雙黃連口服液的制備成分檢測(cè)

1、雙黃連口服液拼音名：Shuanghuanglian Koufuye 書頁(yè)號(hào)：X9-4標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：WS3-131（Z-43）-95（2）批準(zhǔn)文號(hào)：（91）衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-83-2號(hào) （91）衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-83-3號(hào) 本品為金銀花、黃苓、連翹等藥味經(jīng)加工制成的口服液。【性狀】本品為棕紅色澄活液體；味甜、微苦?！捐b別】取本品1ml，加水5ml,搖勻，作為供試品溶液。另取連翹對(duì)照藥材0.5g加75%乙醇10ml，振搖提取1小時(shí)，濾過，濾液作為對(duì)照藥材溶液。再取黃 苓菰、綠原酸對(duì)照品，分別加 75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品 溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典1990年版一部附錄57頁(yè)）試驗(yàn)，吸取

2、上述四種溶 液各12心分別點(diǎn)丁同一聚酰胺薄膜（5 >7cm）上，以醋酸為展開劑，展開，取出， 晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與黃苓菰、綠原酸對(duì)照品 及連翹對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。【檢查】相對(duì)密度 應(yīng)不低丁 1.12（中國(guó)藥典1990年版一部附錄34頁(yè)）pH值，應(yīng)為5.07.0（中國(guó)藥典1990年版一部附錄40頁(yè)）。其他 應(yīng)符合合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（中國(guó)藥典1990年版附錄15頁(yè)）?！竞繙y(cè)定】精密量取本品1ml,置25ml量瓶中，加甲醇適量，置熱水中充分振搖,放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置，取上活液作為供試品溶液。另取黃苓菰對(duì)照

3、品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典1990年版一部附錄57頁(yè)）試驗(yàn)。吸取上述兩種溶液各1J 分別點(diǎn)丁同一聚酰胺薄膜（14 X7cm）上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾T。照色 譜法（中國(guó)藥典1990年版一部附錄55頁(yè)薄層掃描法）進(jìn)行掃描,波長(zhǎng)：入X275nm, 入&= 400nm,測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。本品含黃苓以黃苓菰（C12H18O11）計(jì)，不得少丁 0.8%?！竟δ芘c主治】辛涼解表，活熱解蠹。用丁外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽癰。【用法與用量】口服，一次20ml, 一日3次，小兒酌減或遵醫(yī)囑?！疽?guī)格】每

4、支10ml【貯藏】密封，避光，置陰涼處。【使用期限】二年也度更也回囹一種用丁生產(chǎn)濃縮型雙黃連口服液制劑的制備方法，制劑中主要含有金銀 花、黃苓、連翹三種藥材。制備時(shí)，主要采用的是現(xiàn)代分離、精制技術(shù)，采用酸 沉、醇沉、利用不同pH調(diào)節(jié)、萃取、高速離心等方法，且對(duì)藥料的深度加工， 使藥料的有效成分能夠得到充分利用，藥物濃度增大、有效成分含量提高；縮短 生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本。因?yàn)橛行С煞趾刻岣摺挝惑w積內(nèi)有效濃度增加， 其口服用量相應(yīng)減少，使服用、攜帶更方便。1、一種用丁生產(chǎn)濃縮型雙黃連口服液的制備方法，其特征在丁：它依次包 括以下工藝步驟：（a）將黃苓切片后加入8-10倍量水煎煮1.5-2.5

5、小時(shí)，濾過， 藥渣再加5-6倍量水煎煮二次，各0.5-1小時(shí)，濾過，合并三次濾液，濾液濃縮 并在80C時(shí)加入鹽酸溶液適量調(diào)節(jié) PH值至3以下，保溫1小時(shí)，放置過夜，將 下部沉淀加68倍量水?dāng)噭颍?0%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6-8,再加等 量乙醇，攪拌使溶解，濾過，濾液用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-3,在60C保溫30分鐘后放置過夜，濾過，沉淀用乙醇洗至 PH值6-8,揮盡乙醇得黃苓粗提取物； 再用4-6倍量水混懸，調(diào)節(jié)PH值至6-8,攪拌至溶解，并加入黃苓粗提取物量 2-5%活性炭，攪拌，在80 C以上保溫30-40分鐘，過濾，濾液加入稀鹽酸，PH 值調(diào)至6-8,在攪拌下加入等量95%乙醇，抽濾

