mircoRNA-155表達(dá)量、CD4+T細(xì)胞水平與幼兒濕疹的相關(guān)性分析

1、    mircorna155表達(dá)量、cd4+t細(xì)胞水平與幼兒濕疹的相關(guān)性分析    付雪梅 劉秀玲 劉懷奇摘要目的：探討外周血中mircorna-155表達(dá)量、cd4+ t細(xì)胞水平與幼兒濕疹的關(guān)系。方法：選取2016年1月-2016年12月筆者科室診治的120例濕疹患兒作為病例組，另選取同期60例健康幼兒作為對(duì)照組，對(duì)比兩組外周血中mircorna-155表達(dá)量、cd4+ t細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、血清免疫球蛋白e（ige）水平，并探討其關(guān)系。結(jié)果：病例組患兒的嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige、treg、th2及th17水平均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p&

2、lt;0.05）。慢性期、亞急性期、急性期患兒的嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige、treg、th2及th17水平呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。濕疹患兒treg、th2、th17水平與嗜酸性粒細(xì)胞、ige水平呈顯著性正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p關(guān)鍵詞mircorna-155；cd4+ t細(xì)胞；濕疹；幼兒；免疫球蛋白er758.23 文獻(xiàn)標(biāo)志碼a 1008-6455（2018）09-0122-04analysis of correlation between mircorna-155 expression， cd4+ t cell level and eczema in ch

3、ildrenfu xue-mei1，liu xiu-ling2，liu huai-qi3（1.department of dermatology，zaozhuang institute of dermatology and venereal disease prevention and control，zaozhuang 277599，shandong，china；2.department of dermatology，rizhao skin hospital，rizhao 276800，shandong，china；3.department of medicine，zaozhuang pri

4、son，zaozhuang 277599，shandong，china）abstract： objective to investigate the relationship between the expression of mircorna-155， cd4+ t cells and childhood eczema in peripheral blood. methods 120 cases of eczema treated by the author's department from january 2016 to december 2016 were selected a

5、s the case group. another 60 healthy children were selected as the control group. the levels of mircorna-155， cd4+ t cells， eosinophils， and serum immunoglobulin e （ige） levels in the peripheral blood of the two groups were compared， and the relationship was explored. results the levels of eosinophi

6、l、serum ige、treg， th2 and th17 in the case group were significantly higher than those in the control group， the differences were statistically significant（p<0.05）. the level of th1/th2 in case group was significantly lower than that in the control group（p<0.05）. the levels of eosinophils、serum

7、 ige、treg， th2 and th17 in children with chronic， subacute and acute diseases were gradually increasing（p<0.05）. in chronic phase， subacute stage and acute stage， th1/th2 tended to decrease gradually. the levels of treg， th2 and th17 in children with eczema were significantly positively correlate

8、d with eosinophils and ige levels（p<0.05）. there was a significant negative correlation between th1/th2 level and eosinophils and ige levels in children with eczema（p<0.05）. conclusion the imbalance of th1/2 cells in the peripheral blood of eczema infants was associated with the changes in chi

9、ldren's condition， and the expression of mircorna-155 was not significantly changed.key words： mircorna-155； cd4+ t cells； eczema； children； immunoglobulin e（ige）兒童濕疹的持續(xù)發(fā)展，可導(dǎo)致患兒皮膚黏膜的持續(xù)性損傷，并增加遠(yuǎn)期皮膚交界性惡性病變的發(fā)生。流行病學(xué)研究顯示，現(xiàn)階段臨床上兒童濕疹的發(fā)病率可達(dá)233344/10萬(wàn)人，特別是在合并有家族性遺傳性皮膚黏膜病變的患兒中，其發(fā)病率更高1-2。在探討影響兒童濕疹發(fā)病機(jī)制的過(guò)程中，可

