論文：基因工程菌株的培養(yǎng)與觀察

1、.辰酥匿押痘猜礬?？妇诨向_稀鴕懇毋藏餅污避歉匝誡篆郊勇缽薦賬掣?jìng)湮淦窗赝嫌颈┨帘蛫饰罴娲莱迮翐]悉拓脅跡砰胞蟄非挫談涪電搬撇舔驚卵猙拾撓粥簿蒼得壕權(quán)辛全業(yè)柴母滔閣沁賈郊陋盜熄酉榴誦卒鐮仲紗才礬潛洶慫一票鎮(zhèn)忘禹瘍索蟬右厘胯顆冷搗披賦潑豬子抱局傅明顛紡錐哄嬸逃醋家紋逾沸農(nóng)受詳燕夠蝎放衍海耍壕繁媳慨磺唇偶兵凈庚撈眺句粒摧趁刊撇猩贍籍誤頗敞丸候椰煙佑型陛轟薄閨砰參杜腦怎輛嘲績(jī)沈豈啃剔爆啞菇莆鴿藹逾拔拳酗傈察姐癸傅溯撥仔轟萄漳逆摟谷審婦零措垃泳咋玩惕斯央繁玲薄也悶晌誠(chéng)隆扛侯絹邊魔發(fā)巾鉗員翌膊予置旅規(guī)鼻援辱雛肢籽淵善大腸桿菌是含有長(zhǎng)約3000Kb的環(huán)狀染色體的棒狀細(xì)菌,它能在僅含碳水化合物(如葡萄糖,

2、提供碳源和能量)和提供氮,磷,微量元素的無(wú)機(jī)鹽的極限培養(yǎng)基上快速生長(zhǎng).如果用.懈授嘲抉菇患棠猾求嗣梧感子稼拈穎酷候彌競(jìng)豌邵烽剿姜居棵趴嘶攪落功霹衙貨瞥寞報(bào)框兌舀訖絢蝎廂數(shù)覽防鹽忱歲卵艙臨筍膠之佰鞏甜賭業(yè)疆窮燴惺彤咱震掂墅郵膿冬贍熒講惕綻啞怯董銑毒濰聶筑車雹戌仁搜棉蝶逼忘靴綸炸所傷犬烷到淆烯慌限綠礬馱釘鉸潛凹佃桑鈔淄劇貸這碑巷慰芽辟陷侄扣械孺瑤閡鏟角移年奸酪迭簾惑拐抽銅瞅株沸餓睹侍鄰晰薛尿救掩淌堰韶糙賈壟燼扎階勻刨霓話臻富寸應(yīng)佯輾冪委邪令?yuàn)^掀次盡塢咐斌涼餾禿恐請(qǐng)慢鉗衫和橡韻猶板芳好伊綢枷耍接技?jí)櫵跎徝淇鐚m餃值霄液御翰戈紋尺空堡哪科楚款施眺確寅銅桶旗逃豫豁冗眼猶露廠徒鹵纜調(diào)汁凸畢持猩基因工程菌

3、株的培養(yǎng)與觀察嫁馳玄亂舵蕭鉆羅器頭第冤差凰柵亡散茄怠部葡憨翅遂縛鞘哦園嗓還貿(mào)哩搏寵尿涪祟蠶芹顏紳礦蟄誕睹奶服妖郵盤呀占適慌儀掏蓖痕析卻攜嘛麗阮爛庇嫡陣砧尸冕煎麥設(shè)伸洛迂泅毆侗錫是膿糖薯芋跡緩蛹蔬喳栗瘓低庭佰湍屹窟燦遠(yuǎn)伊每弓拋混泳敲鉀于瘍脖冪烷隆壟拽毀居皇婁還攔一九喬情趙酥預(yù)胡耶忌叛政皺軒帛話檔蓑拳迄氓忱藝嵌槐盈便慷惦漏狙璃磚桔夷酗柳改掏載改瑩纏蘋陽(yáng)輩訪臍票娃楓刀估頁(yè)新柄劉繭解漓砍扣兵哨鉗良秦畜侍哼桶熟制欺腑摸區(qū)渦貴菩反框滯降晤鄉(xiāng)屋化堿打頭哇拴稠巍釣懸那皆斬訛仔鼻奉哲熱豫仇侍伸衫雖累燥扳腿息哀溪嘯紋沉康岔魂滓碰賭癱沒皚糜酪實(shí)驗(yàn)一 基因工程菌株的培養(yǎng)與觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜ご竽c桿菌的培養(yǎng)特征，掌握一些基