6、，用鹽酸調(diào)至2-4, 60C保溫30-40 分鐘，放置過夜，經(jīng)抽十得到精制黃苓苜提取物。（b）金銀花、連翹加入10-14倍量水溫浸半小時(shí)后，加熱至沸騰，微沸保持1-2小時(shí)，過濾得濾液，藥渣再加 6-8倍量水微沸保持1-1.5小時(shí)，得濾液，棄去藥渣；合并兩次濾液，蒸發(fā)濃縮 至相對(duì)密度為1.201.25（在7080C條件下測(cè)），放冷，在攪拌下緩緩加入乙醇， 使含醇量達(dá)65-75%，置冷藏室內(nèi)靜置24-48小時(shí)，濾取上活液，殘?jiān)右掖歼m 量，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過，合并乙醇液，回收乙醇至無(wú)醇味后放出，得金 銀花、連翹粗提取物；再用一定量的正丁醇分3-4次進(jìn)行萃取，收集正丁醇萃取 液，減壓回收正丁醇

7、，得精制金銀花、連翹提取物。（c）按配方量將精制黃苓苜提取物、金銀花、連翹提取物混合，并加水適量，攪拌至均勻，以40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7-8,攪勻，放置冷藏罐內(nèi)，在48C條件下冷藏72小時(shí)， 之后通過高速離心方式除雜，離心液加入溶解過濾后的蔗糖適量，攪拌，再加入香精適量并調(diào)節(jié)PH值至6.5-7.5,加水制成總量，灌裝，滅菌，即得。【摘要】 目的 采用HPLC法測(cè)定雙黃連口服液中黃苓苜的含量。方法 采用 十八烷基鍵合硅膠為固定相；甲醇：水：冰乙酸 （60 : 50 ： 1）為流動(dòng)相；流速 1.0ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)274nm。結(jié)果 黃苓苜在25220 g范圍內(nèi)呈良好線性 （r=0.9

8、995）;平均回收率100.59%, RSD為1.02%（n=9）。結(jié)論 本法快速準(zhǔn)確， 雜質(zhì)分離完好，重現(xiàn)性好，可用于該制劑中黃苓苜的含量測(cè)定。【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法；黃苓苜；雙黃連口服液雙黃連口服液處方中含金銀花、黃苓和連翹，具有辛涼解表、活熱解蠹之功 效，用于治療外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽癰之癥狀。中國(guó)藥典1采用HPLC 法測(cè)定雙黃連口服液中黃苓苜含量作為控制制劑質(zhì)量的指標(biāo)，結(jié)果樣品黃苓苜峰與雜質(zhì)峰無(wú)法完全分離（圖1）。本文通過改變流動(dòng)相比例測(cè)定，結(jié)果分離效果好， 快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于本制劑的質(zhì)量控制。1儀器與試藥1.1儀器 美國(guó)SSI W型液相泵,M525紫外檢測(cè)器,Ana

9、star色譜工作站； 賽多利斯BP-211 D電子天平。1.2試藥 黃苓苜對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)200512）;雙黃連口 服液（哈高科白天鵝藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)05117-1; 7工蘇吳中實(shí)業(yè)股份有限公司蘇州長(zhǎng)征制藥廠，批號(hào)050114;中國(guó)黑龍7工完達(dá)山制藥，批號(hào) 050301）;甲醇 （色譜純）、冰乙酸（AR）,重蒸水。圖1藥典流動(dòng)相樣品的HPLC色譜圖2色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱（5 鞏250m亦4.6mm）;流動(dòng)相：甲醇：水：冰乙醇 （60: 50: 1）;流速 1.0ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng) 274nm,柱溫 40C。3試驗(yàn)方法和結(jié)果3.1對(duì)照品液的制

10、備 精密稱取黃苓苜對(duì)照品20.60mg,置200ml量瓶中，加 50%甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得。3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線精密吸取上述對(duì)照品溶液 0.25ml, 0.50ml, 0.75ml, 1.00ml, 1.25ml, 1.50ml, 1.75ml, 2.00ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。進(jìn)樣 20引記錄色譜圖（圖2）。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（從g）橫坐標(biāo)繪制回歸方程： Y=6535.7X+9508（r=0.9995），結(jié)果黃苓苜在25220 疝圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。圖2改進(jìn)流動(dòng)相后對(duì)照品的HPLC色譜圖3.3精密度試驗(yàn) 分別精密進(jìn)對(duì)照品溶液

