園林植物報(bào)春花的組織培養(yǎng)

1、園林植物報(bào)春花的組織培養(yǎng) 園林植物報(bào)春花的組織培養(yǎng) 摘 要：本試驗(yàn)以報(bào)春花葉片、莖段作為外植體，進(jìn)行了初代組織培養(yǎng)，并進(jìn)行增殖、生根培養(yǎng)。結(jié)果說明：75%的酒精+0.1%升汞具有很好的消毒作用;MS +6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1是不定芽分化的最正確培養(yǎng)基配比;MS+6-BA 1.0 mgL-1 +NAA 0.2 mgL-1是不定芽增殖的最正確培養(yǎng)基配比;1/2MS+NAA 0.2 mgL-1是生根的最正確培養(yǎng)基配比。 關(guān)鍵詞：報(bào)春花;外植體;培養(yǎng)基 中圖分類號(hào)：S688 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2021.11

2、.036 Tissue Culture of Primula malacoides Franch. HU Wan-yin Abstract： In this experiment， leaves and stems of Primula malacoides Franch. were taken as explants， and conducted the primary tissue culture， and proliferation， rooting culture. The results showed that 75% alcohol 0.1% mercuric chloride h

3、ad good disinfection effect; the best medium ratio for the differentiation of adventitious buds was MS +6-BA 1.0 mgL-1 +NAA 0.2 mgL-1; for adventitious bud proliferation， the optimum culture medium composition was MS+6-BA 1.0 mgL-1 +NAA 0.2 mgL-1; 1/2MS+NAA 0.2 mgL-1 was the best rooting culture med

4、ium composition. Key words： Primula malacoides Franch.; explants; callus culture medium 報(bào)春花 又名小種櫻草、七重樓，報(bào)春花科報(bào)春花屬，葉片長卵形或圓形，葉緣有齒，葉柄長5 cm左右?；ㄝ愀?030 cm，花冠高腳碟狀。多生長于荒野、田邊，原產(chǎn)于中國的云南、貴州，各地栽培，頗具欣賞性。 報(bào)春花原產(chǎn)中國，草本植物。喜氣候溫涼、濕潤的環(huán)境和排水良好、富含腐殖質(zhì)的土壤，不耐高溫和強(qiáng)烈的直射陽光，多數(shù)亦不耐嚴(yán)寒。葉基生，全株被白色絨毛?；ㄍǔ?型，排成傘形花序或頭狀花序?；ㄆ跒?2月至次年4月，早春開花為本屬植物的

5、重要特性，其中文名報(bào)春和學(xué)名均含有早花的意思。近年來開展很快，已成為當(dāng)前一類重要的園林花卉。 組織培養(yǎng)又叫離體培養(yǎng)，通常指從植物體中別離出符合需求的組織，在人工無菌操作條件下，進(jìn)行培養(yǎng)從而獲得再生的完整植株，或者生產(chǎn)出具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。本試驗(yàn)以報(bào)春花葉片、莖段為外植體，進(jìn)行了初代組織培養(yǎng)，并進(jìn)行增殖、生根培養(yǎng)，在建立報(bào)春花組織培養(yǎng)無菌體系的根底上，比照了外植體不同滅菌方法對(duì)滅菌效果的影響，以及不同激素濃度對(duì)報(bào)春花葉片、莖段芽分化、不定芽增殖及其生根的影響。 1 材料和方法 1.1 試驗(yàn)材料 使用材料取自盆栽報(bào)春花的葉片和莖段。 1.2 試驗(yàn)材料的處理 組織培養(yǎng)前，先從室內(nèi)培養(yǎng)的盆栽

6、植株上取生長旺盛的報(bào)春花葉片和嫩莖作外植體，取材后放入燒杯里，用大量的水洗去外表附著物后，再放到自來水管下進(jìn)行二次沖洗，然后放入到瓶中，在超凈工作臺(tái)上再迅速用無菌蒸餾水沖洗3遍后等分為2份。每種消毒劑處理15瓶，每瓶接種4塊，處理方法見表1。最后，用無菌蒸餾水沖洗6次。將葉片橫切和縱切后切成1 cm×1 cm大小，將嫩莖切成1 cm左右的莖段作外植體用。 1.3 培養(yǎng)基配比 根本培養(yǎng)基為MS，瓊脂為6 g，蔗糖濃度為3%，pH 值為5.8。初代培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.5 mgL-1+NAA 0.1 mgL-1;MS+6-BA 0.5 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1;MS

7、+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.1 mgL-1;MS+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1;MS+6-BA 2.0 mgL-1+NAA 0.1 mgL-1;MS+6-BA 2.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1。增殖培養(yǎng)基為：MS+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.1 mgL-1;MS+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1。生根培養(yǎng)基為：1/2MS+NAA 0.1 mgL-1;1/2MS+NAA 0.2 mgL-1。培養(yǎng)室內(nèi)溫度為 ，光照強(qiáng)度1 5002 000 lx，每天光照12 h，補(bǔ)光燈在光照不夠的條件下及時(shí)補(bǔ)光。 2