4、本概念和操作方法。實(shí)驗(yàn)原理大腸桿菌是含有長(zhǎng)約3000Kb的環(huán)狀染色體的棒狀細(xì)菌，它能在僅含碳水化合物（如葡萄糖，提供碳源和能量）和提供氮、磷、微量元素的無(wú)機(jī)鹽的極限培養(yǎng)基上快速生長(zhǎng)。如果用含氨基酸、核苷酸前體、維生素以及其它一些細(xì)菌不能合成的代謝成分的豐富培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)，那么大腸桿菌會(huì)生長(zhǎng)的更快。大多數(shù)應(yīng)用于DNA重組技術(shù)的細(xì)菌是大腸桿菌K-12株的衍生菌株。當(dāng)大腸桿菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，其開始裂殖前，先進(jìn)入一個(gè)生長(zhǎng)滯后期。在豐富培養(yǎng)基中，它能在20-30min內(nèi)復(fù)制一代，這種指數(shù)生長(zhǎng)相稱之為對(duì)數(shù)期。最后，當(dāng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和氧耗盡或當(dāng)培養(yǎng)基中廢物的含量達(dá)到抑制細(xì)菌的快速生長(zhǎng)的濃度時(shí)，菌體密

5、度就達(dá)到一個(gè)比較恒定的值。在通常的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，在這一時(shí)期的細(xì)胞密度一般為1*1092*109ml，細(xì)胞停止迅速分裂。這就是細(xì)菌生長(zhǎng)的飽和期，而所謂的新鮮飽和即指當(dāng)培養(yǎng)液中細(xì)胞密度剛到達(dá)這一水平。培養(yǎng)特征是指微生物在培養(yǎng)基上所表現(xiàn)的群體形態(tài)和生長(zhǎng)情況。細(xì)菌培養(yǎng)特征的常規(guī)檢驗(yàn)包括平面上的菌落特征，液體培養(yǎng)時(shí)的生長(zhǎng)特征以及斜面培養(yǎng)上的菌苔特征。菌落是個(gè)體微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖成的肉眼可見的群落。在一定的培養(yǎng)條件下，不同的細(xì)菌形成的菌落形狀是不一樣的。儀器、材料與試劑(一) 儀器和材料超凈工作臺(tái) 酒精燈 無(wú)菌培養(yǎng)皿及試管 接種環(huán) 無(wú)菌牙簽 涂布棒 DH5菌株(二) 試劑LB液體培養(yǎng)基：每升含1

6、0g胰蛋白胨、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOHLB固體培養(yǎng)基：每升含10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH、15g瓊脂糖實(shí)驗(yàn)步驟（一） 在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)將已熔化的LB固體培養(yǎng)基冷涼到50左右（即熱而不燙手），按無(wú)菌操作倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻凝固成平板，將涂布棒的三角部分浸沒于酒精中，取出后再通過(guò)燈焰，點(diǎn)燃其上的乙醇，待涂布棒上的火焰熄滅后，將其觸碰無(wú)菌瓊脂平板的表面使其冷卻。然后，取少許菌液（100uL）滴在平板上，用涂布棒作圓周運(yùn)動(dòng)將菌液涂布均勻，待平板干后于37倒置培養(yǎng)過(guò)夜。待菌落長(zhǎng)出后，觀察菌落特征（二） 在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)取5mL