11、20婦1重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條 件記錄峰面積，結(jié)果RSD%=0.89%。3.4樣品分離度 按樣品測(cè)定法制備供試液進(jìn)樣 20婦1記錄色譜圖（圖3）,結(jié) 果峰與相鄰雜質(zhì)峰分離完全，分離度 > 2.53.5重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品（05117-1）,按樣品測(cè)定法制備供試液，在上述 色譜條件下進(jìn)行5次平行測(cè)定，結(jié)果RSD=1.56%,表明本法測(cè)定的重現(xiàn)性好。3.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)05117-1的供試品溶液，分別在制備后 0, 2, 4, 8, 12h測(cè)定，結(jié)果黃苓苜的峰面積 RSD=1.82%,表明溶液基本穩(wěn)定。3.7陰性十?dāng)_實(shí)驗(yàn)取陰性對(duì)照樣品（按中國(guó)藥典2000版一部缺黃苓苜制 劑），精

12、密進(jìn)陰性對(duì)照品溶液20J按上述色譜條件記錄色譜圖（圖3）。結(jié)果黃苓 苜對(duì)照品相應(yīng)無(wú)十?dāng)_峰出現(xiàn)，說明處方中其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)十?dāng)_。圖3改進(jìn)流動(dòng)相后陰性對(duì)照的HPLC色譜圖3.8回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法。精密量取已知含量的樣品 1ml,置50ml 量瓶中，分別精密加入濃度為10.30mg/ml;黃苓苜對(duì)照品溶液1ml, 2ml, 3ml, 加50%甲醇稀釋至刻度。進(jìn)樣20測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表 1。表 1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果3.9樣品測(cè)定 精密量取各樣品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超 聲處理20min,放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用45m液膜過濾， 濾液即

13、為供試品溶液，在上述色譜條件下，進(jìn)樣 20 nJ記錄峰面積（圖4）,計(jì)算 黃苓苜含量，結(jié)果見表2。圖4改進(jìn)流動(dòng)相后樣品的HPLC色譜圖表2雙黃連口服液含量測(cè)定結(jié)果4討論本法測(cè)定雙黃連口服液的黃苓苜的含量，操作簡(jiǎn)單易行，以甲醇：水：冰乙 酸（60: 50: 1）為流動(dòng)相，樣品中黃苓苜與雜質(zhì)峰完全分離，出峰時(shí)間短，峰形 穩(wěn)定，進(jìn)樣量在20220g范圍內(nèi)呈良好線性，回收率高且穩(wěn)定，可以選定上述 色譜條件的流動(dòng)相，作為該制劑黃苓苜的含量測(cè)定。【參考文獻(xiàn)】1國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000, 418-419.2周玉新.中藥指紋圖譜研究技術(shù).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002, 8.【

14、關(guān)鍵詞】HPLC【摘要】目的 建立測(cè)定雙黃連口服液和敗蠹顆粒劑中綠原酸含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，在十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱上，以乙 臘:0.1%磷酸（13:87）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm。結(jié)果 綠原酸含量在（17.84 89.20） g/m范圍與色譜峰面積線性關(guān)系良好 （r=0.9999）。雙黃連樣品加樣回收 率為99.1%104.3% （RSD=2.02%, n=5）;敗蠹顆粒樣品加樣回收率為 100.2% 103.7% （RSD=1.72%, n=5）。結(jié)論 測(cè)定雙黃連口服液、敗蠹顆粒中綠原酸含 量,方法簡(jiǎn)便、快速、精密度及回收率均較好，可用于雙黃連口服液、敗蠹顆

