免疫濁度技術(shù)-文檔資料

1、實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫反應(yīng)進(jìn)展1897年 Kraus 就發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液（毒素）與相應(yīng) 抗血清混合出現(xiàn)沉淀1905年 Bechhold 把抗體放在明膠中，將抗原加于 其中，發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)可在凝膠中進(jìn)行1946年 Oudin 報(bào)告了試管免疫擴(kuò)散技術(shù)1965年 Mancini 提出單向免疫擴(kuò)散技術(shù)，使定性 免疫試驗(yàn)向定量化發(fā)展1966年 免疫濁度法的出現(xiàn)，使沉淀反應(yīng)達(dá)到快速、微 量、自動(dòng)化的新階段。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫測(cè)定原理免疫測(cè)定原理利用抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)標(biāo)本中微

2、量物質(zhì)利用抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)標(biāo)本中微量物質(zhì) 抗原抗原 + + 抗體抗體 抗原抗體復(fù)合物抗原抗體復(fù)合物 Ag + Ab Ag Ag + Ab Ag * * Ab Ab實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫測(cè)定特點(diǎn)免疫測(cè)定特點(diǎn)特異性特異性 抗原性不同的物質(zhì)不干擾敏感性敏感性 g-ng-pg可測(cè)物可測(cè)物 蛋白質(zhì)，酶，激素，藥物 ， 毒品實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫檢測(cè)的基礎(chǔ)免疫檢測(cè)的基礎(chǔ)抗原抗體間的特異性反應(yīng)抗原抗體間的特異性反應(yīng) 手工操作手工操作 自動(dòng)化分析自動(dòng)化分析免疫比濁分析技術(shù)發(fā)展

3、免疫比濁分析技術(shù)發(fā)展實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)兩兩個(gè)個(gè)階階段段Edited by E. Dalla Dea ESTS免免疫疫比比濁濁法法分分類類當(dāng)一束光當(dāng)一束光線通過(guò)溶線通過(guò)溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收兩個(gè)吸收兩個(gè)因素的影因素的影響而使光響而使光的強(qiáng)度減的強(qiáng)度減弱弱實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS透射比濁 / 散射比濁光源濾光片反應(yīng)杯透射光檢測(cè)散射光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS一、散射免疫比濁分析原理一、散射免疫比濁分析原理散射比濁法：散射比濁法：在液相中可溶性抗

4、原、抗體特異性結(jié)合，形成一定大小的復(fù)合物粒子，當(dāng)入射光沿水平軸照射在粒子顆粒上時(shí)，光線被顆粒吸收或折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，其偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長(zhǎng)和復(fù)合物顆粒大小和多少有關(guān)。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比，即待測(cè)抗原越多，形成的復(fù)合物越多，散射光就越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 是將沉淀反應(yīng)與散射比濁分析相結(jié)合，是將沉淀反應(yīng)與散射比濁分析相

5、結(jié)合，“在抗原抗體反在抗原抗體反 應(yīng)幾秒鐘后開(kāi)始測(cè)定峰值信號(hào)應(yīng)幾秒鐘后開(kāi)始測(cè)定峰值信號(hào)”。 目的是排除抗原抗體反應(yīng)的目的是排除抗原抗體反應(yīng)的不穩(wěn)定性，降低檢測(cè)誤差不穩(wěn)定性，降低檢測(cè)誤差。時(shí)間時(shí)間檢測(cè)分兩個(gè)檢測(cè)分兩個(gè)在預(yù)反應(yīng)時(shí)段，在預(yù)反應(yīng)時(shí)段，加小量樣本與加小量樣本與抗原抗體反應(yīng)，抗原抗體反應(yīng)，測(cè)定第一次散測(cè)定第一次散射光信號(hào)值射光信號(hào)值加全量樣本，加全量樣本，約反應(yīng)約反應(yīng) 2 2分分鐘后，第二鐘后，第二次測(cè)定散射次測(cè)定散射光信號(hào)光信號(hào)信號(hào)峰值信號(hào)峰值計(jì)算機(jī)處理計(jì)算機(jī)處理轉(zhuǎn)換為樣轉(zhuǎn)換為樣品濃度品濃度實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（二）（二）

