畜禽三元活性微生態(tài)制劑的研制及其應(yīng)用研究

1、湖南省財(cái)政廳支農(nóng)項(xiàng)目湘財(cái)指200439號(hào)研究成果鑒定綜合材料畜禽三元活性微生態(tài)制劑的研制及其應(yīng)用研究Study on the Bioactive Ternary-Microecologics for Animal and Poultry and its Utilization完成單位：湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院協(xié)作單位：湖南中業(yè)科技發(fā)展有限公司 二00五年九月任務(wù)來(lái)源： 湖南財(cái)政廳資助項(xiàng)目 湖南省農(nóng)科院重點(diǎn)項(xiàng)目 湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目主管部門：湖南省科技廳主持單位：湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技管理處承擔(dān)單位：湖南省農(nóng)科院植物保護(hù)研究所協(xié)作單位：湖南中業(yè)科技發(fā)展有限公司目 錄前言4摘要5第一章 國(guó)內(nèi)外微生態(tài)制

2、劑研究進(jìn)展9第一節(jié) 益生菌在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用研究11第二節(jié) 益生元在畜禽養(yǎng)殖業(yè)的中應(yīng)用研究16第三節(jié) 卵黃免疫球蛋白在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用研究 18第四節(jié) 抗菌肽在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用研究21第五節(jié) 微生態(tài)制劑的應(yīng)用效果24第六節(jié) 動(dòng)物微生態(tài)制劑應(yīng)注意的事項(xiàng)27第七節(jié) 畜禽微生態(tài)制劑的研究方向30第二章 三元活性微生態(tài)制劑研究綜合報(bào)告 31第一節(jié) 項(xiàng)目來(lái)源31第二節(jié) 主要研究?jī)?nèi)容31第三節(jié) 技術(shù)路線32第四節(jié) 主要研究結(jié)果33第五節(jié) 討論42第六節(jié) 項(xiàng)目主要?jiǎng)?chuàng)新 45第三章 研究分報(bào)告 47第一節(jié) 微生態(tài)制劑菌種選育研究47第二節(jié) 飼用嗜酸乳酸桿菌LS-03生物特性的研究52第三節(jié) 微生態(tài)活菌制劑

3、發(fā)酵條件研究57第四節(jié) 微生態(tài)菌劑生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)研究69第五節(jié) 微生態(tài)制劑的包埋技術(shù)72第六節(jié) 三元活性微生態(tài)制劑飼養(yǎng)斷奶仔豬的效果78第七節(jié) 三元活性微生態(tài)制劑飼養(yǎng)生長(zhǎng)豬的效果84附件：1.科技查新報(bào)告2.專利初審合格通知書(shū)3.檢驗(yàn)報(bào)告4.企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)5.工藝流程圖6.生產(chǎn)許可證7.環(huán)保證明8.應(yīng)用效果證明報(bào)告前 言 抗生素在畜禽飼養(yǎng)業(yè)的應(yīng)用，為世界畜牧業(yè)的發(fā)展做出了巨大的貢獻(xiàn)，然而也帶來(lái)了極大的隱患引起內(nèi)源性感染和二重感染，使畜禽機(jī)體免疫力下降，細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，并可以轉(zhuǎn)移到人體，威脅人類身體健康。因此，自1988年以來(lái)，世界發(fā)達(dá)國(guó)家現(xiàn)已開(kāi)始全面禁止抗生素在飼料中的應(yīng)用。國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者正在關(guān)注并尋

4、找能夠克服抗生素弊端的代替物，而益生菌、低聚糖、免疫球蛋白、抗菌肽等則是目前較理想的具有發(fā)展前途的產(chǎn)品。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)單一的活菌制劑、低聚糖、免疫球蛋白、抗菌肽等產(chǎn)品在畜禽飼料上的應(yīng)用研究，均已有較多的報(bào)道。但是，將活菌制劑低聚糖免疫球蛋白有機(jī)結(jié)合的研究，在一起，形成一種具有特定功能的新型微生態(tài)制劑，則國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究的目的是，采用現(xiàn)代生物技術(shù)，按特殊的生理生化加工工藝，將活菌劑、低聚糖、免疫球蛋白、抗菌肽有機(jī)地結(jié)合起來(lái)而研制成的一種新型三元活性微生態(tài)制劑，充分發(fā)揮免疫球蛋白的特異性免疫功能與益生菌、低聚糖、抗菌肽的非特異性免疫功能及相應(yīng)的生理促進(jìn)功能，進(jìn)而達(dá)到促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)、預(yù)防和治

5、療感染性疾病的目的。摘 要 近年來(lái)，隨著抗生素在飼料添加劑中的禁用，尋求有效抗生素替代品的研究工作，受到人們極大的關(guān)注。而微生態(tài)制劑、低聚糖、卵黃免疫球蛋白、抗菌肽、中草藥制劑等則是有希望的抗生素代替品。本研究針對(duì)人們關(guān)注的這一問(wèn)題進(jìn)行了研究，取得了如下結(jié)果：1、篩選出高產(chǎn)乳酸的乳酸菌菌株。從126份豬腸、雞腸、牛瘤胃、豬糞中，近2000株菌株中，分離篩選出一株高產(chǎn)乳酸的乳酸片球菌（LS-9），乳酸產(chǎn)量高達(dá)26.09g/L。2、采用誘變育種技術(shù)對(duì)選育出的乳酸片球菌（LS-9）進(jìn)行了遺傳改良，并最終選項(xiàng)育出一株生產(chǎn)性能更好的乳酸菌（LS-9-1），該菌能忍耐高濃度（10%）葡萄糖，對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)化

6、充高達(dá)86%-90%，產(chǎn)乳酸的能力達(dá)到了108g/L。 3、利用重組DNA的基因工程技術(shù)，將棒桿菌（AS1.563）賴氨酸合成途徑中的關(guān)鍵酶基因（dapA）導(dǎo)入了乳酸片球菌（LS-9）中，使乳酸片球菌（LS-9）既高乳酸又能合成賴氨酸。 4、探索出活菌制劑混和發(fā)酵的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)。在生產(chǎn)應(yīng)用中采取分步發(fā)酵法：第一步發(fā)酵時(shí)間為24-27h，溫度32，通氣量為60升/min，pH值為6，攪拌速度為120r/min。適合酵母菌和芽孢桿菌快速生長(zhǎng)。第二步發(fā)酵時(shí)間24-27h，溫度37，通氣量為20升/min，pH值為6，攪拌速度為120r/min。適合乳酸菌快速生長(zhǎng)。 5、本研究比較了葡萄糖、蔗糖、大豆

7、粉、土豆粉、玉米粉、麥麩等六種物質(zhì)作為活菌制劑發(fā)酵的碳源，結(jié)果表明，效果最好的是葡萄糖。乳酸菌工業(yè)發(fā)酵最好的碳源是土豆粉，酵母菌工業(yè)發(fā)酵最好的碳源是大豆粉，芽孢桿菌工業(yè)發(fā)酵碳源上述兩者均可，沒(méi)有顯著差異，濃度為6%。 6、本研究比較了蛋白胨、植物油、大豆粉、玉米粉、土豆粉、麥麩、尿素等七種物質(zhì)作為活菌制劑發(fā)酵的氮源，結(jié)果表明，效果最好的蛋白胨，濃度為0.5%，其次是植物油，濃度為0.3%，尿素也是很好的無(wú)機(jī)氮源，但在培養(yǎng)基的高溫滅菌過(guò)程中，可能產(chǎn)生縮二脲等有害物質(zhì)，影響菌體的生長(zhǎng)。因此，本研究中排除使用無(wú)機(jī)氮源尿素。 7、本研究比較了低聚木糖、低聚果糖、低聚甘露等三種寡糖對(duì)活菌制劑的作用，結(jié)果

