康乃馨植物組織培養(yǎng)(1)

1、植物組培快繁技術(shù)康乃馨植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)小組成員：陳梅20141641044鄭莉20141641002雷雨田20141641043康乃馨植物組織培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参镫x體快速繁育原理、方法和完整過(guò)程。二、實(shí)驗(yàn)原理香石竹（學(xué)名Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨，花色艷麗，開(kāi)花時(shí)間長(zhǎng)，裝飾效果好，是世界上最暢銷的切花之一，具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵變小，花色產(chǎn)生斑點(diǎn)，退色甚至不開(kāi)花，影響切花產(chǎn)量和質(zhì)量。通過(guò)莖尖分生組織培養(yǎng)，能夠獲得“無(wú)病毒”的健康植株，對(duì)于引進(jìn)的少而新的脫毒種苗，再進(jìn)行一次莖尖培養(yǎng)，進(jìn)一步降低基礎(chǔ)苗中的病毒含量，并通過(guò)組織培養(yǎng)的方法

2、快速繁殖，在短期內(nèi)，就可以獲得大量的脫毒試管苗，使引入材料迅速在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，取得明顯的經(jīng)濟(jì)效益。三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料儀器：超凈工作臺(tái)、酒精燈、電爐、燒杯、玻璃棒、鑷子、解剖刀、接種盤(pán)、紗布、記號(hào)筆、標(biāo)簽紙?jiān)噭?5%乙醇、0.1%升汞、無(wú)菌水、MS培養(yǎng)基、IAA0.1mg/L、BA0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、瓊脂材料：康乃馨帶芽外植體材料四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）培養(yǎng)基的配方1、康乃馨的生芽培養(yǎng)基MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+瓊脂(8g/L)pH5.8-6.0,配制300ml,用培養(yǎng)瓶分裝1015瓶。另外需要制備無(wú)菌水

3、10瓶，培養(yǎng)瓶每人34瓶。紗布、碟子若干，后二者分別用報(bào)紙包好一同滅菌。2、康乃馨的繼代培養(yǎng)基MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+瓊脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制300ml,用培養(yǎng)瓶分裝10-15瓶。另外需要制備無(wú)菌水10瓶，培養(yǎng)瓶每人3-4瓶。紗布、碟子若干后二者分別用報(bào)紙包好一同滅菌。3、康乃馨的生根培養(yǎng)基MS+生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L，用培養(yǎng)瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無(wú)菌水10瓶，每人3-4培養(yǎng)瓶、紗布、碟子若干后二者分別用報(bào)紙包好一同

4、滅菌。（二）康乃馨的生芽培養(yǎng)1、無(wú)菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基、無(wú)菌水、及各種接種用具放入超凈工作臺(tái)，開(kāi)紫外燈照射消毒20-30min,開(kāi)送風(fēng)開(kāi)關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開(kāi)照明日光燈。洗手、換鞋，換實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，進(jìn)入接種室，開(kāi)啟超凈工作臺(tái)。用紗布吸取75%酒精擦手、擦拭超凈臺(tái)、擦拭培養(yǎng)基和無(wú)菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具放入滅菌鍋滅菌，待冷卻后使用。2、外植體消毒選取康乃馨葉腋間生出的側(cè)芽為外殖體，用自來(lái)水沖洗半小時(shí)，將材料上的泥土和灰塵及雜質(zhì)沖洗干凈，用解剖刀切取所需組織放入大燒杯中，用75%的酒精浸泡消毒30s，用無(wú)菌水沖洗3次，再將材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分鐘,

5、然后在超凈臺(tái)內(nèi)用無(wú)菌水沖洗6次。材料消毒完成。3、外植體的制備將消毒好的材料用無(wú)菌濾紙吸去多余的水份,然后在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上的接種盤(pán)內(nèi)，借助解剖刀剝離莖尖，剝?nèi)∏o尖大小通常在0.3mm左右。以上操作均需在酒精燈火焰旁進(jìn)行。4、外殖體接種用滅菌過(guò)的鑷子將切好的外植體接種到配置好的接種培養(yǎng)基上，每瓶接2-3塊，每人至少三瓶，可以更多一些。接種培養(yǎng)基為MS+IAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L,PH5.8,蔗糖3%,瓊脂0.75%。接種完成后蓋上瓶蓋。貼標(biāo)簽，注明材料名稱、接種日期和姓名。5、培養(yǎng)與觀察將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺(tái)?？的塑暗呐囵B(yǎng)條件為溫度25

