蛋白質(zhì)化學1氨基酸

1、會計學1蛋白質(zhì)化學蛋白質(zhì)化學1氨基酸氨基酸1.1.了解蛋白質(zhì)對生物體的重要意義。了解蛋白質(zhì)對生物體的重要意義。2.2.了解蛋白質(zhì)的分類，掌握蛋白質(zhì)元素組成的了解蛋白質(zhì)的分類，掌握蛋白質(zhì)元素組成的 特點。特點。3.3.掌握蛋白質(zhì)的基本構(gòu)成單體：氨基酸的結(jié)構(gòu)掌握蛋白質(zhì)的基本構(gòu)成單體：氨基酸的結(jié)構(gòu) 特點，從各氨基酸的結(jié)構(gòu)特點上理解氨基酸特點，從各氨基酸的結(jié)構(gòu)特點上理解氨基酸 的分類。的分類。4.4.掌握氨基酸的理化性質(zhì)，重點掌握兩性電離掌握氨基酸的理化性質(zhì)，重點掌握兩性電離 與等電點含義、茚三酮反應(yīng)及其應(yīng)用。與等電點含義、茚三酮反應(yīng)及其應(yīng)用。5.5.掌握蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的概念；了解蛋白質(zhì)一掌握蛋白質(zhì)一

2、級結(jié)構(gòu)的概念；了解蛋白質(zhì)一 級結(jié)構(gòu)的測定方法與思路，學會分析簡單多級結(jié)構(gòu)的測定方法與思路，學會分析簡單多 肽的氨基酸順序。肽的氨基酸順序。6.6.理解并掌握蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的概念；二級結(jié)理解并掌握蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的概念；二級結(jié) 構(gòu)的基本類型：構(gòu)的基本類型：-螺旋及螺旋及-折疊的結(jié)構(gòu)折疊的結(jié)構(gòu) 特點；了解幾種常見纖維狀蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特特點；了解幾種常見纖維狀蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特 性；了解超二級結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)域的概念。性；了解超二級結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)域的概念。7.7.了解蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)、四級結(jié)構(gòu)的概念及穩(wěn)了解蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)、四級結(jié)構(gòu)的概念及穩(wěn) 定因素。定因素。8.8.充分理解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系；從核糖充分理解蛋白質(zhì)結(jié)

3、構(gòu)與功能的關(guān)系；從核糖 核酸酶的變性與復(fù)性實驗理解一級結(jié)構(gòu)與空核酸酶的變性與復(fù)性實驗理解一級結(jié)構(gòu)與空 間結(jié)構(gòu)的關(guān)系；以細胞色素間結(jié)構(gòu)的關(guān)系；以細胞色素C C等為例充分理解等為例充分理解 一級結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)生物學功能的關(guān)系；從血一級結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)生物學功能的關(guān)系；從血 紅蛋白與肌紅蛋白的結(jié)構(gòu)特性理解蛋白質(zhì)空紅蛋白與肌紅蛋白的結(jié)構(gòu)特性理解蛋白質(zhì)空 間結(jié)構(gòu)與生物學功能的關(guān)系。間結(jié)構(gòu)與生物學功能的關(guān)系。9.9.掌握蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)：膠體性質(zhì)、兩性電掌握蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)：膠體性質(zhì)、兩性電 離與等電點、沉淀作用、變性作用以及這些離與等電點、沉淀作用、變性作用以及這些 性質(zhì)的生理意義及實踐意義。性質(zhì)的生理意義及

4、實踐意義。10.10.了解蛋白質(zhì)分離提純的常用方法及基本原理了解蛋白質(zhì)分離提純的常用方法及基本原理。( (一一) ) 蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ) 生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)是除水以外，機體生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)是除水以外，機體組織中最多的組分，占人體干重的組織中最多的組分，占人體干重的45%45%，占細菌干重的占細菌干重的505070%70% 。1.1.作為生物催化劑：作為生物催化劑：在體內(nèi)催化各種物質(zhì)代謝反應(yīng)的在體內(nèi)催化各種物質(zhì)代謝反應(yīng)的酶幾乎都是蛋白質(zhì)。酶幾乎都是蛋白質(zhì)。2.2.調(diào)節(jié)代謝反應(yīng)：調(diào)節(jié)代謝反應(yīng)：一些激素是蛋白質(zhì)或肽，如胰島素一些激素是蛋白質(zhì)或肽，如胰島素、生長素。、生