6、抗原過(guò)量檢測(cè)抗原過(guò)量檢測(cè)抗體過(guò)量抗體過(guò)量 在檢測(cè)中抗體結(jié)合抗原的能力可達(dá)到相當(dāng)于正常在檢測(cè)中抗體結(jié)合抗原的能力可達(dá)到相當(dāng)于正常 血清的血清的5050倍以上，以保證高濃度樣本中的抗原與倍以上，以保證高濃度樣本中的抗原與 抗體的結(jié)合。抗體的結(jié)合。對(duì)抗原過(guò)量進(jìn)行閾值限定對(duì)抗原過(guò)量進(jìn)行閾值限定 先測(cè)定預(yù)反應(yīng)時(shí)段抗原先測(cè)定預(yù)反應(yīng)時(shí)段抗原- -抗體復(fù)合物的散射光信抗體復(fù)合物的散射光信 號(hào)，若未超過(guò)閾值，可進(jìn)行全量樣本測(cè)定。若超號(hào)，若未超過(guò)閾值，可進(jìn)行全量樣本測(cè)定。若超 過(guò)閾值，提示樣品濃度過(guò)高，需稀釋后測(cè)定。過(guò)閾值，提示樣品濃度過(guò)高，需稀釋后測(cè)定。采用兩項(xiàng)保證措施：采用兩項(xiàng)保證措施：實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免

7、疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 是測(cè)定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。是測(cè)定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。 所謂速率，是在所謂速率，是在單位時(shí)間內(nèi)單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成抗原抗體結(jié)合形成 復(fù)合物的速度。將各單位時(shí)間內(nèi)形成復(fù)合物的復(fù)合物的速度。將各單位時(shí)間內(nèi)形成復(fù)合物的 速率及測(cè)定的散射信號(hào)連接在一起，即是動(dòng)態(tài)速率及測(cè)定的散射信號(hào)連接在一起，即是動(dòng)態(tài) 的速率比濁分析。的速率比濁分析。 當(dāng)儀器測(cè)定到某一時(shí)當(dāng)儀器測(cè)定到某一時(shí) 間內(nèi)形成速率下降時(shí)，間內(nèi)形成速率下降時(shí)， 即出現(xiàn)即出現(xiàn)速率峰速率峰，該峰，該峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所

8、測(cè)抗原的量。測(cè)抗原的量。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 （二）（二）抗原過(guò)量檢測(cè)抗原過(guò)量檢測(cè) 設(shè)計(jì)原理設(shè)計(jì)原理 速率峰值一般在速率峰值一般在2525秒時(shí)出現(xiàn)。秒時(shí)出現(xiàn)。 在反應(yīng)介質(zhì)中加入一定量的促凝劑，可加速抗在反應(yīng)介質(zhì)中加入一定量的促凝劑，可加速抗 原抗體復(fù)合物的形成，以減少反應(yīng)時(shí)間。原抗體復(fù)合物的形成，以減少反應(yīng)時(shí)間。 速率法的優(yōu)點(diǎn)：是快速率法的優(yōu)點(diǎn)：是快 速、不需要減去樣本速、不需要減去樣本 和試劑本底讀數(shù)，校和試劑本底讀數(shù)，校 正結(jié)果也較穩(wěn)定。正結(jié)果也較穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited

9、 by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理當(dāng)光源的光路（角度與正前方夾角為當(dāng)光源的光路（角度與正前方夾角為0 00 0時(shí)），通時(shí)），通 過(guò)一定體積的溶液，由于溶液中抗原抗體結(jié)合復(fù)過(guò)一定體積的溶液，由于溶液中抗原抗體結(jié)合復(fù) 合物粒子對(duì)入射光因反射、吸收或散射而衰減。合物粒子對(duì)入射光因反射、吸收或散射而衰減。 透射光的強(qiáng)度和形成的復(fù)合物的量呈反比。透射光的強(qiáng)度和形成的復(fù)合物的量呈反比。檢測(cè)器檢測(cè)器檢測(cè)器檢測(cè)器光源光源 透鏡透鏡 濾光片濾光片平光線平光線散散射射光光透射光透射光 散射比濁、透射比濁光路圖散射比濁、透射比濁光路圖實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited

10、by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理v 是個(gè)極其簡(jiǎn)單的方法。在抗原過(guò)量情況下，與待測(cè)是個(gè)極其簡(jiǎn)單的方法。在抗原過(guò)量情況下，與待測(cè)樣品中相應(yīng)的樣品中相應(yīng)的IgIg發(fā)生抗原發(fā)生抗原- -抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。v 測(cè)量方法利用分光光度計(jì)測(cè)量被吸收的量。讀數(shù)以測(cè)量方法利用分光光度計(jì)測(cè)量被吸收的量。讀數(shù)以吸收單位（吸收單位（A A）或）或ODOD值表示，值表示，A A值反映了入射光和透射值反映了入射光和透射光的比率。待測(cè)物中光的比率。待測(cè)物中IgIg含量可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出。含量可通過(guò)

11、標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出。v 待測(cè)樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射待測(cè)樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比。光呈反比。v 反應(yīng)在反應(yīng)在PEGPEG的作用下，加速?gòu)?fù)合物的形成。的作用下，加速?gòu)?fù)合物的形成。 實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（二）（二）實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS 檢檢范范圍圍測(cè)測(cè)如免疫球蛋白如免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM 、 ；補(bǔ)體；補(bǔ)體C3C3、C4C4；血漿蛋白血漿蛋白AATAAT、TRFTRF、A1MA1M、CER

12、CER；尿蛋白系列尿蛋白系列尿微量白蛋白尿微量白蛋白 視黃醇結(jié)合蛋白視黃醇結(jié)合蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 2 2 微球蛋白微球蛋白( ( 2 2 M) M) 1 1 微球蛋白微球蛋白( ( 1 1 M)M)小分子治療藥物小分子治療藥物檢檢范范圍圍測(cè)測(cè)血漿、體液中特種蛋白血漿、體液中特種蛋白實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS乳膠2 種反應(yīng)模式:+實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS反應(yīng)過(guò)程圖緩沖液緩沖液試劑試劑1攪拌器攪拌器樣品樣品混混勻勻膠乳膠乳試劑試劑2混混勻勻第一次讀數(shù)第一次讀數(shù)第二次讀數(shù)第二

13、次讀數(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS吸光度/時(shí)間0 02 24 46 68 81010121214140 01 12 23 34 45 56 67 78 89 9 1010 1111 1212 1313 1414時(shí)間時(shí)間OD (吸光度吸光度)空白空白標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS檢測(cè)模式圖最終點(diǎn)最終點(diǎn) D最終點(diǎn)最終點(diǎn) - 樣品空白樣品空白 D - A最終點(diǎn)最終點(diǎn) 初始點(diǎn)初始點(diǎn) D - B動(dòng)力學(xué)動(dòng)力學(xué) (C - B)/ 時(shí)間時(shí)間試劑試劑2（膠乳或抗血清）（膠乳或抗血清）樣品和試

14、樣品和試劑劑1（緩（緩沖液）沖液）時(shí)間D.O.OD 變化變化實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS鉤狀效應(yīng)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS鉤狀現(xiàn)象抗體過(guò)剩區(qū) 沉淀隨抗原量的加入而增多 上清液中仍然有游離的抗體平衡區(qū) 產(chǎn)生最大量的沉淀 沒(méi)有游離的抗原和抗體抗原過(guò)剩區(qū) 由于抗原量過(guò)多，造成小的免疫復(fù)合 物出現(xiàn), 上清液中有游離的抗原實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS各組份的作用緩沖體系緩沖體系: : 提供最適合反應(yīng)條件,提高反應(yīng)靈敏度。避免非特異