8、表明，效果最好的是低聚果糖，但達(dá)到最佳效果需要的濃度較大（0.25%），達(dá)到最佳作用效果，用量需要最少的是低聚木糖（0.075%）。 8、本研究比較了土霉素、金霉素、桿菌肽鋅三種常用的抗生素（濃度為1-10單位/g）對(duì)活菌制劑的影響。結(jié)果表明，三種抗生素對(duì)活菌制劑中的任何一種菌種都有抑制作用。 9、活菌制劑的菌種及其數(shù)量 本研究中，三元活性制劑的菌種： 乳酸菌：乳酸片球菌（LS-03 LS-09 LS-15）：3.6×108個(gè)/ml 芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌（AS1.884）：1.3×108個(gè)/ml 酵母菌：產(chǎn)朊假絲酵母菌（AS2.120）：2.1×108個(gè)/ml

9、10、活菌制劑營(yíng)養(yǎng)配方： 主體碳源6%+葡萄糖2%+蛋白胨0.5%+植物油0.3%，另加K2HPO40.2%、K2HPO40.2%、Caco31%、MgSO40.06%、MnSO40.025%。 豬用活菌制劑，主體菌種乳酸菌，主體碳源土豆粉。反芻動(dòng)物和雞用活菌劑，主菌種為酵母菌，主碳源為大豆粉。 11、三元活性制劑的配方： 本研究中，三元活性微生態(tài)制劑的主要配方為： 活菌制劑98.4%+低聚木糖0.5%+卵黃免疫球蛋白(IgY)0.1%+蠅蛆抗菌肽蛋白粉1% 12、微膠囊包埋壁材的選擇。研究結(jié)果表明，海藻酸鈉0.5%+變性淀粉35%+阿拉伯膠15%+麥芽糊精25%+玉米糖漿20%作為壁材效果最

10、佳，包埋率達(dá)97%以上。此外，2%的氯化鈣有利于膠囊的形成和菌種包埋率的保持。 13、三元活性制劑微膠囊包埋產(chǎn)品熱穩(wěn)定性研究。通過(guò)70高溫處理10min，包埋后的產(chǎn)品活菌成活率高達(dá)88.7%，而未包埋的產(chǎn)品活菌成活率只有41.5%。 14、三元活性制劑酸穩(wěn)定性研究。本研究通過(guò)模擬胃液（含胃酸10%、胃蛋白酶1%，PH值4.0-5.0）試驗(yàn)，結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)8h后，包埋產(chǎn)品活菌率還有32%，而未包埋的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)7h后就完全喪失了活性。 15、三元活性制劑貯藏穩(wěn)定性研究。經(jīng)6個(gè)月的貯藏試驗(yàn)顯示，包埋產(chǎn)品活性高達(dá)92.9%，而未包埋產(chǎn)品活菌存活率只有51.1%。包埋后的產(chǎn)品在更長(zhǎng)的貯藏期后的穩(wěn)定性，結(jié)果

11、仍在觀測(cè)之中。 16、活菌制劑代謝產(chǎn)物抑菌能力研究。研究結(jié)果表明，活菌制劑抑制病原菌起主要作用的是其代謝產(chǎn)物，且代謝產(chǎn)物的濃度越高，抑菌能力越強(qiáng)。代謝產(chǎn)物中起到抑菌作用的不是乳酸，而是乳酸以外的其他代謝產(chǎn)物，如乳酸菌素等，具體是哪種物質(zhì)仍待進(jìn)一步研究。 17、三元活性制劑抑菌能力的比較。本研究比較了三元活性制劑、單項(xiàng)活菌劑、單項(xiàng)低聚糖、單項(xiàng)免疫球蛋白、單項(xiàng)蠅蛆抗菌蛋白粉的抑菌能力，結(jié)果表明，三元活性制劑的抑菌能力明顯高于單項(xiàng)物質(zhì)的抑菌能力，但作用效果不是幾項(xiàng)物質(zhì)的數(shù)值累加。 18、通過(guò)本項(xiàng)研究，謹(jǐn)慎地提出如下理論：微生態(tài)制劑中，死菌具有與活菌相同的作用效果相同。微生態(tài)制劑產(chǎn)品中，強(qiáng)調(diào)菌種的代謝

12、產(chǎn)物含量比強(qiáng)調(diào)菌體的活性更為重要。 19、三元活性制劑在斷奶仔豬中的應(yīng)用效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，斷奶仔豬日增重比對(duì)照提高65.83%，日采食量提高45.7%，飼料轉(zhuǎn)化率提高12.02%，腹瀉率下降近3倍。 20、三元活性制劑在生長(zhǎng)豬中的應(yīng)用效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，生長(zhǎng)豬日增重比對(duì)照提高23.5%，日采食量提高10.7%，飼料轉(zhuǎn)化率提高11.8%，產(chǎn)投比為8.6：1，經(jīng)濟(jì)效益提高13%。第一章 國(guó)內(nèi)外微生態(tài)制劑研究進(jìn)展 早在上世紀(jì)初（1907年），著名細(xì)菌學(xué)家梅切尼科夫就提出飲用酸奶可以延年益壽的假說(shuō)，而微生態(tài)制劑用于防治畜禽疾病卻是近20年的事。 最早研究和應(yīng)用畜禽微生態(tài)制劑的歷史可以追溯到1947年

13、，蒙哈德（Mollgaard）首先發(fā)現(xiàn)使用乳酸桿菌飼喂仔豬，可以有效地增加仔豬的體重，并改善仔豬的身體健康狀況。然而20世紀(jì)50-70年代，正是抗生素研究、生產(chǎn)和使用的黃金時(shí)期，導(dǎo)致了微生態(tài)制劑的研究和開(kāi)發(fā)處于低潮，一段時(shí)期以來(lái)沒(méi)有受到足夠的重視，直到80年代中期才有了根本性的變轉(zhuǎn)。 日本是世界上研制開(kāi)發(fā)和利用微生態(tài)制劑較早的國(guó)家之一，其產(chǎn)品主要是雙歧桿菌活菌制劑。在70年代雙歧桿菌活菌制劑用于臨床治療腹瀉。至80年代中期已有26種產(chǎn)品，90年代已達(dá)到飽和狀況。據(jù)報(bào)道，至今在日本微生態(tài)制劑年產(chǎn)值達(dá)200億日元以上的企業(yè)已有10余家。 其他許多國(guó)家，例如德國(guó)、美國(guó)、法國(guó)、意大利、荷蘭、英國(guó)、俄羅

14、斯和韓國(guó)等都有不同類型的微生態(tài)制劑產(chǎn)品，有的產(chǎn)品近年來(lái)進(jìn)入了我國(guó)市場(chǎng)。如英國(guó)的PIC公司的Protexin，泰國(guó)研制生產(chǎn)的Togocerin，以0.04%的比例添加到飼料中，可以提高妊娠母豬和泌乳期母豬的生產(chǎn)性能，可以使仔豬的腹瀉率和死亡率明顯下降。加拿大生產(chǎn)的Prosurs Paste（主要含芽孢桿菌、糞鏈球菌、雙歧桿菌等）可使育肥豬日增重提高9.5%。目前國(guó)外多使用復(fù)合菌劑。如芬蘭的Broilact，由32種菌組成。日本的EM原液由5科10屬80余種微生物復(fù)合而成。 產(chǎn)品開(kāi)發(fā)進(jìn)行得最成功的是美國(guó)和日本，到2004年止，美國(guó)年產(chǎn)各種微生態(tài)制劑4.5萬(wàn)噸，產(chǎn)值達(dá)20億美元。其次是日本，年產(chǎn)各類