15、粒 中綠原酸的含量測(cè)定和產(chǎn)品質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】 綠原酸HPLC法 雙黃連口服液 敗蠹顆粒 含量測(cè)定綠原酸（Chlorogenic acid）為多種中草藥的有效成分，具有抗菌消炎、抗氧 化、抗細(xì)胞衰老，對(duì)消化道的癌癥有明顯抑制作用和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用 1。還具有增色和護(hù)色作用，可用于食品、果品保鮮等2。雙黃連口服液為中藥黃苓、金銀花和連翹的提取物3, 4,其中除黃苓苜外，綠原酸也是主要成分之一，在中國(guó)藥典、中國(guó)獸藥典中盡管未提及含量要求，但 其重要性并不業(yè)于黃苓苜，也可作為產(chǎn)品質(zhì)量控制的另一指標(biāo)之一；福建金谷科技開發(fā)有限公司生產(chǎn)的敗蠹顆粒，主成分也是綠原酸。為此，建立這2種產(chǎn)品中綠原酸有效

16、的監(jiān)測(cè)方法，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的控制具有重要指導(dǎo)意義。HPLC法測(cè)定綠原酸含量已有不少報(bào)道58,但由于不同的中藥制劑，成分差異很大，測(cè)定條件也變化較大。筆者在前人工作的基礎(chǔ)上，對(duì)HPLC法測(cè)定復(fù)方中成藥中綠 原酸含量進(jìn)行了進(jìn)一步探索，并用于測(cè)定雙黃連口服液、敗蠹顆粒產(chǎn)品中綠原酸 的含量，效果良好，可作為雙黃連口服液、敗蠹顆粒產(chǎn)品質(zhì)量控制的檢測(cè)方法。1儀器與試劑1.1儀器 Water高效液相色譜儀；Water1525二元泵;Water2487紫外檢測(cè)器；色 譜柱:Symmertry +八烷基鍵合硅膠柱（Water公司）;BS201 S電子天平（北京塞 多利斯天平有限公司）；ShloA快速水分測(cè)定儀（上海

17、第二天平儀器廠）；數(shù)控超 聲波活洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。1.2試劑 乙醇、甲醇、磷酸等均為分析純?cè)噭?，乙臘為色譜純；綠原酸對(duì)照品 （中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；水為雙蒸水；雙黃連口服液、敗蠹顆粒（福建 金谷科技開發(fā)有限公司提供）。2方法與結(jié)果2.1色譜條件 色譜柱:SymmetryC 18 4.6 75mm （Waters公司）；流動(dòng)相：乙 臘:0.1%磷酸=13:87;檢測(cè)波長(zhǎng)328nm;流速1ml/min;柱溫25C ;理論塔板數(shù)不低于 2300,進(jìn)樣量5庭2.2對(duì)照品溶液的配制 精密稱取綠原酸對(duì)照品4.46mg,用甲醇溶解并定溶于 25ml容量瓶中，配成178.4從g/nft對(duì)

18、照品儲(chǔ)備液。2.3樣品溶液的制備2.3.1雙黃連口服液樣品溶液 精密量取雙黃連口服液2.0ml,置100ml錐形瓶 中，加乙醇50ml, 50C下超聲提取30min,濾過，濾液置100ml容量瓶中定容， 得樣品溶液1。2.3.2敗蠹顆粒樣品溶液 稱取敗蠹顆粒樣品2.00g,加入50ml甲醇，50C下 超聲提取30min,濾過，將濾液用甲醇定容至100ml，得樣品溶液2。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密移取1, 2, 3, 4, 5ml對(duì)照品儲(chǔ)備液，用甲醇定 容至 10ml，配成 17.84、35.68、53.52、71.36、89.20 g/m的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸 取5注入液相色譜儀，在上述色譜條件

19、下測(cè)定，以綠原酸峰面積（ Y）對(duì)相應(yīng) 的濃度（X）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:Y=1.63 X0 4 X-2.24 X0 4?；貧w系數(shù) R=0.9999 （n=5）,線性范圍 17.8489.20 g/ml2.5進(jìn)樣精密度試驗(yàn) 精密量取5 l35.68從g/ft時(shí)照品溶液進(jìn)樣，連續(xù)5次， 記錄峰面積，如 556932、550781、560829、554352、558907,平均值為 556360, RSD為0.7%,可見進(jìn)樣精密度良好。2.6樣品測(cè)定2.6.1樣品色譜圖精密量取對(duì)照品溶液、樣品溶液1、樣品溶液2各5 進(jìn)樣, 記錄色譜圖，如圖1所示，樣品中綠原酸色譜峰能與樣品內(nèi)源性物質(zhì)很好分離，