5、長素。3.3.運輸載體：運輸載體：如紅細胞中運輸如紅細胞中運輸O O2 2、COCO2 2要靠要靠Hb(HemoglobinHb(Hemoglobin血紅蛋白血紅蛋白) )、運輸脂類物質(zhì)的是載脂、運輸脂類物質(zhì)的是載脂蛋白、運鐵蛋白等轉(zhuǎn)運蛋白或叫載體蛋白。蛋白、運鐵蛋白等轉(zhuǎn)運蛋白或叫載體蛋白。4.4.參與機體的運動：參與機體的運動：如心跳、胃腸蠕動等，依靠與肌如心跳、胃腸蠕動等，依靠與肌肉收縮有關(guān)的蛋白質(zhì)來實現(xiàn)，如肌球蛋白、肌動蛋白肉收縮有關(guān)的蛋白質(zhì)來實現(xiàn)，如肌球蛋白、肌動蛋白。5.5.參與機體的防御：參與機體的防御： 機體抵抗外來侵害的防御機能，靠機體抵抗外來侵害的防御機能，靠抗體，抗體也稱免

6、疫球蛋白，是蛋白質(zhì)。抗體，抗體也稱免疫球蛋白，是蛋白質(zhì)。6.6.接受傳遞信息：接受傳遞信息：如口腔中的味覺蛋白、視網(wǎng)膜中的視如口腔中的味覺蛋白、視網(wǎng)膜中的視覺蛋白。覺蛋白。7.7.調(diào)節(jié)或控制細胞的生長、分化、遺傳信息的表達。調(diào)節(jié)或控制細胞的生長、分化、遺傳信息的表達。8.8.其它：其它：如雞蛋清蛋白、牛奶中的酪蛋白是營養(yǎng)和儲如雞蛋清蛋白、牛奶中的酪蛋白是營養(yǎng)和儲存蛋白；膠原蛋白、纖維蛋白等屬于結(jié)構(gòu)蛋白。還有甜存蛋白；膠原蛋白、纖維蛋白等屬于結(jié)構(gòu)蛋白。還有甜味蛋白、毒素蛋白等都具有特異的生物學功能。味蛋白、毒素蛋白等都具有特異的生物學功能。 所以，我們不難理解，為什么說所以，我們不難理解，為什么

7、說沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。1.1.根據(jù)分子形狀分：根據(jù)分子形狀分：球狀蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì)球狀蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì)2.2.根據(jù)功能分：根據(jù)功能分：活性蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。活性蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。3.3.根據(jù)組成分：根據(jù)組成分：（1 1）簡單蛋白質(zhì)：清蛋白、球蛋白、谷蛋白、）簡單蛋白質(zhì)：清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶谷蛋白、組蛋白、精蛋白、硬蛋白。醇溶谷蛋白、組蛋白、精蛋白、硬蛋白。（2 2）結(jié)合蛋白質(zhì)：色素蛋白、金屬蛋白、磷蛋）結(jié)合蛋白質(zhì)：色素蛋白、金屬蛋白、磷蛋白、核蛋白、脂蛋白、糖蛋白。白、核蛋白、脂蛋白、糖蛋白。4.4.根據(jù)營養(yǎng)價值分：根據(jù)營養(yǎng)價值分：完全蛋白質(zhì)、不完全