15、微生態(tài)制劑1.5萬(wàn)噸，產(chǎn)值達(dá)3000億日元。 我國(guó)雖然在微生態(tài)制劑的研究和開(kāi)發(fā)方面比歐美起步晚，但近10年來(lái)發(fā)展相當(dāng)迅速。生產(chǎn)微生態(tài)制劑的廠家由2000年的十幾家發(fā)展到2004年的1600家。產(chǎn)業(yè)化程度高、規(guī)模較大的有四川何明清用芽孢桿菌研制的8501、8701、8801、8901、901系列，分別用于仔豬、育肥豬、魚(yú)、禽、肉雞。大連醫(yī)學(xué)院研制劑的“促菌生”，南京農(nóng)大研的“促康生”，松江制藥廠生產(chǎn)的DM423菌粉，黑龍江獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的“痢康粉劑”，北京營(yíng)養(yǎng)研究所生產(chǎn)的“增菌素”，杭州商學(xué)院生產(chǎn)的乳酸菌復(fù)合劑等等，在此不一一列舉了。市場(chǎng)上應(yīng)用較多、效果較好的大多是以芽孢桿菌和乳酸桿菌為主的復(fù)合

16、益生菌劑。到2004年止，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)的各種微生態(tài)制劑的產(chǎn)量已達(dá)到15萬(wàn)噸。但由于國(guó)家沒(méi)有一個(gè)具體統(tǒng)一的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品的質(zhì)量參差不齊。 湖南省在微生態(tài)制劑的研究、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)方面起步較晚，湖南省畜物獸醫(yī)研究所于2004年成功地研制出以活菌制劑和中草藥混配的新型微生態(tài)制劑，并獲得了“湖南省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)”。 目前國(guó)際上已將微生態(tài)制劑分成三個(gè)類型。即益生菌（Probitics）、益生元（Prebiotics）、合生素（Synbiotics）。益生菌又稱益生素，或活菌制劑，益生元是一類能夠選擇性地促進(jìn)宿主腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)機(jī)體健康的物質(zhì)。如低聚糖類。合生素是指益生菌和益生元同時(shí)并存的制劑。目前

17、國(guó)際上對(duì)開(kāi)發(fā)新微生態(tài)制品的主要方向已從單純的“益生菌”轉(zhuǎn)向“合生素”這一方面。據(jù)日本報(bào)道：實(shí)驗(yàn)研究已證明雙歧桿菌活菌制劑中加入低聚糖后，其效果比不加的提高10-100倍。第一節(jié) 益生菌在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用研究一、益生菌的概念 動(dòng)物微生態(tài)制劑是根據(jù)動(dòng)物微生態(tài)學(xué)理論，利用動(dòng)物體內(nèi)正常的微生物成員，及其代謝產(chǎn)物或生長(zhǎng)促進(jìn)物，經(jīng)特殊的加工工藝制成的制劑。它具有補(bǔ)充、調(diào)整或維持動(dòng)物腸道內(nèi)微生物平衡，達(dá)到防病、治病、促進(jìn)健康和提高生產(chǎn)性能的目的。益生菌是微生態(tài)制劑的主體。 益生菌又叫活菌制劑，指為改善動(dòng)物微生態(tài)平衡而發(fā)揮有益作用，達(dá)到提高動(dòng)物生產(chǎn)力水平和健康水平，而人工添加的活菌制劑。二、益生菌的菌種 我

18、國(guó)農(nóng)業(yè)部于1994年、1999年、2003年三次公布了可以直接在動(dòng)物飼料中添加的微生物種類，2003年農(nóng)業(yè)部第318號(hào)公告中，允許使用的微生物有：地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、兩歧雙歧桿菌、糞腸球菌、尿腸球菌、乳酸腸球菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、乳酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、產(chǎn)朊假絲酵母、釀酒酵母、沼澤紅假單胞菌。 美國(guó)食品藥物管理局（FDA）和美國(guó)飼料公業(yè)協(xié)會(huì)（AAFCO）公布了40余種“可直接飼喂且通常認(rèn)為安全的微生物”。這些微生物有：短乳桿菌（L.Brevis）、乳酸鏈球菌（S.Lactis）、嗜酸乳桿菌（L.Acidophilus）、中間型鏈球菌（S.infermedi

19、us）、保加利亞乳桿菌（L.Bulgaricus）、乳脂鏈球菌（S.cremeris）、干酪乳桿菌（L.casei）、二丁酮鏈球菌（S.diacefylactis）、纖維二糖乳桿菌（L.Cellosus）、凝結(jié)芽孢桿菌（B.coagulans）、彎曲乳桿菌（L.Cuvvatus）、緩慢芽孢桿菌（B.Lentus）、德氏乳桿菌（L.Delbruekii）、枯草芽孢桿菌（B.subtilis）、發(fā)酵乳桿菌（L.Fermentum）、地衣芽孢桿菌（B.Lincheniforms）、羅特氏乳桿菌（L.Reuferii）、短小芽孢桿菌（B.Pumilus）、乳酸乳桿菌（L.Lactis）、腸膜明串珠菌（

20、L.Mesenferoides）、植物乳桿菌（L.Planfarum）、乳酸片球菌（P.acidilacticii）、青春雙歧桿菌（B.adolescentis）、啤酒片球菌（P.cerecisiae）、嬰兒雙歧桿菌（B.infantis）、戊糖片球菌（P.Pentosaceus）、動(dòng)物雙歧桿菌（B.animalis）、乳酸乳球菌（L.Lactis）、長(zhǎng)雙歧桿菌（B.Longum）、謝氏丙酸桿菌（P.Shermanii）、嗜熱雙歧桿菌（B.thermophilum）、費(fèi)氏丙酸桿菌（P.Freudenreichii）、兩歧雙歧桿菌（B.bifidum）、豬擬（類）桿菌（B.suis）、糞腸球菌（

21、E.faecalis）、瘤胃生擬桿菌（B.ruminocola）、尿腸球菌（E.faecium）、多毛擬桿菌（B.Capillosus）、嗜熱鏈球菌（S.thermephilus）、嗜淀粉擬桿菌（B.anylophilus）、啤酒酵母（S.Cerevisae）、黑曲霉（A.niger）和米曲霉（A.oryzae）等。三、益生菌的種類（一）、乳酸桿菌制劑此類菌屬，是動(dòng)物腸道內(nèi)的正常微生物，作為飼料應(yīng)用較多的是嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌和糞鏈球菌等。其中包括乳酸菌發(fā)酵飼料、乳酸菌粉、乳酸菌提取物。該類制劑應(yīng)用最早、種類最多。但是該類制劑都厭氧菌，活菌成活率低，由于生產(chǎn)技術(shù)、工藝水平的限制，在產(chǎn)品加工和貯