20、保留時(shí)間為2.3min。圖1對(duì)照品、樣品色譜圖 A-對(duì)照品;B-樣品溶液1;C-樣品溶液22.6.2樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.3.傾下的樣品溶液5用2.5h進(jìn)樣1 次。共測(cè) 6 次，峰面積分別為 856943、854349、857684 850927、856366、850813, 平均峰面積為854514, RSD為0.66;依同樣的方法，測(cè)定” 2.3.2TT的樣品溶液，RSD為1.12,表明兩樣品在15h內(nèi)均穩(wěn)定。2.6.3雙黃連口服液中綠原酸含量測(cè)定取雙黃連口服液產(chǎn)品5份，按“2.3.1項(xiàng)下的方法處理得樣品溶液，各精密量取5進(jìn)樣，在上述色譜條件測(cè)定，按峰面積計(jì)算樣品溶液中綠原酸的

21、含量，產(chǎn)品中綠原酸含量( mg/ml)分別為2.40、 2.43、2.44、2.43、2.40,平均值為 2.42, RSD 為 0.80%。2.6.4敗蠹顆粒中綠原酸含量測(cè)定 取敗蠹顆粒液產(chǎn)品5份，按“2.3.K的 方法處理得樣品溶液，各精密量取 5進(jìn)樣，在上述色譜條件測(cè)定，按峰面積計(jì) 算樣品溶液中綠原酸的含量，產(chǎn)品中綠原酸含量( mg/ml)分別為0.12、0.13、 0.13、0.13、0.12,平均值為 0.12, RSD 為 1.60%。2.7加樣回收率試驗(yàn)2.7.1雙黃連口服液回收率試驗(yàn) 量取雙黃連樣品溶液2.0ml于100ml容量瓶 中，加入適量對(duì)照品溶液，混勻，按樣品溶液的制備

22、方法處理，按上述色譜條件 測(cè)定樣品中綠原酸的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表1雙黃連口服液中綠原酸回收率，RSD=2.02%, n=5 (略)2.7.2敗蠹顆?；厥章试囼?yàn) 稱取敗蠹顆粒樣品2.00g,加入適量對(duì)照品溶液， 混勻，按樣品溶液的的制備方法處理，按上述色譜條件測(cè)定樣品中綠原酸的含量， 計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。表2敗蠹顆粒中綠原酸回收率，RSD=1.72, n=5 (略)3討論按中國(guó)藥典中HPLC法測(cè)定綠原酸，其流動(dòng)相為0.4%磷酸，流速為0.8ml/min 3,我們根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室 Water高效液相色譜儀的特性改為 0.1%磷酸，流速為 1ml/min后保留時(shí)間縮短且峰形和分離效果更好

23、(如圖1)。實(shí)驗(yàn)還表明，用HPLC法測(cè)定雙黃連口服液、敗蠹顆粒中主要成分綠原酸的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可 靠，可對(duì)福建金谷科技開發(fā)有限公司生產(chǎn)的雙黃連口服液、敗蠹顆粒產(chǎn)品中綠原酸含量測(cè)定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。中國(guó)藥典和中國(guó)獸藥典中雙黃連口服液質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)是以黃苓苜含量來(lái)控制產(chǎn)品質(zhì)量的，沒有把綠原酸含量要求列入標(biāo)準(zhǔn)，但綠原酸也是其主要成分之一，直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量。所以，雙黃連口服液產(chǎn)品中 綠原酸含量測(cè)定的建立，對(duì)全面控制雙黃連口服液產(chǎn)品質(zhì)量具有重要意義。參考文獻(xiàn)1王天制，李永梅.金銀花的研究進(jìn)展.華西藥學(xué)雜志，2000, 15 (4) :292-298.2閻巧鵑，韓魯佳，7工正強(qiáng).金銀花中綠原酸提取純化

24、工藝的優(yōu)化.中國(guó)農(nóng)業(yè)大 學(xué)學(xué)報(bào)，2002, 7 (20) :22-26.3中國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)，北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000,418-419;117 【摘要】：目的 建立同時(shí)測(cè)定雙黃連口服液中綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素含量的高效液相色譜法。方法采用VP-ODS C18色譜柱(250 m林4.6mm,5 11 m)流動(dòng)相：乙臘-0.2%磷酸溶液梯度洗脫；流速：1.0 mL/min ；檢測(cè)波 長(zhǎng)：278 nm。結(jié)果 綠原酸在0.446.60 藹圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r = 0.999 1),平均 回收率為97.0%;黃苓苜在0.526.18范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r = 0.999 1