8、蛋白質(zhì)完全蛋白質(zhì)、不完全蛋白質(zhì)。三. 蛋白質(zhì)的元素組成 蛋白質(zhì)是有機化合物，離不開蛋白質(zhì)是有機化合物，離不開C C、H H、O O三種元素，還含有三種元素，還含有N N、P P、S S、金屬元素、金屬元素等。等。 含量含量% % ： 505055 655 67 207 2023 1523 1517 0.317 0.33 3 微量或無微量或無 元素組成元素組成 ： C H O C H O N N S S 其它其它 蛋白質(zhì)中蛋白質(zhì)中N N是特征元素，且含量恒定，為是特征元素，且含量恒定，為16%16%左右左右 ，即，即1616克氮克氮/100/100克蛋白質(zhì)，故克蛋白質(zhì)，故可以用可以用定氮法定氮法

9、測量蛋白質(zhì)含量，即：每測量蛋白質(zhì)含量，即：每100100克蛋白質(zhì)含氮克蛋白質(zhì)含氮1616克，克，100/16=6.25100/16=6.25克蛋克蛋白質(zhì)含白質(zhì)含氮氮1 1克。所以，克。所以，每克樣品含氮量每克樣品含氮量6.256.25100=100100=100克樣品蛋白質(zhì)含量（克克樣品蛋白質(zhì)含量（克% %）。 有些蛋白質(zhì)含有有些蛋白質(zhì)含有其他微量元素其他微量元素：P P、FeFe、CuCu、MnMn、ZnZn、CoCo、MoMo、I I 等。等。 四.蛋白質(zhì)的大小與分子量 一. 蛋白質(zhì)的水解1.1.酸水解酸水解 條件條件：5 51010倍的倍的20%20%的鹽酸煮沸回流的鹽酸煮沸回流1616

10、2424小時小時，或加壓于，或加壓于120120水解水解2 2小時。小時。 優(yōu)點優(yōu)點：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，終產(chǎn)物為：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，終產(chǎn)物為L-L-氨基酸，產(chǎn)物單一，無消旋現(xiàn)象。氨基酸，產(chǎn)物單一，無消旋現(xiàn)象。 缺點缺點：色氨酸破壞，并產(chǎn)生一種黑色的物質(zhì)：腐：色氨酸破壞，并產(chǎn)生一種黑色的物質(zhì)：腐黑質(zhì)，水解液呈黑色。黑質(zhì)，水解液呈黑色。2. 2. 堿水解堿水解條件條件：4mol/L Ba(OH)4mol/L Ba(OH)2 2或或6mol/L NaOH6mol/L NaOH煮沸煮沸6 6小時。小時。優(yōu)點優(yōu)點：水解徹底，色氨酸不被破壞，水解液清亮。：水解徹底，色氨酸不被破壞，水解液清

11、亮。缺點缺點：產(chǎn)生消旋產(chǎn)物，破壞的氨基酸多，一般很少使用。：產(chǎn)生消旋產(chǎn)物，破壞的氨基酸多，一般很少使用。3. 3. 蛋白酶水解蛋白酶水解條件條件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常溫：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常溫37374040， pHpH值值5 58 8 。優(yōu)點優(yōu)點：氨基酸不被破壞，不發(fā)生消旋現(xiàn)象。：氨基酸不被破壞，不發(fā)生消旋現(xiàn)象。缺點缺點：水解不完全，中間產(chǎn)物多。：水解不完全，中間產(chǎn)物多。 蛋白質(zhì)酸堿水解常用于蛋白質(zhì)的組成分析，而酶水解蛋白質(zhì)酸堿水解常用于蛋白質(zhì)的組成分析，而酶水解用于制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。用于制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。二、蛋白質(zhì)分子的基本組成單位氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)通式：（一