22、存過(guò)程中，易受干燥、高溫、高壓、氧化等不良環(huán)境的影響，導(dǎo)致產(chǎn)品貯存期短，質(zhì)量不穩(wěn)定而影響飼喂效果。 （二）、芽孢桿菌制劑此類菌在動(dòng)物腸道內(nèi)存在極少，目前主要用的是蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌等等。中國(guó)、日本、意大利等均有用芽孢桿菌作防病、治病及飼用微生制劑的報(bào)道。與其他微生物不同，芽孢桿菌以內(nèi)生孢子的形式存在，能耐受胃內(nèi)酸性環(huán)境，對(duì)飼料加工、運(yùn)輸過(guò)程中的干燥、高溫、高壓、氧化等不良環(huán)境因素的抵抗能力強(qiáng)、穩(wěn)定性高，并有很強(qiáng)的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，能降解植物飼料中一些復(fù)雜的化合物。 （三）、酵母類制劑該類菌屬在動(dòng)物的腸道存在的數(shù)量也極少。目前常用的制品有啤酒酵母、假

23、絲酵母等培養(yǎng)物。它可為動(dòng)物提供蛋白質(zhì)、幫助消化、刺激有益菌的生長(zhǎng)、抑制病源微生物的繁殖，提高機(jī)體免疫能力和抗病能力，對(duì)防治畜禽消化系統(tǒng)的疾病起到有益作用。此類制劑也受干燥、高溫、高壓、氧化等不良環(huán)境的影響，造成活菌數(shù)下降，產(chǎn)品的貯存期短、質(zhì)量不穩(wěn)定、影響飼喂效果。（四）、復(fù)合菌制劑活菌制劑根據(jù)菌株的組成，可分為單一菌劑和復(fù)合菌劑。單一菌劑研究和開(kāi)發(fā)較多，目前的發(fā)展趨勢(shì)是研制復(fù)合菌劑。復(fù)合菌劑能適應(yīng)多種宿主和條件，比單一菌制劑更能促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)和提高飼料轉(zhuǎn)化率。比較典型的是日本研制的含有5科10屬80多種微生物復(fù)合培養(yǎng)的有效生物群制劑（EM），用于飼料中，能增強(qiáng)畜禽的免疫能力、促進(jìn)生長(zhǎng)、改善環(huán)境

24、衛(wèi)生，而且具有天然無(wú)毒、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于世界各國(guó)的畜牧業(yè)。四、益生菌的作用機(jī)理（一）、優(yōu)勢(shì)種群理論宿主體內(nèi)的正常微生物群均存在一種或數(shù)種優(yōu)勢(shì)種群，優(yōu)勢(shì)種群的喪失，就意味著微生態(tài)失調(diào)。在動(dòng)物腸道微生態(tài)系統(tǒng)中，厭氧菌占99%以上，兼性厭氧菌和需氧菌不到1%，因此，腸道中的優(yōu)勢(shì)種群菌株。其作用就在于恢復(fù)或補(bǔ)充優(yōu)勢(shì)種群，使失調(diào)的微生態(tài)達(dá)到新的平衡。 （二）、生物奪氧理論多數(shù)病原微生物屬于需氧菌或兼性厭氧菌，當(dāng)動(dòng)物腸道內(nèi)的微生態(tài)系統(tǒng)失調(diào)，局部氧分子濃度升高時(shí)，有利于病原微生物的生長(zhǎng)和繁殖。使用微生態(tài)制劑可以培育耗氧微生物，降低局部氧分子濃度，抑制病原微生物的生長(zhǎng)、恢復(fù)失調(diào)的微生態(tài)平衡，從而達(dá)到預(yù)

25、防和治療疾病的目的。 （三）、生物拮抗理論正常微生物群構(gòu)成了機(jī)體的化學(xué)屏障和生物屏障。微生物的代謝產(chǎn)物如乙酸、丙酸、抗生素和其他活性物質(zhì)等共同組成了化學(xué)屏障。微生物群有秩序地定植于粘膜、皮膚等表面或細(xì)胞之間形成生物屏障。補(bǔ)充微生態(tài)制劑可以重新構(gòu)建機(jī)體的生物學(xué)屏障，阻止病原微生物的定植，發(fā)揮生物拮抗作用。 （四）、微生物群與營(yíng)養(yǎng)關(guān)系理論腸道內(nèi)正常微生物，不僅可以幫助食物的消化吸收，還可以合成蛋白質(zhì)、維生素及其他有益物質(zhì)。使用適量的微生態(tài)制劑，可以顯著提高飼料的利用率，并有利于維護(hù)機(jī)體微量元素的平衡。 （五）、三流循環(huán)學(xué)說(shuō)三流循還主要內(nèi)容是能量流、物質(zhì)流、基因流的循環(huán)。部分微生態(tài)制劑可以作為免疫調(diào)

26、節(jié)因子、增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力和抗體產(chǎn)生的能力，還可以促進(jìn)有毒物質(zhì)的代謝，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，維持粘膜結(jié)構(gòu)完整，從而保證了微生態(tài)系統(tǒng)中基因流、能量流、物質(zhì)流的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。五、益生菌的作用一、抑制有害菌的生長(zhǎng)，改變腸道內(nèi)微生物區(qū)系，降低疾病的發(fā)生1、產(chǎn)酸由于微生態(tài)制劑的某些菌種，如乳酸桿菌、雙歧桿菌能產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸，降低腸道內(nèi)的pH值，可抑制大腸桿菌、沙門氏桿菌、梭菌等的增殖，減少腸道疾病的發(fā)生。 2、產(chǎn)生過(guò)氧化氫一些菌種如嗜酸乳桿菌、乳酸桿菌等可產(chǎn)生過(guò)氧化氫，抑制葡萄球菌的生長(zhǎng)繁殖，使用益菌在細(xì)菌的種間競(jìng)爭(zhēng)中占優(yōu)勢(shì)。 3、生分解膽鹽雙歧桿菌細(xì)胞內(nèi)酶系統(tǒng)，還可將腸內(nèi)結(jié)合的膽鹽分解為游離的膽酸，通過(guò)

27、膽酸對(duì)有害細(xì)菌產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制作用。 4、競(jìng)爭(zhēng)性地抑制有害菌的定植益生菌進(jìn)入腸道后，與病源菌和有害菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，生存空間，抑制病原菌粘附到腸道細(xì)胞上。鄭躍杰（2000年）等研究表明，雙歧桿菌粘附到腸道細(xì)胞后，能完全抑制產(chǎn)生毒性的大腸桿菌（ETEC）和腸道致病性大腸桿菌（EPEC）的進(jìn)一步粘附，其機(jī)制有可能是由于雙歧桿菌的占位性保護(hù)，在空間上阻止了病原菌與宿主腸道細(xì)胞的進(jìn)一步接近。 5、生成抗生素某些益生菌（如乳酸桿菌、鏈球菌）可產(chǎn)生抗菌素，如嗜酸菌素、乳酸菌素。乳酸菌能產(chǎn)生廣譜性的抗菌物質(zhì)，這些抗菌物質(zhì)通過(guò)改變腸道內(nèi)活菌的數(shù)量和代謝而發(fā)生作用。 6、通過(guò)抑制有害菌的生長(zhǎng)，從而減少了胺和氨以及其

