《獸藥中非特定非法添加物質(zhì)檢查方法》等3項標準

1、附件 1獸藥中非特定非法添加物質(zhì)檢查方法1 適用范圍本標準適用于無相應獸藥中非法添加物質(zhì)檢查方法標準時的檢驗使用， 非法添加物質(zhì)包括對人或動物具有藥理活性或毒理作用等的物質(zhì)。 本標準執(zhí)行前應進行耐用性驗證， 僅限用于已建立本檢查方法的實驗室，其他實驗室使用時應重新進行耐用性驗證。執(zhí)行本標準時，應同時進行試劑空白、樣品空白與陽性對照試驗，檢驗報告應給出檢出限。2 檢查方法2.1液相色譜 二極管陣列法照高效液相色譜法（中國獸藥典一部附錄0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗根據(jù)可疑添加物性質(zhì)，參照藥品國家標準、獸藥國家標準或者獸藥殘留檢測方法標準的條件自建。對照品溶液的制備精密稱取目標對照品適量

2、，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成每1ml中含對照品 10g至 50g的溶液。供試品溶液的制備固體制劑需研細， 稱取細粉適量 （如約相當于一頭動物一次用量）；用甲醇或者其他適宜溶劑（超聲）定量溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液定量稀釋（稀釋倍數(shù)要確保不造成儀器污染或光譜圖失真），即得；液體制劑量直接精密量取或稱取適量，稀釋，即得。對于含有高濃度的有機鹽和乳化劑等存在強烈的基質(zhì)效應輔料的產(chǎn)品，應適當增加前處理步驟。測定法分別精密吸取上述兩種溶液適量注入液相色譜儀，同時記錄色譜圖與光譜圖；通過與對照品液相色譜圖保留時間、光譜圖的比對， 確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。結(jié)果判定在供試品和對照品濃度接近的情況

3、下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±5%）；在一定的波長范圍內(nèi)，兩者光譜圖無明顯差異；最大吸收波長一致（差異不大于±2nm），判為檢出非法添加物。2.2液相色譜 高分辨質(zhì)譜法照質(zhì)譜法（中國獸藥典一部附錄0431）測定。液質(zhì)聯(lián)用條件根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用全掃描方式采集一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜信息。對照品溶液的制備精密稱取目標對照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成每1ml中含對照品 50ng至 500ng的溶液。供試品溶液的制備同 2.1。測定法分別精密吸取上述兩種溶液適量注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，記錄液相色譜圖及一級質(zhì)譜圖與二級質(zhì)譜圖；通過與對

4、照品溶液色譜圖保留時間、質(zhì)譜圖的對比， 確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。結(jié)果判定方法 1供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（保留時間相對偏差不大于2.5%）；供試品質(zhì)譜圖與對照品的應一致（包括分子離子和至少一個碎片離子，質(zhì)量數(shù)差異小于等于5ppm），判為檢出非法添加物。方法 2供試品與對照品分子離子峰的質(zhì)量數(shù)偏差不大于5ppm，且二級質(zhì)譜圖與對照品的二級質(zhì)譜圖一致，判為檢出非法添加物。2.3液相色譜 串聯(lián)質(zhì)譜法照質(zhì)譜法（中國獸藥典一部附錄0431）測定。液質(zhì)聯(lián)用條件根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用離子掃描 （ SRM）或多反應監(jiān)測 （ MRM）。定性離子對選用獸藥殘留檢測方法標

5、準中的定性離子對或者符合至少個（非禁用藥3個）識別點數(shù)的要求。對照品溶液的制備、供試品溶液的制備同2.2 。測定法分別精密吸取上述兩種溶液適量注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，記錄特征離子質(zhì)量色譜圖； 通過與對照品溶液色譜圖保留時間、離子豐度比的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。結(jié)果判定供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；供試品離子豐度比應與對照品的一致，容許偏差符合表1 的要求，判為檢出非法添加物。表相對豐度（ %） 50 20 50 10 20 10離子豐度比的允許偏差范圍允許偏差（±20±25±30±

6、50%）附件 2中獸藥固體制劑中非法添加物質(zhì)檢查方法顯微鑒別法1 適用范圍1.1本方法適用于不含動物類、礦物類藥材（如珍珠、石決明、動物角甲骨骼、石膏、玄明粉、滑石粉、硫磺、朱砂等）的中獸藥散劑中非法添加處方外化學成分的檢查。1.2本方法適用于中獸藥散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、丸劑、錠劑等中非法添加處方外其他藥味的檢查。2 檢查方法照顯微鑒別法（ 中國獸藥典 ）二部附錄2001）測定。散劑、顆粒劑與膠囊劑取適量粉末 （內(nèi)容物為顆粒狀，應研細） 直接裝片或透化裝片。片劑 取 2 3片；丸劑、錠劑（包衣者除去包衣） 取數(shù)丸或 12錠，分別置乳缽中研細，取適量粉末裝片，或透化后裝片。對于一些浸膏與粉