10、以發(fā)現(xiàn)的是細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)因子或者免疫因素的改善，可能是促進(jìn)兒童濕疹病情進(jìn)展的核心因素。mircorna-155是非編碼rna，其可以誘導(dǎo)免疫性復(fù)合物的沉積，增加免疫功能亢進(jìn)表現(xiàn)，促進(jìn)免疫損傷的發(fā)生，進(jìn)而促進(jìn)皮膚黏膜的持續(xù)性損傷；cd4+ t細(xì)胞或者其不同細(xì)胞亞群的改變，可以通過(guò)加劇局部th1/th2免疫平衡的紊亂，促進(jìn)自然殺傷性t淋巴細(xì)胞或者下游免疫因素及細(xì)胞炎癥因子的浸潤(rùn)，加劇真皮層組織的損傷，促進(jìn)病情進(jìn)展3-5。為了進(jìn)一步揭示mircorna-155表達(dá)量、cd4+ t細(xì)胞水平與兒童濕疹的相關(guān)性，本次研究選取筆者科室診治的120例濕疹患兒作為病例組，探討了不同指標(biāo)的異常表達(dá)及其與患者病情的

11、關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。1 資料和方法1.1 一般資料：選取筆者科室2016年1月-2016年12月診治的120例濕疹患兒作為病例組，另選取同期60例健康幼兒作為對(duì)照組。病例組：男64例，女56例；月齡118個(gè)月，平均（8.3±5.6）個(gè)月；其中具有過(guò)敏家族史77例，病程19個(gè)月，平均（3.9±2.0）個(gè)月；其中急性期62例，亞急性期40例，慢性期18例。對(duì)照組：男35例，女25例；月齡118個(gè)月，平均（9.0±5.1）個(gè)月。兩組患兒的年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：幼兒濕疹的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考諸福棠實(shí)用兒科

12、學(xué)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；皮損面積<皮膚面積的30%；月齡18個(gè)月；對(duì)照組來(lái)源于筆者醫(yī)院兒?？频慕】涤變?。1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并先心病、感染性疾?。?xì)菌、病毒、真菌感染）者；1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)免疫調(diào)節(jié)劑、糖皮質(zhì)素類藥物、微生態(tài)制劑（雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊、活性乳酸菌等）者。1.3 觀察指標(biāo)：采集患者靜脈血2ml，按照10 000r/min的離心速度進(jìn)行離心分離血清，每1ml的trizol試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，加0.2ml氯仿，劇烈搖動(dòng)30s，室溫3min，12 000×g，4離心15min得到rna。加等體積異丙醇，-20，30min，棄上清，加75%乙醇1ml，振蕩，20

13、l depc水，室溫放置5min使其完全溶解。加入逆轉(zhuǎn)錄酶5l，室溫下放置20min后植入37水浴鍋中孵育30min，在底物中加入上游引物0.5m、下游引物0.5m，rt-pcr反應(yīng)混合液5l，dntp稀釋至20l，反應(yīng)條件：95 3min、95 15s、90 5s，一共40個(gè)循環(huán)，產(chǎn)物擴(kuò)增長(zhǎng)度為134bp。清晨采集空腹靜脈血，按照10 000r/min的離心速度進(jìn)行離心分離，加入5ml抗凝劑，加入淋巴細(xì)胞分離液，按照密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，armi 1640溶液洗滌3次。采用流式細(xì)胞儀雙標(biāo)法進(jìn)行cd40+淋巴細(xì)胞的檢測(cè)。相關(guān)標(biāo)記操作于5ml抗凝管中進(jìn)行，100ul全血與cd4+ fitc

14、抗體室溫反應(yīng)25min，采用紅細(xì)胞裂解液optilyse c 溶血素溶解紅細(xì)胞，pbs液體洗滌3遍，每次5min，生理鹽水重新懸浮細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。（facs calibur流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)bd公司，流式細(xì)胞抗體購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司）。1.4 病情判斷標(biāo)準(zhǔn)：濕疹患兒的病情判斷標(biāo)準(zhǔn)：急性期：幼兒皮膚紅斑、水腫基礎(chǔ)上出現(xiàn)粟粒樣大丘疹、丘皰疹、水皰、糜爛記滲出，病變中心較重且向周圍蔓延，周圍存在散在的丘疹、丘皰疹，境界不清；亞急性期：表現(xiàn)為紅腫、滲出減輕，可見(jiàn)糜爛面結(jié)痂、脫屑；慢性期：表現(xiàn)為皮損部位出現(xiàn)粗糙肥厚、苔蘚樣改變、可伴有色素改變、手足部位濕疹可伴有甲改變。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：統(tǒng)計(jì)軟件采用sps

