遺傳學(xué)果蠅雜交.

1、黒腹果蠅雜交驗(yàn)證遺傳學(xué)規(guī)律實(shí)驗(yàn)陸巖冰陸巖冰 羅雪萍羅雪萍 王志敏王志敏 王培王培 楊磊楊磊 鄭濤鄭濤 扎西卓瑪扎西卓瑪實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握果蠅雜交技術(shù)2理解并驗(yàn)證遺傳學(xué)定律原理： （1）分離定律 （2）自由組合定律 （3）版型遺傳規(guī)律 （4）連鎖互換定律 3記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果掌握實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理方法4學(xué)習(xí)并掌握重組值求法以及遺傳學(xué)圖的繪制方法實(shí)驗(yàn)原理1相互區(qū)分的相對(duì)性狀都是有相對(duì)的等位基因決定的2在雜交實(shí)驗(yàn)中，配子形成和受精時(shí)染色體的行為跟基因的行為是一致的： （1）分離定律：分離定律：在生物的體細(xì)胞中，控制同一性狀的遺傳因子成對(duì)存在，相融合；在形成配子的減數(shù)分裂過程中，同源染色體及其上的等位基

2、因彼此分離，分離后的遺傳因子分別進(jìn)入不同的配子中，隨配子遺傳給后代 （2）伴性遺傳規(guī)伴性遺傳規(guī)：位于性染色體上的基因的遺傳行為與性別有關(guān)； 實(shí)驗(yàn)原理（3自由組合定律：自由組合定律：在形成配子時(shí)，非同源染色體上及其上的非等位基因間自由組合，即一對(duì)染色體上的等位基因與另一對(duì)染色體上的等位基因的分離或組合是彼此間互不干擾的，各自獨(dú)立地分配到配子中去；（4）連鎖互換定律連鎖互換定律：配子形成過程中，位于同一染色體上的基因是連鎖在一起，作為一個(gè)單位進(jìn)行傳遞，稱為連鎖律。在生殖細(xì)胞形成時(shí)，一對(duì)同源染色體上的不同對(duì)等位基因之間可以發(fā)生交換，稱為交換律或互換律。在減數(shù)分裂第一次分裂中期，位于赤道班上的同源染色

3、 體的非姐妹染色單之間發(fā)生片段交換，導(dǎo)致連鎖群的等 位基因發(fā)生一定的重組，重組率越大，交換律越高。實(shí)驗(yàn)原理1重組值的大小與基因間距離有關(guān)，依次可確定相關(guān)連鎖基因在染色體上的位置與排列順序，從而做出基因連鎖圖。2果蠅生活史短，繁育率高，飼養(yǎng)簡(jiǎn)便，并且染色體數(shù)目少，相對(duì)性狀容易區(qū)分，故選用果蠅作為本次的遺傳學(xué)研究材料3本次試驗(yàn)選取了果蠅的體色、眼色、翅形，剛毛四個(gè)形狀為研究對(duì)象，其中體色為檀黑色是由位于第染色體上的隱性基因e控制；白眼、短翅、卷剛毛三個(gè)形狀則分別由位于X染色體上的w、m、sn3控制實(shí)驗(yàn)材料與儀器 果蠅品種果蠅品種：黒腹果蠅6品種（灰體、短翅、白眼，卷剛毛）黒腹果蠅e品種（檀黑體、長(zhǎng)