15、性反應(yīng)?？s短反應(yīng)時(shí)間。主要反應(yīng)物主要反應(yīng)物: : 完成抗原抗體反應(yīng)所需的成份。校準(zhǔn)校準(zhǔn): : 建立測(cè)定吸光度和物質(zhì)含量之間的計(jì)算關(guān)系。質(zhì)控質(zhì)控: : 驗(yàn)證校準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTSEdited by E. Dalla Dea ESTSEdited by E. Dalla Dea ESTS IMMAGE Immunochemistry SystemEdited by E. Dalla Dea ESTS IMMAGE IMMAGE 雙光徑速雙光徑速率濁度分析系統(tǒng)率濁度分析系統(tǒng)高效蛋白分析儀高效蛋白分析儀隨機(jī)隨機(jī)TDMTDM分析儀分析

16、儀兩種技術(shù)兩種技術(shù)( (透射法透射法+ +散射法散射法) )，四種方法，四種方法速率散射比濁法速率散射比濁法 ( ( 蛋白檢測(cè)蛋白檢測(cè)) )速率抑制散射比濁法速率抑制散射比濁法 ( ( TDM)TDM)近紅外顆粒速率法免疫分析近紅外顆粒速率法免疫分析( (Rate NIPIA)Rate NIPIA)速率抑制速率抑制NIPIA ( NIPIA ( 低分子量低分子量TDM)TDM) Edited by E. Dalla Dea ESTSIMMAGEIMMAGE檢測(cè)原理檢測(cè)原理- 速率散射法速率散射法(670(670nmnm)ARRAYARRAY的優(yōu)秀傳統(tǒng)：的優(yōu)秀傳統(tǒng)： 20 20年實(shí)踐證明卓越的精

17、確度和準(zhǔn)確度年實(shí)踐證明卓越的精確度和準(zhǔn)確度激光光源激光光源Edited by E. Dalla Dea ESTS近紅外顆粒透射免疫分析法：近紅外顆粒透射免疫分析法： 速率透射法速率透射法(940(940nm)nm)增加高敏分析檢測(cè)菜單： 地高辛，H-CRP，鐵蛋白排除高膽紅素和溶血性樣本的非特異性干擾LED光源光源Edited by E. Dalla Dea ESTS12Conjugate-antibody complexing213Inhibition of complexing by hapten (drug)1. Conjugate (hapten on carrier)2. Antib

18、ody3. Hapten (drug)速率散射抑制法速率散射抑制法(670(670nm)nm) TDM TDM檢測(cè)檢測(cè)Edited by E. Dalla Dea ESTSOn board cooling system試劑冷藏系統(tǒng)試劑冷藏系統(tǒng)-增加試劑穩(wěn)定性增加試劑穩(wěn)定性四個(gè)緩沖液位四個(gè)緩沖液位-完成完成1400個(gè)測(cè)試個(gè)測(cè)試樣品針試劑針?lè)蛛x樣品針試劑針?lè)蛛x- 同時(shí)完成取樣和加試劑同時(shí)完成取樣和加試劑 提高檢測(cè)速度提高檢測(cè)速度 全面的液面探測(cè)系統(tǒng)全面的液面探測(cè)系統(tǒng) Level Sensor Fluid SensorIMMAGEEdited by E. Dalla Dea ESTS3939個(gè)半永久性反應(yīng)杯個(gè)半永久性反應(yīng)杯-同時(shí)檢測(cè)質(zhì)控、定標(biāo)和樣本同時(shí)檢測(cè)質(zhì)控、定標(biāo)和樣本全面的條形碼系統(tǒng)全面的條形碼系統(tǒng)( (各種通用條形碼各種通用條形碼) )7272個(gè)樣本位個(gè)樣本位( (每試劑位檢測(cè)每試劑位檢測(cè)2424種項(xiàng)目種項(xiàng)目) )真正的隨機(jī)急診真正的隨機(jī)急診功能功能(不需停機(jī)不需停機(jī))IMMAGEEdited by E. Dalla Dea ESTS-自動(dòng)校正光源自動(dòng)校正光源- - 原始試管功能原始試管功能- 靈活的系統(tǒng)界面：觸摸式，鼠標(biāo)，鍵盤靈活的系統(tǒng)界面：觸摸式，鼠標(biāo)，鍵盤- 24小時(shí)隨時(shí)