冰凍切片和石蠟切片各自的優(yōu)劣之處

1、冰凍切片和石*6切片各自的優(yōu)劣之處是什么1、從一沆町選悴萬左柬晉。有的一沆既眈住芒塔切月文鴕版冰床為片 ' 罰有的一抗只能et冰探切月，供儺丈決干于要也瀝的抗原檜空性， 有的抗原不檢宅 ' 乞辻組織固定読水、遷明、浸絡(luò)、勺埋脫蠟手一親列的儉若錯也片的步猱，所檢測的熬原易袂衣壞，這時乂克用 冰探切月總宦，臨測這類抗原釣一抗貝論做冰凍幼片，而那建樓支的抗原眈經(jīng)受乞百劣也片的的考笠，一腴耒講也可以用冰床切片來 他，曲得來洪，對于胚可門用冰凍幼月也可以用w怙切月檢淑的抗原，用若韁5片栓箭的歩色姣果咚土冰床為片好一2、 從誤立目的耒晉。刀片對組織油胞的定位很準(zhǔn)報nr上期凍存袒織的冰探切片

2、可牝因冰晶的形欣確壞組織油胞形杰的塔構(gòu)，并進成 抗嘿的彌徽，從n宅住不準(zhǔn)確。3、從抗原的»*-±*=；zK探憂月對沆原的斤真很好，EH即刀片在組織固宅，脫水 '遷明、浸蠟、包埋、笑培等世隹申可眈會 對抗嘿8 丁 生貢査成彩響。4、從澳作步魏的彙為程度晉。親色過輕冰床切片笥單.TTTB蠟切片嚶茨脫咚入水、抗原修復(fù)諄遷煌比換篥琰5、總空 > 三卻力片對垛*的£期探存校臺適且過織細(xì)脳彩態(tài)結(jié)構(gòu)保博好；面冰床為片噫臺TT新鯊?fù)丝椀闹圃拢幙戳⒓磭?、壟色?果校好，旦龜婕熒光*可以簾TT遅電占皓自貸英光町工憂。冰凍切片(Frozen suction雇一種在低溫

3、條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然 后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中 的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳 冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時代的變遷，科技 的發(fā)展，許多年前被認(rèn)為是非常重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當(dāng)然有些 技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。編輯本段冰凍切片的應(yīng)用(1) 在手術(shù)進行中，突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷，原定手術(shù)方案不相符 合，或者懷疑時，需要病理確定。(2) 了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞，或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定 是否需要徹底掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施。(3)

4、 對于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。(4) 在做剖腹探查時所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。(5) 顯示組織中的脂肪和脂類物質(zhì)，這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤， 某些科研組織等。(6) 某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。(7) 神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如：Eger氏法，Marchi氏法，Cajal氏 法，Hortega氏法和Holzer氏法等。(8) 對某些物質(zhì)所進行的免疫熒光的研究。編輯本段冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以Shandon As 620 E型恒溫箱冷凍切片機為例，該機的箱面上有電于控制 板，裝有即時冷凍鍵和除

5、霜鍵，啟動即時冷凍鍵，機器馬上進行工作狀態(tài)，并可 持續(xù)lOminso啟動即時除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉，并可 持續(xù)ISminso有照明鍵一個，啟動該鍵可照明工作間，有利工作及觀察組織的冰 凍狀況。配有消毒鍵一個，當(dāng)進行一周的工作或者一天的工作后，啟動該鍵，可 對工作間進行消毒。當(dāng)每天工作完畢時，可啟動密鎖鍵，鎖住工作間。除此之 外，箱面的左邊有四個按鍵，兩個為快速自動進退鍵，兩個為微小進退鍵，還有 一個手動旋鈕，調(diào)節(jié)修組織塊時的進退。冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺，溫度可達6()弋左右，冷凍箱的中間為一臺切片機，工作間的溫度在0-30°C間可任意調(diào)節(jié)，并在箱面上的熒屏顯示岀來

6、。操作方法及步驟 取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難 以切完整，最好為24X24X2mmo 取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上， 冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個小臺后，再 放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。 將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗迸退鍵，轉(zhuǎn)動旋 鈕，將組織修平。 調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細(xì)胞密集的薄切， 纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切，一般在5-lOum間。 調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，尖鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操 作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｇ衅瑫r，切出的切片