8、結(jié)果與分析 2.1 不同消毒劑處理的消毒效果 進(jìn)行初代培養(yǎng)10 d后對(duì)120瓶培養(yǎng)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表2。處理、處理的消毒效果差異明顯，處理的消毒效果是處理的17倍，因此單獨(dú)使用酒精對(duì)報(bào)春花外植體進(jìn)行消毒處理，污染率高，效果不太好;而用70%酒精+0.1%HgCl2對(duì)報(bào)春花外植體消毒效果明顯。 2.2 不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織的時(shí)間 經(jīng)過初代培養(yǎng)10 d后，對(duì)每種培養(yǎng)基中莖段和葉片愈傷組織形成情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，從表3可看出，由于培養(yǎng)基配比不同，如果培養(yǎng)基配比適宜，報(bào)春花葉片在第11天就可以形成愈傷組織，而莖段需要在第15天左右才能形成，其誘導(dǎo)時(shí)間比用葉片作為外植體的時(shí)間要長約4 d左右。 2.3

9、激素對(duì)初代培養(yǎng)的影響 將經(jīng)過消毒組合處理好的外植體接種到初代培養(yǎng)基16，培養(yǎng)11 d后，大局部葉片的切塊邊緣首先開始膨大，長出淡綠色的愈傷組織，并呈疏松的顆粒狀，有局部葉片在切口處直接產(chǎn)生不定芽;接種20 d后愈傷組織外表出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，開始分化出0.20.5 cm的不定芽，35 d后頂芽萌動(dòng)并長出側(cè)芽和分枝。 表4是第36天出芽的外植體統(tǒng)計(jì)數(shù)，激素的影響由表4中可以看出。在培養(yǎng)過程中還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)6-BA 2.0 mgL-1、NAA0.1 mgL-1時(shí)，在后期出現(xiàn)局部芽苗玻璃化、失綠現(xiàn)象;當(dāng)NAA 0.2 mgL-1、6-BA 2.0 mgL-1時(shí)，分化出的不定芽形態(tài)明顯弱小;當(dāng)6-BA 1.0

10、mgL-1、NAA 0.2 mgL-1時(shí)，誘導(dǎo)率較高，而且芽苗生長健壯，芽苗利用率也好。因此，初代培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基配比為MS+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1。 2.4 激素對(duì)增殖培養(yǎng)的影響 將初代培養(yǎng)得到的芽叢和分枝切割成帶12個(gè)節(jié)的小段，轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基78上，約15 d后，就可以不斷長出大量的芽和分枝，培養(yǎng)基7和8中的芽都有增殖，但是培養(yǎng)基配比8的效果好，分化叢生芽芽體健壯，數(shù)量多，長勢良好，適合葉、莖段的繼代培養(yǎng)。當(dāng)NAA為0.1 mgL-1時(shí)，有局部芽生長良好，但局部芽體長勢較略差，長不高，影響叢生芽的大量繼代增殖。 2.5 激素對(duì)生根培養(yǎng)的影響 切取分化增殖所得

11、到的高約23 cm生長健壯的叢生芽苗，將分枝切成帶有2個(gè)節(jié)的莖段，轉(zhuǎn)接種到添加不同濃度NAA的生根培養(yǎng)基910中。在生根培養(yǎng)進(jìn)行到第30天的時(shí)候，對(duì)叢生芽的生根情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表6。 當(dāng)在1/2MS根本培養(yǎng)基中添加NAA濃度為0.1 mgL-1時(shí)，生根率為85.0%，平均生根數(shù)到達(dá)12.6條，根長為1. 0 cm左右。當(dāng)添加NAA濃度為0.2 mgL-1后，誘導(dǎo)的叢生芽生根率升高，到達(dá)97.5%，平均生根數(shù)有13.8條左右，并且根粗壯，苗長勢良好，根長為1.4 cm左右。 3 結(jié)論與討論 由于報(bào)春花葉片肉質(zhì)光滑，易于外表滅菌消毒，無菌操作簡單，切割過程也容易操作，瓶苗移栽后管理較粗放，組

12、培繁殖極易見效率，經(jīng)濟(jì)效益亦是可觀的。 因?yàn)橹参矬w外表常附有各種各樣的微生物，無菌操作過程中，對(duì)于植物材料外表的消毒尤為重要，因?yàn)橐坏нM(jìn)培養(yǎng)基，微生物就會(huì)迅速滋生造成植物材料死亡。75%酒精+0.1%HgCl2的消毒處理有更強(qiáng)的殺菌能力和穿透力，而且有濕潤作用，對(duì)報(bào)春花葉片和莖段的消毒處理效果明顯。 植物激素的種類和配比，是使植物組織分化出苗和快速增殖的重要因素，通過此次不同梯度培養(yǎng)基配比，發(fā)現(xiàn)雖然都能使植物分化出苗和增殖，但是低濃度和高濃度的激素配比使植物分化出苗較慢，同時(shí)細(xì)胞分裂素和生長素比例過高，導(dǎo)致玻璃化苗的產(chǎn)生，其中MS+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1激素配比最正確，利于報(bào)春花愈傷組織的生長和分化，進(jìn)行初代培養(yǎng);MS+6-BA 1.0 mgL-1+NAA 0.2 mgL-1是最有利于增殖的培養(yǎng)基;最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mgL-1。 參考文獻(xiàn)： 【1】 王春杰. -色季拉山報(bào)春花屬植物及其根際土壤營養(yǎng)元素積累研究D. 呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2021. 【2】 黃禎強(qiáng). 7種報(bào)春花屬植物溫室越夏栽培研究D.北京：北京林業(yè)大學(xué)，2021. 【3】 張騫. 四川省報(bào)春花