28、他有害氣體物質(zhì)的產(chǎn)生，減少了對(duì)動(dòng)物機(jī)體的毒害作用。二、刺激免疫系統(tǒng)提高機(jī)體免疫能力 微生態(tài)制劑的免疫刺激作用主要與糖類有關(guān)。糖類作為生物機(jī)能的調(diào)節(jié)因子，主要表現(xiàn)為免疫增強(qiáng)和刺激作用。對(duì)巨噬細(xì)胞和丁淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等，均有明顯的刺激作用，使這些細(xì)胞的活性增強(qiáng)，刺激機(jī)體增強(qiáng)免疫力。另外，雙歧桿菌及其表面結(jié)構(gòu)成份，能夠刺激活體的免疫臨控功能，增強(qiáng)各種細(xì)胞因子和抗體的產(chǎn)生，提高自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性，對(duì)宿主無(wú)任何毒副作用。三、營(yíng)養(yǎng)作用對(duì)歧桿菌在腸道內(nèi)發(fā)酵以后，可產(chǎn)生乳酸和醋酸，提高鈣、磷、鐵的利用率，并促進(jìn)鐵和維生素D的吸收。早在上世紀(jì)70年代就有報(bào)道，雙歧桿菌能夠合成維生素和蛋白質(zhì)，促進(jìn)

29、消化和吸收。雙歧桿菌具有磷蛋白磷酸酶，能分解奶中的又一酪蛋白，提高蛋白的消化率?？莶菅挎邨U菌在小腸中增殖時(shí)，產(chǎn)生水解酶，促進(jìn)蛋白質(zhì)、淀粉、脂肪、纖維素的分解，因而可提高飼料的利用率。用作微生態(tài)制劑的菌種，一般都具備有特殊的酶系，如分解亞硝酸銨的酶，降低膽固醇的酶，控制內(nèi)毒素的酶，分解又一酪蛋白的酶，分解各種纖維素的酶等。微生態(tài)制劑還在腸內(nèi)代謝產(chǎn)生幾種B族維生素。因此，微生態(tài)制劑對(duì)動(dòng)物的作用是非常重要的。第二節(jié) 益生元在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用研究一、益生元的概念 益生元又叫化學(xué)益生素，是一種不能被宿主消化吸收，也不能被腸道有害菌利用，只能被有益微生物如雙歧桿菌吸收利用，有促進(jìn)有益菌的活性，和促進(jìn)有益

30、微生物繁殖作用的一類化合物。二、益生元的種類（一）、寡糖寡糖又叫低聚糖，是由210個(gè)單糖通過(guò)糖甘鍵連接形成的直鏈或支鏈的一類糖，一般構(gòu)成單元為五碳糖或六碳糖. 基本上有6種：葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖。11個(gè)單糖以上的結(jié)合物稱為大糖類，100200個(gè)單糖結(jié)合物稱為多糖類。由于單糖分子種類，分子結(jié)合類型不同，形成種類繁多的寡糖，目前確認(rèn)的有1000種以上。根據(jù)其構(gòu)成單元，可將寡糖分為：同源性寡糖和異源性寡糖兩類。普通寡糖如蔗糖、麥芽糖、乳糖等，可以被動(dòng)物體消化吸收，而功能性寡糖，如果寡糖、寡乳糖、異麥芽糖、半乳寡糖等，不能被動(dòng)物體消化吸收，但卻為雙歧桿菌等腸道有益菌增殖所需。目

31、前在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中常用的寡糖主要有：甘露寡糖（MOS）、果寡糖（FOS）、寡葡萄糖（GOS）、寡乳糖（GAS）、寡木糖（XOS）、 寡葡萄糖（-GOS）、低聚焦糖（STOC）、反式半乳寡糖（TOS）、大豆寡糖等。（二）、菊粉菊粉是由D-呋喃果糖分子以 -2，1-糖甘鍵連接而成的果聚糖。因此，可以認(rèn)為菊粉包括果寡糖和更大聚合度的果聚糖。三、寡糖的作用機(jī)理（一）、通過(guò)選擇性增殖雙歧桿菌等發(fā)揮作用1、腸道有益菌利用短鏈分支糖類物質(zhì)大量增殖，形成微生態(tài)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，同時(shí)生成短鏈脂肪酸和一些抗菌物質(zhì)，直接抑制外源致病菌和腸道內(nèi)腐敗細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，有毒物質(zhì)大量減少，動(dòng)物發(fā)病也隨之受到控制。2、合成B族維生素VB1

32、、VB2、VB6、VB12等。3、有益菌的代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸能刺激腸道蠕動(dòng)，縮短食糜在腸內(nèi)停留時(shí)間，從而減少有害物質(zhì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體可能造成的毒害。（二）、腸道病原菌，對(duì)動(dòng)物起到保護(hù)作用。許多病原菌細(xì)胞表面的外源凝集素能結(jié)合游離的碳水化合物，而粘附在腸道上皮繁殖，低聚糖進(jìn)入腸道后會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地和病原細(xì)胞表面外源凝集素結(jié)合，阻止病原菌在腸上皮粘附，促進(jìn)其隨糞便排泄，減少對(duì)動(dòng)物的危害。（三）、免疫力刺激輔助因子低聚糖具有輔劑及免疫調(diào)解的功能，所謂輔劑就是能增加免疫系統(tǒng)對(duì)疫苗、藥物和抗原免疫應(yīng)答的物質(zhì)。提高血清中LgA、LgM、LgG的含量。從而增加動(dòng)物體液及細(xì)胞免疫功能。（四）、促進(jìn)脂類代謝促進(jìn)脂類代謝是低

33、聚糖的主要作用之一。Delzenne等（1995）的試驗(yàn)表明，日糧中添加低聚糖可降低甘油三脂的濃度。DjouzI等（1977）報(bào)道，低聚糖具有降低血脂和血清中膽固醇的功效。（五）、促進(jìn)動(dòng)物對(duì)礦物質(zhì)的吸收利用Ohta等（1998）試驗(yàn)表明，在日糧中添加低聚糖，可促進(jìn)小鼠對(duì)鈣、鐵、鎂等礦物質(zhì)的吸收利用。（六）、抗腫瘤作用 低聚糖可抑制有害菌的生長(zhǎng)而降低腸道內(nèi)的葡萄糖苷酶、硝酸還原酶、亞硝酸還原酶、偶氮還原酶這些致癌因子的含量。第三節(jié) 卵黃免疫球蛋白在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用研究 利用外源抗體口服免疫療法，為動(dòng)物提供被動(dòng)免疫從而預(yù)防和治療腸道感染引起疾病的研究，將近有一個(gè)世紀(jì)的歷史了。自Klemperer于

34、1893年首次報(bào)道雞蛋中存在抗體以來(lái)，人們對(duì)雞蛋中抗體的研究不斷深入。近20年，國(guó)內(nèi)外學(xué)者就卵黃抗體的研究和開(kāi)發(fā)作了許多方面的研究工作，證明免疫家禽是提供特異IgG抗體最方便、最廉價(jià)的來(lái)源。隨著抗生素在世界各國(guó)的被禁用，人們正致力于尋找抗生素的有效代替品，同酶制劑、益生菌、中草藥等一樣，卵黃抗體作為一種安全、高效的飼料添加劑，必將被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。美國(guó)食品和藥品管理局于1996年將卵黃免疫球蛋白（IgY）列入“一般公認(rèn)安全物質(zhì)范疇”。德國(guó)已于1995年批準(zhǔn)用預(yù)防仔豬、牛犢腹瀉病的抗體粉作為飼料添加劑。一、卵黃抗體及其特征（一）、卵黃抗體的概念卵黃抗體是指從免疫禽蛋中提取出的針對(duì)特定抗原的抗