7、能 在第一時間順利地通過刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時 便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。 應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根 據(jù)不同的組織而定，不能一概而論。女口 ：切未經(jīng)固定的腦組織，肝組織和淋 巴結(jié)時，冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低，frlO-15°C左右，切甲狀腺、脾、腎、 肌肉等組織時，可調(diào)在152()弋左右，切帶脂肪的組織時，應(yīng)調(diào)至25弋左右, 切含大it的脂肪時，應(yīng)調(diào)至30弋。冰凍切片時的注意事項 防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需經(jīng)常用毛筆挑除切 片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因

8、為這 個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會破 壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。 多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放于不同的支承器上，于 冷凍臺上凍起來，然后依據(jù)不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會 亂。 放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢來放置，所謂“砍柴看柴勢”， 切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。 組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達到固定前， 更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭取時間，二是固 定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片， 就會出現(xiàn)冰晶。這是因為

9、含水的固定液在組織未經(jīng)固定前，其中 的水份也可滲 入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時，這些水份就存留于組織中，形 成了冰晶。 當(dāng)切片時，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在 室溫停留片亥，再行切片，或者用中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來 軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點。 用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因為當(dāng) 附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別，當(dāng)它 們碰撞在一起時，分于彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與 載玻片初口口生上述的現(xiàn)象。,由于溫度相同,

10、沒有發(fā)精旨口冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即 可 染色。以往，為了防止切片脫落，當(dāng)切片附貼于載玻片后，即用電吹風(fēng)吹干后再 固定。根據(jù)實驗對比認(rèn)為這種做法欠妥未經(jīng)固定的切片，強熱作用后，蛋白發(fā)生 變性，核內(nèi)含有的物質(zhì)由于熱的作用融合在一起，染色后鏡下分辨 不出核內(nèi)的 各種物質(zhì)。冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，這樣可 以使切片中細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)都在沒有任何變化的情況下被固 定起來，核染色質(zhì) 清晰，核仁明顯，其他物質(zhì)都完好保存。方法： 切片固定30秒一 1分鐘。 水洗。 染蘇木素3-5分鐘。 分化。 于堿水中返藍2()秒。(6)伊

11、紅染色1020秒。 脫水，透明，中性樹膠封固。冰凍組織12分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘。總共在10 分鐘內(nèi)完成快速制片過程，結(jié)果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法，二氧化碳 冰凍切片法，半導(dǎo)體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來說 已很少使用，因此在這里不作闡述。編輯本段優(yōu)缺點（一） 優(yōu)點:1. 簡便，可以不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可迸行切 片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。2快速，用時短。3. 組織變化不大。4. 能很好保存脂肪，類脂等成分。5. 能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對于那些對有機溶 劑或熱的溫度

12、耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。（二）缺點：1. 不容易做連續(xù)切片。2. 切取的組織不能過大，組織過大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響 切片及染色效果。3. 不容易制作較薄的切片。4. 組織塊在凍結(jié)過程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原 物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。編竝段冰凍切片操作中的注意事項!=|(1) 新鮮的組織制備組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有:CO2 氣(一 78©丙酮干冰冷卻的輕石袖醛、乙烷和庚烷(一 8()。®液 氮(一 190Q 液氮冷卻的丙烷(一 19°C) o液氮適用于組織化學(xué)

13、，較安全。缺點：組 織塊易發(fā)生龜裂。(2) 固定組織的制備為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4匕、24小時的甲醛固定 能 很好地保存酶類。但對許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲 醛短時間固定(1()分鐘左右)固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡出現(xiàn)后，需要保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，以4%緩沖戊二醛(25%戊二醛 16ml； 0.1M二甲腫酸(pH7.) 84ml；蔗糖8Q固定較好。這些固定液主要 用于水 解酶5而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。恒冷箱溫度一般在冷凍后1()分鐘，到接近冷室溫度時再切，一般組織在一 15一 20°C切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度， Pearse及Bancroft的經(jīng)驗女下：組織刀溫度組織溫度恒冷箱溫度肝18105腎158 -5皮 -35-10-5©-18-5 -5固定組織一般高3-5度切片機的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過。