12、）氨基酸的結(jié)構(gòu)通式：1 1、構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸均、構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸均為為L-L-氨基酸。氨基酸。2 2、除、除R R為為H H（甘氨酸）外，（甘氨酸）外，其余氨基酸均具有旋光性。其余氨基酸均具有旋光性。3 3、各種氨基酸的區(qū)別在于、各種氨基酸的區(qū)別在于側(cè)基側(cè)基R R基上?；?。 從氨基酸的結(jié)構(gòu)通式可以看出從氨基酸的結(jié)構(gòu)通式可以看出：H（二）氨基酸的構(gòu)型：（二）氨基酸的構(gòu)型： 構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸除甘氨酸外除甘氨酸外，均，均含有含有-碳原子，在空間各原子有碳原子，在空間各原子有兩種排兩種排列方式列方式：L-L-構(gòu)型與構(gòu)型與D-D-構(gòu)型，它們的關(guān)系就構(gòu)型，它們的關(guān)系就像左右手的關(guān)

13、系，互為像左右手的關(guān)系，互為鏡像關(guān)系鏡像關(guān)系，下圖以，下圖以丙氨酸為例：丙氨酸為例： （三）氨基酸的結(jié)構(gòu)與分類（三）氨基酸的結(jié)構(gòu)與分類1 1、按氨基酸分子中羧基與氨基的數(shù)目分：、按氨基酸分子中羧基與氨基的數(shù)目分： （1 1）酸性氨基酸酸性氨基酸：一氨基二羧基氨基酸，有：天冬氨酸、谷氨酸、：一氨基二羧基氨基酸，有：天冬氨酸、谷氨酸、（2 2）堿性氨基酸堿性氨基酸：二氨基一羧基氨基酸：二氨基一羧基氨基酸 ，有：賴氨酸、精氨酸、組氨酸，有：賴氨酸、精氨酸、組氨酸（3 3）中性氨基酸中性氨基酸：一氨基一羧基氨基酸，有：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮：一氨基一羧基氨基酸，有：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、

14、異亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸。、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸。2 2、按側(cè)基、按側(cè)基R R基的結(jié)構(gòu)特點分：基的結(jié)構(gòu)特點分： （1 1）脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸（2 2）芳香族氨基酸芳香族氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸（3 3）雜環(huán)氨基酸雜環(huán)氨基酸：脯氨酸、組氨酸：脯氨酸、組氨酸3 3、按側(cè)基、按側(cè)基R R基與水的關(guān)系分：基與水的關(guān)系分： （1 1）非極性氨基酸非極性氨基酸：有甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫：有

15、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸。氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸。（2 2）極性不帶電氨基酸極性不帶電氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸。：天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸。（3 3）極性帶電氨基酸極性帶電氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸。：天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸。4 4、按氨基酸是否能在人體內(nèi)合成分：、按氨基酸是否能在人體內(nèi)合成分： （1 1）必需氨基酸必需氨基酸：指人體內(nèi)不能合成的氨基酸，必須從食物中攝取，有八種：賴：指人體內(nèi)不能合成的氨基酸，必須從食物中攝取，有八種

16、：賴氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸。氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸。（2 2）非必需氨基酸非必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成的氨基酸。有十種。：指人體內(nèi)可以合成的氨基酸。有十種。（3 3）半必需氨基酸半必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成但合成量不能滿足人體需要（特別是嬰幼：指人體內(nèi)可以合成但合成量不能滿足人體需要（特別是嬰幼兒時期）的氨基酸，有兩種：組氨酸、精氨酸。兒時期）的氨基酸，有兩種：組氨酸、精氨酸。 二十種氨基酸的名稱和結(jié)構(gòu)如圖所示二十種氨基酸的名稱和結(jié)構(gòu)如圖所示: :注：二十種氨基酸的結(jié)構(gòu)特點注：二十種氨基酸的結(jié)構(gòu)特點支鏈