6、±1,一晝夜光照16h,光照強(qiáng)度2000lx。經(jīng)過(guò)10天左右的培養(yǎng),大部分莖尖開(kāi)始萌動(dòng),逐漸長(zhǎng)大,20天左右即可長(zhǎng)成一小叢植株。定期觀察培養(yǎng)情況：包括觀察日期、生長(zhǎng)情況、以及污染情況等，并做好記錄。（三）康乃馨的繼代培養(yǎng)1、無(wú)菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基及各種接種用具放入超凈工作臺(tái)，開(kāi)紫外燈照射消毒20-30min,開(kāi)送風(fēng)開(kāi)關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開(kāi)照明日光燈。洗手、換鞋、換實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，進(jìn)入接種室，開(kāi)啟超凈工作臺(tái)，用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺(tái)，擦拭培養(yǎng)基和無(wú)菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈。鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具放入滅菌鍋滅菌，待冷卻后使用。2、無(wú)菌操作接種酒精燈火焰旁打開(kāi)康乃馨

7、芽苗培養(yǎng)基，用鑷子取出康乃馨芽苗，置于無(wú)菌接種盤(pán)內(nèi)，用解剖刀將芽苗簇切割成含23芽苗然后切去芽苗的上端。3、培養(yǎng)用滅菌過(guò)的鑷子將切好的外植體接種到配置好的接種培養(yǎng)基上，每瓶接2-3塊，每人至少三瓶，可以更多一些。將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒置于培養(yǎng)室進(jìn)行光照培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺(tái)。4、觀察記錄定期觀察培養(yǎng)情況：包括觀察日期、生長(zhǎng)情況、以及污染情況等，并做好記錄。（四）康乃馨芽苗的誘導(dǎo)生根1、無(wú)菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基及各種接種用具放入超凈工作臺(tái)，開(kāi)紫外燈照射消毒20-30min,開(kāi)送風(fēng)開(kāi)關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開(kāi)照明日光燈。洗手、換鞋、換實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，進(jìn)入接種室，開(kāi)啟超凈工作臺(tái)，用紗布

8、吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺(tái)，擦拭培養(yǎng)基和無(wú)菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈。鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具放入滅菌鍋滅菌，待冷卻后使用。2、無(wú)菌操作接種酒精燈火焰旁打開(kāi)康乃馨培養(yǎng)瓶，用鑷子取出康乃馨芽苗置于無(wú)菌接種盤(pán)，用解剖刀將芽苗的每個(gè)小芽分開(kāi)。用鑷子將單個(gè)小芽插入生根培養(yǎng)基，每瓶接3個(gè)。蓋上瓶蓋，貼上標(biāo)簽，注明材料名稱、接種日期和姓名。3、培養(yǎng)將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒置于培養(yǎng)室進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺(tái)。4、觀察記錄定期觀察培養(yǎng)情況：包括觀察日期、生長(zhǎng)情況、以及污染情況等，并做好記錄。（五）緩苗移栽試管苗在移栽前幾天一般都需要進(jìn)行煉苗，讓它有個(gè)逐步適應(yīng)環(huán)境的過(guò)渡階段。一般方法是先將培養(yǎng)瓶從培

9、養(yǎng)室拿到常溫下放置，然后將試管苗容器口上包扎的塞子或紙去掉放置幾天，此時(shí)需注意保持空氣濕度，并防止雜菌污染，雜菌容易很快生長(zhǎng)而污染試管苗。在去掉封口時(shí)采用培養(yǎng)基上加薄層水的處理效果較好，即可提高濕度又可減少雜菌生長(zhǎng)，但若放置時(shí)間較長(zhǎng)則需換水。待試管苗逐步適應(yīng)外界的光照、溫度和濕度后再進(jìn)行移栽，即可提高移栽成活率。(六)移栽技術(shù)移栽時(shí)，首先將試管苗從所培養(yǎng)的瓶中取出，取時(shí)要用鑷子小心地操作，切勿把根系損壞，然后把根部粘附的瓊脂漂洗掉，要求全部除去，而且動(dòng)作要輕，以減少傷根傷苗。（原因:瓊脂中含有多種營(yíng)養(yǎng)成份,若不去掉,一旦條件適宜,微生物就會(huì)很快滋生,從而影響植株的生長(zhǎng),甚至導(dǎo)致?tīng)€根死亡。）移栽前,先將基質(zhì)澆透水,并用一個(gè)筷子粗的竹簽在基質(zhì)中開(kāi)一穴,然后再將植株種植下去,最好讓根舒展開(kāi),并防止弄傷幼苗。種植時(shí),幼苗深度應(yīng)適中,不能過(guò)深或過(guò)淺,覆土后需把苗周圍基質(zhì)壓實(shí),也可只將容器搖幾下待基質(zhì)緊實(shí)即可,以防損傷試管苗的細(xì)弱根