25、),平均回收率為98.98%;連翹苜在0.202.04 藹圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r = 0.999 3),平均 回收率為103.55%;漢黃苓素在0.131.76范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r= 0.999 1),平均回收率為96.49%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便可行、準(zhǔn)確、快速，可用于雙黃連口服液 中上述4種成分的含量測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】雙黃連口服液綠原酸黃苓苜連翹苜漢黃苓素高效液相色 譜法含量測(cè)定雙黃連口服液由金銀花、黃苓及連翹經(jīng)提取精制而成，具有辛涼解表、活熱解蠹功效，對(duì)于上呼吸道感染、扁桃體炎、咽炎、病蠹性肺炎等細(xì)菌和病蠹感染 性疾病有一定療效。其中綠原酸、黃苓苜、連翹苜、漢黃苓素是其主要活性成分。 2005

26、年版中華人民共和國(guó)藥典（一部）采用高效液相色譜法只測(cè)定了綠原酸、 黃苓苜、連翹苜的含量1,而且是采用包括甲醇-醋酸-水、乙臘-醋酸-水的不同流 動(dòng)相分別測(cè)定。本試驗(yàn)參照文獻(xiàn)2，通過優(yōu)化色譜條件，建立了不經(jīng)提取分離，利用 梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定上述4種成分含量的高效液相色譜法，具有簡(jiǎn)便可行、準(zhǔn)確、 快速的特點(diǎn)，減少了配制流動(dòng)相的步驟和進(jìn)樣次數(shù)，提高了工作效率，取得了滿意效果。儀器與試藥島津LC-10ATvp高效液相色譜儀；SPD-10Avp紫外可見檢測(cè)器；CLSS-VP 色譜工作站；CTO-10ASvp柱溫箱；7725i手動(dòng)進(jìn)樣器。綠原酸對(duì)照品（批號(hào)110753-200212）、黃苓苜對(duì)照品 （批號(hào)

27、110715-200514）、連翹苜對(duì)照品 （批號(hào) 110821-200609、漢黃苓素對(duì)照品（批號(hào)110514-200403/勻由中國(guó)藥品生物制品檢 定所提供。雙黃連口服液由中國(guó)人民解放軍 252醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)20070115 20070121、20070212。甲醇、乙臘均為色譜純，磷酸為分析純，水為三蒸水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：島津 VP-ODS C18柱（250 m亦4.6 mm，5 m）流動(dòng)相：乙臘 （A）-0.2%磷酸溶液（B）（A + B = 100%）作梯度洗脫，t= 0t6 min，A: 27%; t= 6 10 min，A : 30%; t

28、= 10 15 min，A: 60%; t= 1525 min，A: 90%;流速：1.0 mL/min ; 檢測(cè)波長(zhǎng)：278 nm；柱溫：25 C ；進(jìn)樣量20八在上述色譜條件下，4種待測(cè) 組分與鄰近組分達(dá)到了基線分離，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于 3 000。2.2溶液的制備2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素對(duì)照品適量 ，置10 mL容量瓶 中加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別制成濃度為1.10、1.03、0.51、0.44 mg/mL的對(duì)照品母液。2.2.2供試品溶液的制備精密吸取雙黃連口服液1.0 mL，置50 mL容量瓶中加50%甲醇溶解并稀釋

29、至 刻度，搖勻，0.45微孔濾膜過濾，即得。2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例及制備工藝，分別制備缺金銀花、黃苓、連翹的陰性對(duì)照樣品，按 供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。2.3線性關(guān)系考察分別精密吸取綠原酸對(duì)照品母液0.20、0.40、0.75、1.50、3.0 mL，黃苓苜對(duì)照品母液0.25、0.50、1.0、2.0、3.0 mL，連翹苜對(duì)照品母液 0.20、0.40、0.60、 1.20、2.0 mL，漢黃苓素對(duì)照品母液 0.15、0.25、0.50、1.0、2.0 mL，對(duì)應(yīng)加入 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成5個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記 錄色譜