17、氨基酸：支鏈氨基酸：纈氨酸、亮氨酸，異亮氨酸纈氨酸、亮氨酸，異亮氨酸含羥基的氨基酸：含羥基的氨基酸：絲氨酸、蘇氨酸絲氨酸、蘇氨酸含硫的氨基酸：含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巰基）、半胱氨酸（含巰基）、 甲硫氨酸（含硫甲基）甲硫氨酸（含硫甲基）含苯環(huán)的氨基酸：含苯環(huán)的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸含胍基的氨基酸：含胍基的氨基酸：精氨酸精氨酸含咪唑基的氨基酸：含咪唑基的氨基酸：組氨酸組氨酸亞氨基酸：亞氨基酸：脯氨酸脯氨酸含酰胺的氨基酸：含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺天冬酰胺、谷氨酰胺含吲哚基的氨基酸：含吲哚基的氨基酸：色氨酸色氨酸含含-氨基的氨基酸：氨基的氨基酸：賴氨酸賴

18、氨酸（四）蛋白質(zhì)中不常見的氨基酸（四）蛋白質(zhì)中不常見的氨基酸羥羥- -脯氨酸、羥脯氨酸、羥- -賴氨酸、賴氨酸、r-r-羧基谷氨酸、羧基谷氨酸、6-6-氮氮- -甲基賴氨酸甲基賴氨酸（五）非蛋白氨基酸（五）非蛋白氨基酸 鳥氨酸、胍氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、鳥氨酸、胍氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、-丙氨酸、丙氨酸、-氨基丁酸等氨基丁酸等三.氨基酸的理化性質(zhì)（一）物理性質(zhì)（一）物理性質(zhì)1.1.形態(tài)：形態(tài)：均為白色結(jié)晶或粉末，不同氨基酸的晶型結(jié)構(gòu)不同。均為白色結(jié)晶或粉末，不同氨基酸的晶型結(jié)構(gòu)不同。2.2.溶解性：溶解性：一般都溶于水，不溶或微溶于醇，不溶于丙酮，在稀酸和稀堿中一般都溶于水，不溶或微溶

19、于醇，不溶于丙酮，在稀酸和稀堿中溶解性好。溶解性好。3.3.熔點：熔點：氨基酸的熔點一般都比較高，一般都大于氨基酸的熔點一般都比較高，一般都大于200200，超過熔點以上氨，超過熔點以上氨基酸分解產(chǎn)生胺和二氧化碳。基酸分解產(chǎn)生胺和二氧化碳。 4.4.旋光性：旋光性：除甘氨酸外的氨基酸均有旋光性，含手性碳。除甘氨酸外的氨基酸均有旋光性，含手性碳。5.5.光吸收：光吸收：氨基酸在可見光范圍內(nèi)無光吸收，在近紫外區(qū)含苯環(huán)氨基酸有光氨基酸在可見光范圍內(nèi)無光吸收，在近紫外區(qū)含苯環(huán)氨基酸有光的吸收。的吸收。（二）化學性質(zhì)（二）化學性質(zhì)1.1.氨基酸的兩性電離及等電點：氨基酸的兩性電離及等電點： 氨基酸既含有

20、氨基，可接受氨基酸既含有氨基，可接受H H+ +，又含有羧基，可電離出，又含有羧基，可電離出H H+ +，所以氨基酸具，所以氨基酸具有有酸堿兩性性質(zhì)酸堿兩性性質(zhì)。通常情況下，氨基酸以。通常情況下，氨基酸以兩性離子的形式兩性離子的形式存在，如下圖所示存在，如下圖所示： 從上圖可知：氨基酸在從上圖可知：氨基酸在酸性環(huán)境酸性環(huán)境中，主要以中，主要以陽離子陽離子的形式存在，在的形式存在，在堿性環(huán)境堿性環(huán)境中，主要以中，主要以陰離子陰離子的形式存在。在的形式存在。在某一某一pHpH環(huán)境環(huán)境下，以下，以兩性離子兩性離子（兼性離子）的形（兼性離子）的形式存在。該式存在。該pHpH稱為該氨基酸的稱為該氨基酸的

