離體接種灰霉菌的一品紅品種進(jìn)

17、行病情系統(tǒng)調(diào)查，其病情發(fā)展動(dòng)態(tài)見圖1。由圖1可知，中感病品種hh、hhw和金獎(jiǎng)發(fā)病早，病情發(fā)展速度快，發(fā)病重；抗病品種sl和slw發(fā)病晚，病情發(fā)展緩慢，發(fā)病較輕。隨著品種抗病性的增強(qiáng)，發(fā)病速度和病情指數(shù)逐漸降低。endprint2.3 幾種殺菌劑對一品紅灰霉菌的毒力11種殺菌劑對一品紅灰霉菌的毒力見表2。由表2可見，氟硅唑、醚菌酯、咯菌腈和吡唑醚菌酯均具有較好的效果，對一品紅灰霉菌的抑制中濃度ec50分別為6.55、9.33、12.77和13.40 g/ml；其次為啶酰菌胺和異菌脲，ec50分別為31.31和32.65 g/ml；多抗菌素和苯醚甲環(huán)唑再次之，ec50分別為61.31和114.8

18、6 g/ml；嘧霉胺、嘧菌酯和腐霉利的毒力較差，ec50均大于200 g/ml。2.4 幾種殺菌劑對一品紅灰霉菌的盆栽防效4種殺菌劑對一品紅灰霉菌的田間防治效果見表3。由表3可知，藥劑處理后21 d，250 g/l醚菌酯懸浮劑對灰霉病的田間防效顯著高于其他藥劑，為83.19%；其次為250 g/l吡唑醚菌酯乳油和50%咯菌腈懸浮劑，防效分別為68.53%、43.75%，二者之間差異不顯著，但顯著高于400 g/l氟硅唑乳油；400 g/l氟硅唑乳油的防效顯著低于其他藥劑，為25.86%。3 小結(jié)本研究結(jié)果表明，不同一品紅品種對灰霉菌的抗性是相對的。在同等發(fā)病條件下，一品紅灰霉菌的發(fā)病速度和發(fā)病情況也存在著明顯的差異。hh、hhw和金獎(jiǎng)的相對抗病指數(shù)分別為0.25、0.36和0.29，屬于中感品種；sl相對抗性指數(shù)為0.89，屬于高抗品種；slw的相對抗性指數(shù)為0.63，屬于中抗品種。而在離體接種條件下，中感病品種hh、hhw和金獎(jiǎng)發(fā)病早，病