7、末混合投料的制劑，以上制片方法仍難以查見飲片的顯微鑒別特征，可以取樣品適量，加水適量，攪拌；或超聲處理，使其分散后離心沉淀，如此反復操作以除盡浸膏，用吸管吸取沉淀物適量裝片，或透化后裝片。共制樣片 5 片，置顯微鏡下觀察。3 記錄對有鑒別意義的特征應有詳細文字描述； 并采用顯微攝像或顯微圖像采集系統(tǒng)采集并制作顯微圖譜，或手繪顯微特征簡圖。應注意標準規(guī)定以外的異常顯微特征的記錄， 并根據(jù)藥材的基源、 成方制劑的處方和制法綜合分析。如果檢出標準以外的纖維、石細胞、分泌組織等特征，以對照藥材進行佐證。4 結(jié)果判定4.1不含動物類、 礦物類藥材的中獸藥散劑中1 片及以上檢出非處方晶片，且多見， 系檢出

8、非法添加組方外化學成分，判定為不符合規(guī)定。4.2獸藥制劑中1 片及以上檢出處方外的藥味或組織特征，且多見， 系檢出非法添加處方外其他藥味，判定為不符合規(guī)定。附件 3獸藥中非法添加硝基咪唑類藥物檢查方法1 適用范圍1.1本方法適用于鹽酸多西環(huán)素可溶性粉和硫酸新霉素可溶性粉中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢查。1.2用于其他獸藥制劑中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、 奧硝唑或異丙硝唑檢查時，需進行空白試驗和檢測限測定。2 檢查方法照高效液相色譜法（中國獸藥典一部附錄0512）測定。色 譜 條 件 與 系 統(tǒng) 適 用 性 試 驗采 用 十 八 烷 基 硅 烷

9、鍵 合 硅 膠 為 填 充 劑 （ AgilentEclipsePlus C18 4.6mm ×250mm，5m色譜柱或其他等效的色譜柱）；以甲醇為流動相A，以水為流動相B，流速為每分鐘0.8ml ，按下表進行線性梯度洗脫；柱溫25；二極管陣列檢測器檢測， 采集波長范圍為200nm400nm，分辨率為 1.2nm，記錄 320nm波長處的色譜圖。供試品溶液中羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、 地美硝唑、 奧硝唑和異丙硝唑色譜峰與相鄰色譜峰分離度應符合要求。時間B(%)(min)A(%)020805208012406020406020.1100025100025.12080302080測定法取供

10、試品1.0g ，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml，超聲處理10 分鐘， 冷卻至室溫，濾過；取續(xù)濾液 5.0ml ，置 50ml 量瓶中，用 30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。分別取羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑和異丙硝唑?qū)φ掌犯骷s25mg置 50ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度；取適量，用30%甲醇溶液定量稀釋制成每1ml 中各含約50g 的溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品各20l ，分別注入液相色譜儀， 同時記錄色譜圖和光譜圖。必要時，可調(diào)整供試品溶液或?qū)φ掌啡芤旱臐舛?，使兩者峰面積接近。通過與對照品溶液色譜圖保留時間、光譜圖的對比， 確定供試品中是

11、否含有羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。3 結(jié)果判定3.1供試品溶液色譜圖中如出現(xiàn)與相應對照品溶液色譜圖中保留時間一致的色譜峰（差異不大于± 5%），且為單一物質(zhì)峰；在規(guī)定的采集波長范圍內(nèi)，兩者紫外光譜圖匹配，且最大吸收波長一致（差異不大于±2nm），判定為檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。3.2供試品溶液色譜圖中峰保留時間與相應對照品峰相同，但峰面積小于檢測限峰面積，判定為未檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。4 檢測限本方法羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢測限為1mg/g。附圖硝基咪唑非法

12、添加物檢查AFCDelay 2020-03-02 15-31-57202003020000002.D)mAU40043006252001310001020min圖 1 對照品溶液色譜圖1.羅硝唑 2.甲硝唑 3.替硝唑 4.地美硝唑5.奧硝唑 6.異丙硝唑*DAD1, 5.458 (39.9 mAU, - )參考值 =0.005 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.DmAU80340<302085210<0220240260280300320340360380nm圖 2 羅硝唑光譜圖*DAD1, 5.945 (36.0 mAU, - )參考值 =0.005

13、 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.DmAU84013<302046102<0220240260280300320340360380nm圖 3 甲硝唑光譜圖*DAD1, 6.565 (31.5 mAU, - )參考值 =0.005 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.DmAU35613<3025201510462<50220240260280300320340360380nm圖 4 替硝唑光譜圖mAU50403020100mAU2520151050mADAD1, 7.585 (47.1 mAU, - )參考值 =0.005 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.D023<462<220240260280300320340360380nm圖 5 地美硝唑光譜圖*DAD1, 10.978 (21.9 mAU, - )參考值 =10.51