21、等電點等電點。所以氨基酸的。所以氨基酸的等電點等電點可以定義為：可以定義為：氨基酸氨基酸所帶正負電荷相等時的溶液所帶正負電荷相等時的溶液pHpH。 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被堿氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被堿滴定，應(yīng)該具有兩性電離的性質(zhì)，現(xiàn)以滴定，應(yīng)該具有兩性電離的性質(zhì)，現(xiàn)以甘氨甘氨酸酸為例來說明氨基酸兩性電離的特點。為例來說明氨基酸兩性電離的特點。左圖是左圖是甘氨酸的電離酸甘氨酸的電離酸堿滴定曲線堿滴定曲線，從左向右是，從左向右是用用NaOHNaOH滴定的曲線，溶液滴定的曲線，溶液的的pHpH由小到大逐漸升高；由小到大逐漸升高；從右向左是用從右向左是用鹽酸鹽酸滴定的滴定的曲線，溶

22、液的曲線，溶液的pHpH由大到小由大到小逐漸降低。曲線中從左向逐漸降低。曲線中從左向右右第一個拐點第一個拐點是氨基酸羧是氨基酸羧基解離基解離50%50%的狀態(tài)，的狀態(tài)，第二第二個拐點個拐點是氨基酸的等電點是氨基酸的等電點，第三個拐點第三個拐點是氨基酸氨是氨基酸氨基解離基解離50%50%的狀態(tài)。的狀態(tài)。 通過通過氨基酸的滴定曲線氨基酸的滴定曲線，可用下列，可用下列 Henderson-Henderson-Hasselbalch Hasselbalch 方程求出方程求出各解離基團的解離常數(shù)（各解離基團的解離常數(shù)（pKpK）： 根據(jù)根據(jù)pKpK可求出氨基酸的等電點，可由其等電可求出氨基酸的等電點，可

23、由其等電點左右兩個點左右兩個pKpK，值的算術(shù)平均值求出。值的算術(shù)平均值求出。中性氨基酸：中性氨基酸： pI=(pKpK1 1 + pKpK2 2)/2pKpK1 1為為-羧基的解羧基的解 離常數(shù)離常數(shù), ,pKpK2 2為為-氨基的解氨基的解 離常數(shù)。離常數(shù)。氨基酸等電點的計算氨基酸等電點的計算二十種氨基酸的二十種氨基酸的pKpK，及等電點：及等電點： 2.2.由由-氨基參加的反應(yīng)：氨基參加的反應(yīng)： (1) (1) 與亞硝酸反應(yīng)：與亞硝酸反應(yīng)：放出氮氣，氮氣的一半來自氨基放出氮氣，氮氣的一半來自氨基氮，一半來自亞硝酸，在通常情況下測定生成的氮氣氮，一半來自亞硝酸，在通常情況下測定生成的氮氣的

24、體積量可計算氨基酸的量，此反應(yīng)可用于測定蛋白的體積量可計算氨基酸的量，此反應(yīng)可用于測定蛋白質(zhì)的水解程度。質(zhì)的水解程度。(2) (2) 與甲醛的反應(yīng)：與甲醛的反應(yīng)：用過量的中性甲醛與氨基酸反應(yīng)，可游離出氫離子，然后用用過量的中性甲醛與氨基酸反應(yīng)，可游離出氫離子，然后用NaOHNaOH滴定，從消耗的堿量可以計算出氨基酸的含量。此法稱為間接滴定法。滴定，從消耗的堿量可以計算出氨基酸的含量。此法稱為間接滴定法。(3) (3) 與與2,4-2,4-二硝基氟苯二硝基氟苯（2,4-DNFB2,4-DNFB）的反應(yīng)（）的反應(yīng)（SangerSanger反應(yīng)）：反應(yīng)）： 生成黃色的二硝基苯生成黃色的二硝基苯- -