35、體。卵黃抗體的研究始于20世紀(jì)初，1889年Klemperper發(fā)現(xiàn)了卵黃中富含抗體，Williams等（1962）發(fā)現(xiàn)用某種抗原免疫產(chǎn)蛋母雞，雞血中可產(chǎn)生相應(yīng)抗體，產(chǎn)蛋母雞又能以產(chǎn)蛋的方式將血清免疫球蛋白有效地轉(zhuǎn)移到卵黃中（Rose和Orlans，1981）。雞血液中能轉(zhuǎn)移到卵黃中的免疫球蛋白只有免疫球蛋白G（IgG），至今尚未發(fā)現(xiàn)卵黃中存在免疫球蛋白A和M（IgA和IgM）（胡清林等1997）。1969年Leslie和Clem將這種抗體命名為卵黃免疫球蛋白（IgY）。（二）、黃抗體的分子結(jié)構(gòu)正常雞的蛋黃抗體分子量約為180KD，由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，分子量分別為67000和2200。I

36、gY的等電點(diǎn)接近于5.2。盡管IgY同免疫球蛋白E（IgE）有相似的結(jié)構(gòu)特征，但從抗體產(chǎn)生的特性及數(shù)量來(lái)看，IgY與哺乳動(dòng)物的IgG更相似。IgY的基本功能是與特異性抗原結(jié)合而發(fā)生免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。二、卵黃抗體的特點(diǎn)（一）、有良好的穩(wěn)定性卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋白，在貯存、生產(chǎn)、和加工以及攝食及消化過(guò)程中，保證抗體活性的穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項(xiàng)試驗(yàn)表明，卵黃抗體具良好的穩(wěn)定性，并且耐熱、耐酸、耐堿的性能也都較強(qiáng)。Shimizu（1988、1992、1993）報(bào)道，IgY的熱穩(wěn)定性與哺乳動(dòng)物類的免疫球蛋白大致相同。研究發(fā)現(xiàn)熱（75）或酸（PH值3.0時(shí)能夠降低IgY的抗

37、體活性，溫度65時(shí)，IgY活性可保持24h以上，但70處理90min后活性明顯下降。Lasson等（1993）將IgY制劑在4貯存5年或在室溫下放置6個(gè)月，經(jīng)免疫擴(kuò)散法檢測(cè)，IgY抗體仍無(wú)明顯下降。IgY對(duì)pH值和蛋白不解酶有較好的穩(wěn)定性，IgY在pH4.011.0時(shí)比較穩(wěn)定，pH值為3.03.5時(shí)，活性迅速下降，pH為12.0時(shí)活性也降低。Yolken等（1988）報(bào)道，IgY能夠抵抗幼齡動(dòng)物的胃酸屏障，抵抗腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。由于幼畜胃內(nèi)酸度不會(huì)太高，IgY在胃內(nèi)一般不會(huì)嚴(yán)重失活，故在幼畜日糧中添加IgY可獲得有效的被動(dòng)保護(hù)免疫力。但對(duì)年齡大的動(dòng)物來(lái)說(shuō)，就有必要對(duì)IgY進(jìn)行

38、保護(hù)，以免在胃中被消化。Shimizu（1993）對(duì)IgY進(jìn)行了脂質(zhì)體包埋的探索，發(fā)現(xiàn)在pH2.8的胃蛋白酶液中37溫育1h后，包埋的IgY仍可保存80%的活性。而未包埋的活性幾乎全部喪夫。 （二）、產(chǎn)量高、成本低、便于規(guī)?；a(chǎn)免疫的產(chǎn)蛋母雞是高效率、高質(zhì)量的IgY“生產(chǎn)加工廠”。經(jīng)用特定的抗原免疫后的產(chǎn)蛋母雞，對(duì)抗原可產(chǎn)生持久性應(yīng)答?？贵w在卵黃中出現(xiàn)的時(shí)間，比在血液中約晚一周，一般在母雞被免疫后15天左右出現(xiàn)，效價(jià)可持續(xù)數(shù)月至一年以上。卵黃中IgY的含量超過(guò)哺乳動(dòng)物血清抗體含量（Hafla等）。一只母雞（平均每周產(chǎn)蛋56枚）產(chǎn)蛋產(chǎn)生的抗體相當(dāng)于100ml血清或200ml血液。一只兔子一個(gè)月

39、可提取IgG約為200mg，而一只母雞一個(gè)月可提取IgY2000-28000mg（Schade等，2001），因此，母雞生產(chǎn)IgY的效率是哺乳動(dòng)物的10倍。此外，動(dòng)物的采血不僅對(duì)動(dòng)物本身是極大的應(yīng)激，而且費(fèi)時(shí)、費(fèi)工、大規(guī)模生產(chǎn)不切實(shí)際。（三）、綠色無(wú)害，沒(méi)有殘留卵黃抗體是禽蛋中天然存在的一種物質(zhì)，化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，發(fā)揮作用后即可被機(jī)體作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解利用。用IgY抑殺病原體，作用對(duì)象直接準(zhǔn)確（只對(duì)產(chǎn)生該抗體的抗原起作用），不會(huì)象抗生素那樣，抑殺病原菌的同時(shí)，也殺死有益微生物。使用IgY時(shí)，病原微生物不會(huì)產(chǎn)生抗藥性，不存在給動(dòng)物用藥而影響人類身體健康。（四）、別域廣，鑒別力強(qiáng)抗原與本身的親緣關(guān)系

40、越遠(yuǎn)，越易被識(shí)別。鳥(niǎo)類與哺乳動(dòng)物種群差距大，鳥(niǎo)類更適合于生產(chǎn)抗哺乳動(dòng)物抗原的特異性抗體。卵黃抗體不會(huì)激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)，不與抗哺乳動(dòng)物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng)，不與哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的Fc受體結(jié)合。這些在免疫診斷中具有重要意義。第四節(jié) 抗菌肽在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用研究 抗菌肽在動(dòng)植物體內(nèi)分布廣泛，是天然免疫防疫系統(tǒng)的一部分?？咕牟粌H有廣譜抗菌能力，而且對(duì)真菌、病毒及癌細(xì)胞也有作用?，F(xiàn)在越來(lái)越多的國(guó)家開(kāi)始呼吁禁用抗生素，而抗菌肽因其獨(dú)特的生物活性以及不同于傳統(tǒng)抗生素的特殊作用機(jī)理，已引起人們極大的研究興趣，成為分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一?？咕氖紫扔扇鸬淇茖W(xué)家Boman G等人經(jīng)注射陰溝桿菌及大腸桿

41、菌誘導(dǎo)惜古比天蠶蛹產(chǎn)生的具有抗菌活性的多肽，即Cecropins。此后科學(xué)家在昆蟲(chóng)、被囊動(dòng)物、兩棲動(dòng)物、鳥(niǎo)類、魚(yú)類、哺乳動(dòng)物、植物乃至人類多種生物體中發(fā)現(xiàn)并分離獲得了300余種內(nèi)源性抗菌肽。近來(lái)，對(duì)昆蟲(chóng)抗菌肽進(jìn)行了較為系統(tǒng)的理論和應(yīng)用研究。一、抗菌肽的結(jié)構(gòu)和特征 天然抗菌肽通常是由30多個(gè)氨基酸殘基組成的堿性小分子多肽，水溶性好，分子量大約為4kDa。大部分抗菌肽具有熱穩(wěn)定性，在100 下加熱1015min仍能保持其活性。多數(shù)抗菌肽的等電點(diǎn)大于7，表現(xiàn)出較強(qiáng)的陽(yáng)離子特征。氨基酸N端富含賴氨酸和精氨酸等陽(yáng)離子型氨基酸，其C端富含丙氨酸、纈氨酸、甘氨酸等非極性氨基酸。在許多特點(diǎn)位置，都有一些較保守