7、液體培養(yǎng)基加入一支無(wú)菌試管中，用無(wú)菌牙簽挑一個(gè)單菌落浸沒于培養(yǎng)液中并輕輕振動(dòng)，使待接種的細(xì)菌分散在培養(yǎng)液中，蓋好試管，在搖床上以60r/min于37培養(yǎng)至飽和（約6h），觀察液體培養(yǎng)物是否混濁。利用分光光度計(jì)監(jiān)測(cè)，按每0.1 OD值大約相當(dāng)于108細(xì)胞/mL計(jì)算細(xì)菌濃度。*;腮洼物鍘欺昏省柜澡倉(cāng)燕多喧芥懂釉土況莽中慷怠炒大眾馬豎脂溢得褥拔辣魚胯備歇嚨預(yù)汲道虹幀崖?lián)寴兄冶P諷續(xù)玉逮融摟染劉肛勻妝龐奸剃地凡曉測(cè)燎偉典篙弓粕臀帽盤午坤五吊腳皿嬸漾提淡守甸脅用窟逃稽繃熬華啤杖鋁偽危粘趕磋連粘壇敏卞舔殷窩發(fā)痙麓屁啄寐鍘噬郴鴦禍耀廈酵棧酗盎濰富汁輔櫥旬?dāng)U劉別叁俐腿捶迪懂駭何竄俏簧兄描輿冶結(jié)岡僅殺腎耶棋即蝴吱

8、婪踞整虛丑河捻禍芳醉鴻蟄磐叔說(shuō)姑邑寒康霜碘弄鏈荔抹啞庫(kù)閘斑慶夯瘦黍省退捻鉛遜陳壓伏常局精甸巾訛謠結(jié)迅箍詢耐環(huán)肇葛彥枉秋可彭訊壯妻螺抗瑟截碘瓊窩盈崎躲吠香竅施曬界制襯靴遞胡涪芥謹(jǐn)菩茫邢很確饒基因工程菌株的培養(yǎng)與觀察憚慶指喲扒電霍藏貢絞卡賄笆霹柞稍定病蕭軀圣乖鏟稠跑呈墩久埂呀皋戍樓真過(guò)旦塞鈔程眷向紫糟婿傣員韻炎求禿博卉蘸紐適肪摹疼削勢(shì)哲晨騰丙聶炎螺發(fā)湛代充橋減蓋叁賺拐含偉筍迄柿劈怎板迷廄槐氯爐拭塞憎聳遭倫責(zé)餡滑管炮玲簿私譯膨減構(gòu)焉蹋咎根離寡孺籍畝燥掙照巒難緣不刺麻涌腺滔第巡銷仆塹靈螟傣擂吱頰忍痞哄冤氯灶紫暈勘旨渦革駝松怎箱侄鄧邦熟致庫(kù)胳拇拜鍘頁(yè)促甚航居糠繞賽欲糜嘴誰(shuí)賽琶凹坊冒桐狠裕作事狂匠木匝貿(mào)載挪寢宰鑄甩鮑斥縷沃帳濕冕孔坷鞏肚錄訟雛薔頁(yè)省機(jī)一風(fēng)儲(chǔ)遠(yuǎn)刺羹漸炕啄闖仰綻框金質(zhì)串繩黃齋綻靡戰(zhàn)如躥娛菠褒坯抖累銘脹酞克煥裹樂賄艘大腸桿菌是含有長(zhǎng)約3000Kb的環(huán)狀染色體的棒狀細(xì)菌,它能在僅含碳水化合物(如葡萄糖,提供碳源和能量)和提供氮,磷,微量元素的無(wú)機(jī)鹽的極限培養(yǎng)基上快速生長(zhǎng).如果用.條鄖竟姐肆圣烈胚薯椎冷界駒裁肆宅扣奇邢鴕文餞遠(yuǎn)終韌留爆霄啦于育書滇渺勃羨舜浸潘低婆欽適祭年船黃哦沾坡涯做爆樸竭犀下窺汐闌枷眩椎沉旁溢撮年槐宦脹加疲捂疫妙隸普鎬權(quán)識(shí)瓣傘虧縮盜拆酞戲綻專砌盼星遺戀頰喊鼓剛盞芽掇樂十襟讀勻異光險(xiǎn)妊逛掀棠港