25、氨基酸衍生物。氨基酸衍生物。(4) (4) 與苯異硫氰酸酯與苯異硫氰酸酯（PITCPITC）反應(yīng)（）反應(yīng)（EdmanEdman反應(yīng)）：生成苯乙反應(yīng)）：生成苯乙 內(nèi)酰硫脲內(nèi)酰硫脲- -氨基酸。氨基酸。(5) (5) 與丹磺酰氯與丹磺酰氯（DNS-ClDNS-Cl）的反應(yīng)：生成熒光物質(zhì)）的反應(yīng)：生成熒光物質(zhì)DNS-DNS-氨基酸。氨基酸。（3 3）、）、(4)(4)、(5)(5)反應(yīng)用于反應(yīng)用于蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)的N-N-末端末端的測定。的測定。3.-3.-羧基參加的反應(yīng)：羧基參加的反應(yīng)： (1)(1)與堿反應(yīng)成鹽與堿反應(yīng)成鹽 (2)(2)與醇反應(yīng)成酯與醇反應(yīng)成酯 (3)(3)與酰化試劑反應(yīng)成酰氯與酰

26、化試劑反應(yīng)成酰氯 4.- 4.-氨基與氨基與-羧基共同參加的反應(yīng)羧基共同參加的反應(yīng)-與茚三酮的反應(yīng)與茚三酮的反應(yīng)：除脯氨酸與羥脯氨酸外，可與其它氨基酸生成藍紫色化合物。脯氨酸與羥脯氨酸為除脯氨酸與羥脯氨酸外，可與其它氨基酸生成藍紫色化合物。脯氨酸與羥脯氨酸為黃色化合物。黃色化合物。 反應(yīng)要點反應(yīng)要點A.該反應(yīng)由該反應(yīng)由NH2與與COOH共同參與，共同參與， -氨基酸氨基酸特有特有B.茚三酮是強氧化劑茚三酮是強氧化劑C.該反應(yīng)非常靈敏，可在該反應(yīng)非常靈敏，可在570nm測定吸光值測定吸光值D. 測定范圍：測定范圍：0.550g/ml E.脯氨酸與茚三酮直接生成黃色物質(zhì)，脯氨酸與茚三酮直接生成黃色

27、物質(zhì)，440nm測定（不釋放測定（不釋放NH3） ，谷氨，谷氨酰胺和天門冬酰胺與茚三酮直接生成棕色物質(zhì)。酰胺和天門冬酰胺與茚三酮直接生成棕色物質(zhì)。應(yīng)用：應(yīng)用：A.氨基酸定量分析（先用層析法分離）氨基酸定量分析（先用層析法分離）B.氨基酸自動分析儀：氨基酸自動分析儀： 用陽離子交換樹脂，將樣品中的氨基酸分離，自動定性定量，記錄結(jié)果用陽離子交換樹脂，將樣品中的氨基酸分離，自動定性定量，記錄結(jié)果。 4.- 4.-氨基與氨基與-羧基共同參加的反應(yīng)羧基共同參加的反應(yīng)-與茚三酮的反應(yīng)與茚三酮的反應(yīng) 4.- 4.-氨基與氨基與-羧基共同參加的反應(yīng)羧基共同參加的反應(yīng)-成肽反應(yīng)成肽反應(yīng) (1)(1) Millo

28、nMillon反應(yīng)：反應(yīng)：檢測檢測TyrTyr或含或含TyrTyr的蛋白質(zhì)的反應(yīng)。的蛋白質(zhì)的反應(yīng)。 MillonMillon試劑：試劑：汞的硝酸鹽與亞硝酸鹽溶液。汞的硝酸鹽與亞硝酸鹽溶液。 產(chǎn)物：產(chǎn)物：紅色的化合物。紅色的化合物。(2)(2) FolinFolin反應(yīng)：反應(yīng)：檢測檢測TyrTyr或含或含TyrTyr的蛋白質(zhì)的反應(yīng)。的蛋白質(zhì)的反應(yīng)。 FolinFolin試劑：試劑：磷鉬酸、磷鎢酸混合溶液。磷鉬酸、磷鎢酸混合溶液。 產(chǎn)物：產(chǎn)物：藍色的鉬藍、鎢藍。藍色的鉬藍、鎢藍。(3)(3) 坂口反應(yīng)：坂口反應(yīng)：檢測檢測ArgArg或含或含ArgArg的蛋白質(zhì)的反應(yīng)。的蛋白質(zhì)的反應(yīng)。 坂口試劑：坂