42、的氨基酸殘基，這些保守的氨基酸殘基是抗菌肽分子具有抗菌活性不可缺少的。另外一些天然抗菌肽的C端往往是酰胺化的。這與抗菌肽的廣譜抗菌活性有關(guān)?？咕脑谝欢l件下形成 螺旋和 -折疊結(jié)構(gòu)。二、抗菌肽的抗菌機(jī)理和特點(diǎn)（一）、作用機(jī)理研究表明，抗菌肽分子通過(guò)膜內(nèi)分子間的位移，而相互聚集在一起，從而在膜上形成離子通道，使膜蛋白凝集，使細(xì)菌因不能保持正常的滲透壓而死亡。也有人提出是通過(guò)影響細(xì)胞膜上的能量運(yùn)轉(zhuǎn)和代謝，從而損傷細(xì)胞呼吸鏈的功能而殺死細(xì)胞菌?？咕倪€可以斷裂癌細(xì)胞的核DNA，通過(guò)抑制DNA的合成，而殺死癌細(xì)胞?？傊?，是通過(guò)物理方式和細(xì)胞膜發(fā)生作用。（二）、作用特點(diǎn)1、作用部位的有效性傳統(tǒng)抗生素作

43、用是通過(guò)消除微生物生長(zhǎng)或生存必須的功能實(shí)現(xiàn)的，如阻撓細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成或者改變酶的活性來(lái)達(dá)到殺菌的目的，而細(xì)菌通過(guò)改變一種基因就可以對(duì)付抗生素的這種進(jìn)攻?？咕膭t是作用細(xì)菌的細(xì)胞膜，導(dǎo)致膜的通透性增大，以此穿透、并殺滅細(xì)菌。細(xì)菌必須改變膜的結(jié)構(gòu)，即改變相當(dāng)部分的基因才能防御抗菌肽的進(jìn)攻，而這幾乎是不可能的。因此，抗茵肽極大地減少了產(chǎn)生耐藥性的可能。2、作用對(duì)象的選擇性抗菌肽只對(duì)原核生物細(xì)胞和真核生物病變細(xì)胞有抗菌作用，對(duì)正常的真核細(xì)胞不起作用。原因在于原核生物和正常真核生物的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不同，正常真核細(xì)胞膜中含有大量的膽固醇，而膽固醇的存在使膜結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定。此外，高等動(dòng)物存在高度發(fā)達(dá)的細(xì)胞骨架系統(tǒng)

44、，其存在也低抗了抗菌肽的作用。三、抗菌肽的生物學(xué)特性（一）、廣譜性畜禽疾病多為混合感染，傳統(tǒng)的抗生素抗菌譜一般較窄，且只對(duì)細(xì)菌有效。而大多數(shù)抗菌肽對(duì)革蘭氏陰陽(yáng)性菌均有效，有些還對(duì)真菌、病毒、寄生蟲(chóng)、原生動(dòng)物有抑制或殺滅作用。（二）、用快速、安全、無(wú)殘留由于分子較小，在機(jī)體受到侵害時(shí)，幾分鐘內(nèi)就能產(chǎn)生作用，且擴(kuò)散速度比體內(nèi)免疫細(xì)胞更快更靈活?？咕氖莿?dòng)物體成分之一，參與生命過(guò)程，是小分子短肽，具有安全無(wú)毒副作用的生物學(xué)特性。（三）、刺激免疫反應(yīng)抗菌肽可參與宿主天然免疫的其他反應(yīng)，比如刺激單核細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞的趨化作用、促進(jìn)肥大細(xì)胞組織胺的釋放、抑制組織蛋白酶以及促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。（四）、與其他抗菌

45、物質(zhì)的聯(lián)合作用研究發(fā)現(xiàn)，抗菌肽與傳統(tǒng)抗生素聯(lián)用，可提高藥效并拓寬傳統(tǒng)抗生素的抗菌譜。至今未見(jiàn)有關(guān)抗菌肽與其他藥物相拮抗的報(bào)道。（五）、對(duì)環(huán)境有較強(qiáng)的抗性，適合做添加劑抗菌肽在100加熱10min條件下仍能保持活力，對(duì)PH值有較強(qiáng)的適應(yīng)性，水溶性好。部分抗菌肽尚具備抵抗胰蛋白酶或胃蛋白酶水解的能力，進(jìn)入動(dòng)物消化道，能很好地發(fā)揮其和用。四、抗菌肽的應(yīng)用研究 溫劉發(fā)等人應(yīng)用華南農(nóng)業(yè)大學(xué)已開(kāi)發(fā)的抗菌肽添加于斷奶仔豬料中，飼喂試驗(yàn)結(jié)果表明，蠶抗菌肽可減輕斷奶仔豬的腹瀉。陳曉生等報(bào)道，在飼料中添加抗菌肽對(duì)肉雞有促進(jìn)生長(zhǎng)江的作用。另有報(bào)道，柞蠶抗菌肽應(yīng)用于預(yù)防及治療雞的白痢效果明顯。 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保研究

46、所、南開(kāi)大學(xué)、天津大學(xué)等科研單位，都已成功地從蠅蛆體內(nèi)分離出抑制多種病源菌和病毒的抗菌肽，目前多種抑菌試驗(yàn)已經(jīng)完成，科研人員正在著手進(jìn)一步強(qiáng)化從蠅蛆體內(nèi)提取的抗菌肽。第五節(jié) 微生態(tài)制劑的應(yīng)用效果一、豬 何明清、喬紹權(quán)、陳代文、羅安治、胡未一等（19891994），用芽孢桿菌添加劑8701A通過(guò)飼喂1357頭哺乳仔豬試驗(yàn)，結(jié)果表明，以添加0.15%的用量效果最佳，日增重較對(duì)照組提高19.2%22.8%，飼料利用率提高6.3%23.5%時(shí)；添加0.1%8701B（育肥豬用），當(dāng)消化能為3.163.17Mcal/kg時(shí)，粗蛋白在15.78%13.1%時(shí)，全程日增重?zé)o明顯差異，而飼料利用率提高7.7%

47、；在用量和菌劑相同的情況下，當(dāng)消化能為3.2Mcal/kg時(shí)，日增重提高6.7%，飼料利用率提高11.7%；在營(yíng)養(yǎng)水平較低時(shí)，當(dāng)消化能2.93.0Mcal/kg時(shí)，粗蛋白為12.2%14.1%，全程日增重提高16.5%，飼料利用率提高6.1%；當(dāng)在農(nóng)村條件下試驗(yàn)時(shí)，日增重提高15.1%25.8%。 薛恒平等先后對(duì)10余批510頭哺乳仔豬進(jìn)行試驗(yàn)，使用乳酸桿菌和芽孢桿菌復(fù)合制劑平均提高增重21.5%，飼料利用率提高9%。 朱萬(wàn)寶等(1999)利用蠟狀芽孢桿菌、糞鏈球菌等4株菌制成復(fù)合微生態(tài)制劑飼喂35日齡的斷奶仔豬，飼喂20天，與對(duì)照組相比，仔豬腹瀉減少，增重提高19.6%，節(jié)約飼料15.22%