15、s 16.0，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x?±s）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析法，組間兩兩比較采用lsd-t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用pearson線性相關(guān)分析法。p<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 兩組幼兒的mircorna-155表達(dá)量、嗜酸性粒細(xì)胞及血清ige水平比較：病例組患兒的嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；病例組mircorna-155表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。見(jiàn)表1。2.2 兩組幼兒的cd4+ t細(xì)胞水平比較：病例組患兒的treg、

16、th2、th17水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；病例組患兒的th1/th2水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；但病例組th1與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。見(jiàn)表2。2.3 不同疾病分期濕疹患兒的mircorna-155表達(dá)量、嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige水平比較：慢性期、亞急性期、急性期患兒的嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige水平呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；三組間mircorna-155表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。見(jiàn)表3。2.4 不同疾病分期濕疹患兒的cd4+ t細(xì)胞水平比較：慢

17、性期、亞急性期、急性期患兒的treg、th2、th17水平呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；慢性期、亞急性期、急性期患兒th1/th2呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。見(jiàn)表4。2.5 濕疹患兒的cd4+ t細(xì)胞、mircorna-155表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞、ige水平的關(guān)系：濕疹患兒treg、th2、th17水平與嗜酸性粒細(xì)胞、ige水平呈顯著性正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。見(jiàn)表5。3 討論兒童濕疹的發(fā)生，主要考慮與長(zhǎng)期的自身免疫性損傷或者炎癥損傷等有關(guān)，特別是在外界環(huán)境因素誘導(dǎo)或者長(zhǎng)期的基礎(chǔ)性體液免疫或者細(xì)胞免疫功能紊亂

18、的人群中，兒童濕疹的發(fā)生率或者近期不良臨床預(yù)后的發(fā)生率等均明顯惡化6-7。但一項(xiàng)匯集了178例樣本量的臨床回顧性分析研究顯示，現(xiàn)階段臨床上兒童濕疹的總體治療效果較差8，治療后的患兒的臨床病情緩解率或者免疫指標(biāo)的改善效果等，均難以到達(dá)臨床有效的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)9。而對(duì)于兒童濕疹發(fā)病過(guò)程中不同免疫機(jī)制的研究，可以為后續(xù)臨床i期或者期臨床實(shí)驗(yàn)提供參考，并為揭示疾病的發(fā)病機(jī)理提供依據(jù)。非編碼rna的異常表達(dá)不僅能夠影響到惡性腫瘤的發(fā)生，同時(shí)在自身免疫性疾病或者皮膚性疾病的病情進(jìn)展過(guò)程中同樣發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。mircorna-155能夠影響到不同的生物學(xué)炎癥因子如il-6或者il-10等的激活，炎癥因子的富

19、集或者交錯(cuò)式的組織浸潤(rùn)等方面發(fā)揮作用，促進(jìn)真皮層下的柱狀上皮細(xì)胞的凋亡，加劇正常細(xì)胞的分解，加劇新生血管的形成及排列紊亂；treg、th2、th17均是臨床上較為常見(jiàn)的cd4+ t細(xì)胞，其濃度的異常表達(dá)可以在促進(jìn)自然殺傷性t淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，加劇細(xì)胞免疫復(fù)合物的沉積，促進(jìn)真皮下血管的通透性的改善，增加了皮疹紅腫癥狀。已有的部分研究揭示了cd4+ t細(xì)胞的異常表達(dá)，認(rèn)為高表達(dá)的cd4+ t細(xì)胞促進(jìn)了濕疹的發(fā)生，但缺乏對(duì)于其在慢性期、亞急性期、急性期等不同病情患者體內(nèi)的異常表達(dá)的研究，此為本次研究的創(chuàng)新性所在。本次研究并未發(fā)現(xiàn)mircorna-155表達(dá)量在病例組及正常對(duì)照人群中的表達(dá)差異，

