病原生物實(shí)驗(yàn)課：實(shí)驗(yàn)十四、沉淀反應(yīng)（免疫實(shí)驗(yàn)2）

1、 免疫實(shí)驗(yàn)二免疫實(shí)驗(yàn)二 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.雙項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雙項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)每人做每人做2.對(duì)流免疫電泳對(duì)流免疫電泳每組做每組做3.單項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散單項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散示教示教4.火箭電泳火箭電泳示教示教5.免疫電泳免疫電泳示教示教 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)一、雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)一、雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)1.原理原理抗原抗體均勻擴(kuò)散，在比例適當(dāng)抗原抗體均勻擴(kuò)散，在比例適當(dāng)?shù)那闆r下形成沉淀物。的情況下形成沉淀物。 雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)為定性試驗(yàn)。雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)為定性試驗(yàn)。2.方法方法 （1）瓊脂板的制備）瓊脂板的制備1%鹽水瓊脂鹽水瓊脂3.5ml （2）打孔）打孔132 （3）加樣）加樣 1、抗甲胎蛋白診斷血

2、清（、抗甲胎蛋白診斷血清（Ab） 2、甲胎蛋白陽(yáng)性血清（陽(yáng)性對(duì)照）、甲胎蛋白陽(yáng)性血清（陽(yáng)性對(duì)照） 3、待檢患者血清、待檢患者血清（4）擴(kuò)散）擴(kuò)散置濕盒置濕盒37、24小時(shí)觀察結(jié)果。小時(shí)觀察結(jié)果。二、對(duì)流免疫電泳二、對(duì)流免疫電泳1.原理原理對(duì)流免疫電泳是利用電場(chǎng)的作用加強(qiáng)和加快對(duì)流免疫電泳是利用電場(chǎng)的作用加強(qiáng)和加快雙向擴(kuò)散的一種方法。雙向擴(kuò)散的一種方法。時(shí)間大為縮短（一般只需時(shí)間大為縮短（一般只需30分鐘到分鐘到1小時(shí)），且靈敏小時(shí)），且靈敏度比雙擴(kuò)高約數(shù)十倍。度比雙擴(kuò)高約數(shù)十倍。2.方法方法（1）制板（2）打孔1243 （3）加樣）加樣 1. 2.甲胎蛋白診斷血清甲胎蛋白診斷血清 3.甲胎蛋白

3、陽(yáng)性血清甲胎蛋白陽(yáng)性血清 4.待檢血清待檢血清. （4）電泳）電泳+三、單項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)三、單項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)1.原理原理將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中，將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中，使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，與相應(yīng)抗使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，與相應(yīng)抗體結(jié)合形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原濃體結(jié)合形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原濃度呈正相關(guān)。度呈正相關(guān)。（沉淀環(huán)直徑（沉淀環(huán)直徑) )2 2抗原濃度抗原濃度1.1.抗體混于凝膠中抗體混于凝膠中2.2.抗原加入孔內(nèi)抗原加入孔內(nèi)3.3.抗原自由擴(kuò)散抗原自由擴(kuò)散標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測(cè)定不同病人抗原濃度測(cè)定不同病人抗原濃度測(cè)定1.1.測(cè)定沉淀環(huán)直徑測(cè)

4、定沉淀環(huán)直徑2.2.在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找 相應(yīng)抗原濃度相應(yīng)抗原濃度四、火箭電泳四、火箭電泳: 把抗原放在含有抗體的凝膠內(nèi)電泳，其沉淀形把抗原放在含有抗體的凝膠內(nèi)電泳，其沉淀形似火箭。似火箭。原理原理待測(cè)待測(cè)Ag在含適量在含適量Ab的瓊脂板中泳動(dòng)時(shí)，的瓊脂板中泳動(dòng)時(shí)，Ag與與Ab達(dá)到適當(dāng)比例形成大的不溶性達(dá)到適當(dāng)比例形成大的不溶性IC而不再而不再移動(dòng)，未與移動(dòng)，未與Ab結(jié)合的結(jié)合的Ag可繼續(xù)向前泳動(dòng)，并形可繼續(xù)向前泳動(dòng)，并形成新的沉淀，隨著成新的沉淀，隨著Ag的減少，沉淀帶越來(lái)越窄，的減少，沉淀帶越來(lái)越窄，形似火箭峰狀。形似火箭峰狀。1.1.抗體混于凝膠中抗體混于凝膠中2.2.抗原加

5、入孔內(nèi)抗原加入孔內(nèi)3.3.抗原定向向正抗原定向向正 極泳動(dòng)極泳動(dòng)4.4.形成沉淀峰形成沉淀峰68mm5mm沉淀峰高沉淀峰高抗原濃度對(duì)數(shù)抗原濃度對(duì)數(shù)1.1.測(cè)定沉淀峰高度測(cè)定沉淀峰高度2.2.在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找 相應(yīng)抗原濃度相應(yīng)抗原濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線染色標(biāo)本結(jié)果染色標(biāo)本結(jié)果五、免疫電泳五、免疫電泳1.原理原理區(qū)帶電泳和雙擴(kuò)結(jié)合區(qū)帶電泳和雙擴(kuò)結(jié)合。此法主要用于血清蛋白組份分析，此法主要用于血清蛋白組份分析，如對(duì)多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病等病人如對(duì)多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病等病人血清蛋白的組份分析。血清蛋白的組份分析。1 1、2 2孔分別加孔分別加AgAg，I=3I=34mA/cm4mA/cm，電電泳泳2h2h，分離，分離Ag