29、口試劑：萘酚的堿性次溴酸鈉溶液。萘酚的堿性次溴酸鈉溶液。 產(chǎn)物：產(chǎn)物：磚紅色的沉淀。磚紅色的沉淀。5.5.側(cè)鏈反應(yīng)（顏色反應(yīng)）：側(cè)鏈反應(yīng)（顏色反應(yīng)）：(4)(4) PaulyPauly反應(yīng)：反應(yīng)：檢測檢測HisHis、TyrTyr及含及含HisHis、TyrTyr蛋白質(zhì)的反應(yīng)。蛋白質(zhì)的反應(yīng)。試劑：試劑：對氨基苯磺酸鹽酸溶液、亞硝酸鈉、碳酸鈉混合溶液對氨基苯磺酸鹽酸溶液、亞硝酸鈉、碳酸鈉混合溶液產(chǎn)物：產(chǎn)物：橘紅色的化合物。橘紅色的化合物。(5) (5) 乙醛酸的反應(yīng)：乙醛酸的反應(yīng)：檢測檢測TrpTrp或含或含TrpTrp蛋白質(zhì)的反應(yīng)。蛋白質(zhì)的反應(yīng)。 當當TrpTrp與乙醛酸和濃硫酸在試管中疊加時

30、，產(chǎn)生分層現(xiàn)象，界面出現(xiàn)紫色環(huán)。與乙醛酸和濃硫酸在試管中疊加時，產(chǎn)生分層現(xiàn)象，界面出現(xiàn)紫色環(huán)。(6) (6) CysCys的反應(yīng)：的反應(yīng)：CysCys或含或含CysCys蛋白質(zhì)與亞硝基亞鐵氰酸鈉在稀氨的溶液中，產(chǎn)生一蛋白質(zhì)與亞硝基亞鐵氰酸鈉在稀氨的溶液中，產(chǎn)生一種紅色的化合物。種紅色的化合物。四.氨基酸的分離測定（一）層析法（一）層析法 層析法是利用被分離樣品混合物中各組分層析法是利用被分離樣品混合物中各組分的的化學性質(zhì)化學性質(zhì)的差異，使各組分以不同程度分布的差異，使各組分以不同程度分布在兩個相中，這兩個相一個為在兩個相中，這兩個相一個為固定相固定相，另一個，另一個為為流動相流動相。當流動相流

31、進固定相時，由于各組。當流動相流進固定相時，由于各組分在兩相中的分配情況不同或電荷分布不同或分在兩相中的分配情況不同或電荷分布不同或離子親和力不同等，而以不同的速度前進，從離子親和力不同等，而以不同的速度前進，從而達到分離的目的。而達到分離的目的。 常見的層析法有：常見的層析法有： 濾紙層析濾紙層析、薄層層析、離子交換層析薄層層析、離子交換層析、親和層析親和層析（二）電泳法（二）電泳法 電泳是指帶電的顆粒在電場中向著以其顆粒所電泳是指帶電的顆粒在電場中向著以其顆粒所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象?！灸康呐c要求目的與要求】1.1 1.1 蛋白質(zhì)通論蛋白質(zhì)通論1.2 1.2 蛋白質(zhì)的分子組成蛋白質(zhì)的分子組成氨基酸氨基酸4 4、按氨基酸是否能在人體內(nèi)合成分：、按氨基酸是否能在人體內(nèi)合成分： （1 1）必需氨基酸必需氨基酸：指人體內(nèi)不能合成的氨基酸，必須從食物中攝取，有八種：賴：指人體內(nèi)不能合成的氨基酸，必須從食物中攝取，有八種：賴氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸。氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸。（2 2）非必需氨基酸非必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成的氨基酸。有十種。：指人體內(nèi)可