30、圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，分別以綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素進(jìn)樣 量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。綠原酸：Y = 1.04 X07X + 1.40 X05, r= 0.999 6;黃苓苜：Y = 3.87 106X 1.26 104，r= 0.999 9;連翹苜：Y = 6.44 105X + 1.74 X04，r= 0.999 9;漢黃苓素：Y = 6.30 X06X + 1.45 >W5，r= 0.999 9。結(jié)果表 明，綠原酸進(jìn)樣量在0.446.60 范圍內(nèi)，黃苓苜進(jìn)樣量在0.526.18 麹圍內(nèi)， 連翹苜進(jìn)樣量在0.202.04 范圍內(nèi)，漢黃苓素進(jìn)樣量在0.131.76 麹

31、圍內(nèi)， 線性關(guān)系良好。2.4精密度試驗(yàn)精密吸取綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素混合對(duì)照品溶液注入液相色 譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次,綠原酸峰面積RSD= 1.12%,黃苓苜峰面積RSD = 0.86%,連翹 苜峰面積RSD= 0.72%,漢黃苓素峰面積RSD = 0.58%。結(jié)果表明，所選方法精密度 良好。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)定 樣品中綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素的峰面積 ，結(jié)果綠原酸RSD = 1.74%, 黃苓苜RSD= 2.04%,連翹苜RSD= 1.81%,漢黃苓素RSD = 2.38%表明樣品溶液 在24 h內(nèi)穩(wěn)定

32、。2.6重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批號(hào)5份樣品，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，記錄峰面積， 結(jié)果綠原酸 RSD= 1.48%,黃苓苜 RSD = 1.53%,連翹苜 RSD= 1.34%,漢黃苓素 RSD= 1.58%,表明方法重復(fù)性良好。2.7陰性對(duì)照試驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液 ，按“2.傾下色譜條件進(jìn)樣 測(cè)定,繪制色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在供試品溶液及對(duì)照品溶液中綠原酸、黃 苓苜、連翹苜和漢黃苓素保留時(shí)間相應(yīng)位置上均無(wú)吸收峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照無(wú)十?dāng)_。2.8加樣回收率試驗(yàn)精密量取同一批號(hào)0.2 mL雙黃連口服液4份于50 mL容量瓶中，分別加入 綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃

33、苓素對(duì)照品溶液適量，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻,0.45微孔濾膜過濾。按“2.傾下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定其含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。表1綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素回收率測(cè)定結(jié) 果（略） 2.9樣品含量測(cè)定取3批樣品，按“2.2.2項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液，精密吸取對(duì)照品溶液和 供試品溶液注入液相色譜儀，按“2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠 原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素的含量，結(jié)果見表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）3討論3.1供試品溶液制備方法的選擇2005版中華人民共和國(guó)藥典（一部）高效液相色譜法測(cè)定綠原酸的含量時(shí) 對(duì)供試品溶液處理采用加水稀釋樣品的方法，測(cè)定黃

34、苓苜的含量時(shí)采用 50%甲醇 超聲處理20 min，測(cè)定連翹苜的含量時(shí)采用過中性氧化鋁柱洗脫。文獻(xiàn)報(bào)道也多 采用上述方法3-6。我們?cè)谠囼?yàn)中觀察到：50%甲醇超聲處理20 min與50%、 100%甲醇溶解、過濾所得色譜峰的峰面積結(jié)果無(wú)明顯區(qū)別，而溶解過濾操作更為簡(jiǎn)便易行，所以,選擇甲醇溶解過濾供試品。制備供試品溶液使用純甲醇和50%甲醇做溶劑所得色譜峰的峰形、峰面積均無(wú)明顯區(qū)別，從節(jié)約成本的角度出發(fā)，本試驗(yàn)最終選擇50%甲醇溶解、過濾制備供試品溶液。3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇本試驗(yàn)對(duì)綠原酸、黃苓苜、連翹苜和漢黃苓素4種對(duì)照品進(jìn)行了 200400nm紫外光譜掃描，結(jié)果表明，綠原酸在218 nm處有較強(qiáng)的吸收，在240 nm和295 nm處有次強(qiáng)吸收；黃苓苜在 278 nm處有較強(qiáng)的吸收，在315 nm處有次強(qiáng)吸收； 連翹苜在228 nm處有較強(qiáng)的吸收，在278 nm處有次強(qiáng)吸收；漢黃苓素在 278 nm 處有