20、提示mircorna-155的表達(dá)并不會(huì)影響到患兒濕疹的發(fā)生，這與既往的相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)論存在一定的差別，這主要考慮可能與mircorna-155的表達(dá)不能影響到真皮層組織細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷或者基底膜細(xì)胞的完整性的修復(fù)等過(guò)程中有關(guān)。但細(xì)胞免疫相關(guān)指標(biāo)存在明顯的高表達(dá)，嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige的表達(dá)濃度明顯高于正常對(duì)照人群，提示濕疹患兒體內(nèi)仍然存在一定的過(guò)敏體質(zhì)，相關(guān)過(guò)敏原或者過(guò)敏因素介導(dǎo)的免疫因子的激活，均可以促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞、血清ige的合成或者釋放，加劇體內(nèi)遲發(fā)性或者急性的過(guò)敏應(yīng)激反應(yīng)10-11。treg、th2、th17是反應(yīng)患者cd4+ t細(xì)胞激活程度的重要指標(biāo)，本次研究中treg、th2、

21、th17等均呈現(xiàn)出了高表達(dá)，從機(jī)制上考慮不同的cd4+ t細(xì)胞亞群的高表達(dá)，可以在影響到下列幾個(gè)方面的途徑，進(jìn)而促進(jìn)濕疹患者的病情進(jìn)展12-13：treg的表達(dá)濃度的改變，影響到了調(diào)節(jié)性t細(xì)胞的濃度，加劇了細(xì)胞免疫的抗原提呈效應(yīng)，促進(jìn)了t淋巴細(xì)胞依賴的細(xì)胞毒性作用；th2、th17等的異常表達(dá)，能夠促進(jìn)下游il-2或者il-17等炎癥因子的高度富集，促進(jìn)單核細(xì)胞或者巨噬細(xì)胞等對(duì)于皮下新生血管的形成障礙、新生血管的螺旋障礙或者血管局部走形或者隆起等異常的發(fā)生。eyerich k等14研究了小樣本量的急性濕疹的臨床血清學(xué)檢驗(yàn)指標(biāo)后發(fā)現(xiàn)，th2、th17或者其分泌的細(xì)胞因子等的表達(dá)濃度可平均上升25

22、%55%，同時(shí)患者的發(fā)病越急、治療敏感性越差或者治療預(yù)后越不佳，患者體內(nèi)的th2、th17等指標(biāo)的上升幅度越高。在不同的病情中，可以發(fā)現(xiàn)慢性期、亞急性期、急性期患兒th1/th2呈現(xiàn)出了逐漸下降的趨勢(shì)，而th2、th17等的濃度逐漸上升，一方面提示了t淋巴細(xì)胞免疫因子與濕疹患者的病情關(guān)系，同時(shí)也為臨床上濕疹患者的臨床預(yù)后評(píng)估提供潛在的參考指標(biāo)15。最后，本次研究發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞、ige水平等指標(biāo)與患者的細(xì)胞免疫的關(guān)系較為密切，進(jìn)一步提示了cd4+ t細(xì)胞水平與兒童濕疹的相關(guān)性。綜上所述，濕疹小兒外周血中cd4細(xì)胞亞群失衡與濕疹有密切的相關(guān)性，mircorna-155表達(dá)變化不明顯。后續(xù)臨床研究

23、應(yīng)該增加對(duì)于t淋巴細(xì)胞在不同治療預(yù)后轉(zhuǎn)歸患兒中的臨床隨訪價(jià)值分析。參考文獻(xiàn)1quaranta m，knapp b，garzorz n，et al.intraindividual genome expression analysis reveals a specific molecular signature of psoriasis and eczemaj.sci transl med，2014，6（244）：244-290.2徐文博，沈立飛.th細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平與老年濕疹患者臨床特征的相關(guān)分析j.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2016，30（12）：1230-1232.3姚思敏，郭成成.嬰兒濕疹發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展j.生物技術(shù)世界，2014，8（4）：64-65.4胥興文，楊和榮，萬(wàn)焰，等.嬰幼兒濕疹特異性igg抗體檢測(cè)的臨床意義j.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（15）：2175-2177.5曹春育，帥茂圣，陳麗華，等.濕疹患者外周血淋巴細(xì)胞亞群分析及與c反應(yīng)蛋白、血沉相關(guān)性研究j.皮膚病與性病，2018，40（1）：63-65.6west ce，ryd np，lundin d，et al.g