48、，每頭仔豬增加經(jīng)濟(jì)效益5.96元。二、家禽（一）、肉雞何明清、向貴友、謝候清等（1994），芽孢桿菌8901添加劑經(jīng)1993-1994年3次養(yǎng)雞飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，在營(yíng)養(yǎng)水平相同的情況下，分別用0.1%、0.15%和0.2%的8901添加劑，飼喂時(shí)間分別為5、6、7三個(gè)周齡的肉雞，結(jié)果顯示日增重較對(duì)照組分別提高8.9%、14.5%、21.6%，飼料利用率分別提高19.1%、17.9%、10.1%，發(fā)病率分別降低20%、20.7%、22.4%。光合細(xì)菌添加劑經(jīng)5200羽寶雜交雞飼喂63天，結(jié)果在營(yíng)養(yǎng)水平相同條件下，光合細(xì)菌添加劑（培養(yǎng)液）用量為28日齡前平均每日每羽0.4mL，28日齡后平均每

49、羽0.6mL，日增重試驗(yàn)組較對(duì)照組提高12.3%，飼料利用率提高21.0%，成活率提高3.1%。（二）、雞蛋聶志武等（1997）報(bào)道產(chǎn)蛋母雞誤飼生長(zhǎng)育肥豬飼料而受應(yīng)激，致使產(chǎn)蛋量下降，但用四川農(nóng)大生產(chǎn)的芽孢桿菌制劑按0.1%的量添加在基礎(chǔ)日糧中飼喂產(chǎn)蛋雞，產(chǎn)蛋重由27.4g/枚，上升為46.5g/枚，上升了19.1g/枚，產(chǎn)蛋率由44.3%提高到74.3%；空白對(duì)照組產(chǎn)蛋重由33.8g/枚，上升為37.8g/枚，僅上升4.0g/枚，產(chǎn)蛋率由54.4%提高到60.5%；抗生素組產(chǎn)蛋重由27.4g/枚上升為37.4g/枚，上升了10.0g/枚，產(chǎn)蛋率由44.2%提高到59.8%。牛鐘相（2000年

50、）用雙歧桿菌等飼喂蛋雞，產(chǎn)蛋率提高12.2%，飼料轉(zhuǎn)化率提高10.4%。三、奶牛 張力軍等（1995）利用四川農(nóng)大生產(chǎn)的豬用8701微生物添加劑飼喂奶牛，按千克體重50mg計(jì)算，每天飼喂一次，連續(xù)30天。結(jié)果表明：試驗(yàn)組比對(duì)照組日均產(chǎn)奶量增加5.17kg，提高16.81%。李義海等（1998），在奶牛中應(yīng)用微生態(tài)制劑，可使奶牛產(chǎn)奶量提高7%10%，乳蛋白含量提高0.10.2個(gè)單位，乳脂率提高0.10.3個(gè)單位。四、家兔 家兔為草食動(dòng)物，對(duì)粗纖維消化率一般在8%28%之間，飼用微生物添加劑的引入可增強(qiáng)家兔對(duì)較難消化的粗纖維的消化利用。安繼升等（1989）用乳酸桿菌添加劑飼喂對(duì)德系長(zhǎng)毛仔兔并進(jìn)行腹

51、瀉病防治和增重效果觀察，結(jié)果從21日齡到52日齡斷奶，試驗(yàn)組仔兔增重低于對(duì)照組4.94%；而斷奶后10天，試驗(yàn)組比對(duì)照組多增重7.89%；斷奶前試驗(yàn)組發(fā)病率低于對(duì)照組10.7%，斷奶后10天，試驗(yàn)組發(fā)病率較對(duì)照組低4.23%。 張玉笙等（1993），在家兔日糧中按1.0%、1.5%、2%的量添加微生物添加劑，日增重分別比對(duì)照組提高2.38g、3.61g、4.62g，飼料轉(zhuǎn)化分別提高4.86%、6.29%、8.86%，屠宰率分別提高1.79%、1.21%、3.70%，發(fā)病率和死亡率均極顯著地低于對(duì)照組。五、魚(yú)、蝦 張道南等（1988），在蝦苗中使用光合細(xì)菌，每槽4000尾，每天投喂140mL菌液

52、，試驗(yàn)組蝦苗變態(tài)率為94.1%，成活率為63.7%；投喂100mL菌液組，變態(tài)率為91.4%，成活率為53.9%；而對(duì)照組變態(tài)率為77%，成活率44.4%。李勤生等（1990），用DILI光合細(xì)菌進(jìn)行團(tuán)頭魴和草魚(yú)試驗(yàn)，在團(tuán)頭魴魚(yú)種中無(wú)論是添加0.5%或1.0%的菌體還是菌液均表現(xiàn)明顯的促生長(zhǎng)作用，第1批水缸中試驗(yàn)，日增重為對(duì)照組的4.71倍，總重率是對(duì)照組的5.1倍，第2、3批也得到相似的結(jié)論。在草魚(yú)試驗(yàn)中，水缸流水試驗(yàn)20天，添加0.4%菌體的試驗(yàn)組魚(yú)種，生長(zhǎng)速度大大超過(guò)對(duì)照組，總增重率和日增重分別是對(duì)照組的3.2倍和2.5倍，在網(wǎng)箱生產(chǎn)中，經(jīng)95天飼養(yǎng)，成活率提高7.0%，餌料系數(shù)下降0.

53、43。浙江省慈溪市（1995）應(yīng)用光合細(xì)菌拌料，喂草魚(yú)較對(duì)照組畝產(chǎn)增加3.4%，餌料系數(shù)下降0.3，降低17.5%；用菌液潑灑方式使用，畝產(chǎn)增加12.4%，餌料系數(shù)下降0.22，降低12.9%。 姚鍵（1994）報(bào)道將蠟樣芽孢桿菌用于對(duì)蝦的生產(chǎn)上，用量為1mg/kg，出苗量比對(duì)照組提高10%15%。何明清、王子彥、方尚文、倪學(xué)勤等（1989-1994）用微生物添加劑（8801）飼喂鯉魚(yú)苗和成魚(yú)，增重分別提高12.9%和8.0%11.6，餌料利用率分別降低18.2%和8.7%；林志新等（1994）用四川農(nóng)大生產(chǎn)的8801飼喂蝦，畝產(chǎn)提高31.2%，飼料利用率提高22.2%，成活率提高21.2%。 薛恒平等（1997），用芽孢桿菌、光合細(xì)菌、蛭弧菌等制成的復(fù)合菌劑（微生態(tài)制劑王），按1mg/kg用量投入蝦池中，在蝦苗放養(yǎng)1月后投入，每星期投入1次，共3次，結(jié)果試驗(yàn)組對(duì)蝦病毒病發(fā)生較對(duì)照組延遲10天，產(chǎn)量增加40%；用于文蛤，試驗(yàn)組3個(gè)池塘均未發(fā)病，而對(duì)照組3個(gè)池塘發(fā)病率為30%50%。六、飼用微生物添加劑應(yīng)用效果：潘康成（2000年）對(duì)31篇綜述或研究資料進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所得結(jié)果均為平均數(shù)，見(jiàn)下表： 飼用微生物添加劑應(yīng)用效果平均數(shù)（2000年）（%）動(dòng)物類型 提高增重 提高飼料 降低 降低 提高產(chǎn)蛋量 轉(zhuǎn)化率 發(fā)病率 死亡率 或