4、翅、紅眼、直剛毛） 實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)材料：玉米粉、瓊脂粉、蔗糖、酵母粉、丙酸、水、乙醚 實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材：培養(yǎng)瓶、燒杯、玻璃棒、量筒、標(biāo)簽、稱量紙、移液槍、毛筆、紗布、膠頭滴管、脫脂棉、棉線、剪刀、電子天平、電爐、恒溫培養(yǎng)箱、雙筒解剖鏡實(shí)驗(yàn)步驟一制備果蠅培養(yǎng)基二處女蠅的收集三果蠅的雜交與培養(yǎng)四F1代果蠅的性狀觀察與統(tǒng)計(jì)五F1代處女蠅的收集六F1代果蠅的雜交與培養(yǎng)七F2代果蠅形狀的觀察與統(tǒng)計(jì)（一）制備果蠅培養(yǎng)基（一）制備果蠅培養(yǎng)基配方：A: 糖6.2克，加瓊脂0.62克，在加水38毫 升，煮沸溶解。 B: 玉米粉8.25克，加水38毫升，加熱攪拌均 勻 將A、B混合加熱成糊狀（大約混合后體積減少約

5、1/5）后，從電爐上取下，冷卻至5060 時(shí)，加入0.7克酵母粉，攪拌均勻后，加入0.5毫升丙酸攪拌。分裝置培養(yǎng)瓶中。（二）處女蠅的收集（二）處女蠅的收集1.選取瓶中已有卵和幼蟲的培養(yǎng)瓶，將其中的老果蠅全部轉(zhuǎn)移除去，只留下卵和幼蟲。2.收集自轉(zhuǎn)移后8小時(shí)之內(nèi)瓶中羽化出來的新果蠅。3.收集的果蠅用乙醚麻醉后用放大鏡在百瓷板上將果蠅雌雄分開，這時(shí)的雌果蠅即為處女蠅。 本次實(shí)驗(yàn)共需收集6號(hào)品種處女蠅與e品種處女蠅各5只，分別放至已加入培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，放至25恒溫培養(yǎng)箱中，并在瓶身分別做好標(biāo)簽如下： 6品種處女蠅（品種處女蠅（P） e品種處女蠅（品種處女蠅（P） （灰、短、白、卷）（灰、短、白、卷）

6、 (檀黑、長(zhǎng)、紅、直）檀黑、長(zhǎng)、紅、直） + m w sn3 e + + + 1號(hào)瓶號(hào)瓶 2號(hào)瓶號(hào)瓶（三）果蠅的雜交與培養(yǎng)（三）果蠅的雜交與培養(yǎng) 本次試驗(yàn)分為正交與反交兩組同時(shí)進(jìn)行正交組：正交組：6品種品種 e品種品種反交組：反交組：6品種品種 e品種品種A.正交步驟如下： 1.從6品種原始培養(yǎng)瓶中果蠅轉(zhuǎn)移出麻醉，在白紙板上用放大鏡觀察仔 細(xì)挑出5只雄果蠅。 2.將上述挑出的果蠅移入2號(hào)瓶中，并將標(biāo)簽如下： 三號(hào)瓶 （ 正交） 6品種（+ m w sn3/+YYY） e品種（e + + +/e+） 月日 生技1102班 第六小組 覆蓋于原標(biāo)簽上，之后放入25恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) B.反交步驟如下：

7、 1.從e品種原始培養(yǎng)瓶中果蠅轉(zhuǎn)移出麻醉，在白紙板上用放 大鏡觀察仔細(xì)挑出5只雄果蠅。 2.將上述挑出的果蠅移入1號(hào)瓶中，并將標(biāo)簽如下： 四號(hào)瓶 （ 反交） e品種（e+/eYYY） 6品種（+m w sn3/+m w sn3） 月日 生技1102班 第六小組 覆蓋于原標(biāo)簽上，之后放入25恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)C.每?jī)商煊^察一次果蠅，當(dāng)三號(hào)(四號(hào))培養(yǎng)瓶中蛹變黑時(shí)，將親本轉(zhuǎn)移出培養(yǎng)瓶。（四）（四）F1代果蠅的性狀觀察與統(tǒng)計(jì)代果蠅的性狀觀察與統(tǒng)計(jì)：1.成蟲轉(zhuǎn)移出之后，當(dāng)三號(hào)(四號(hào))培養(yǎng)瓶中再次出現(xiàn)成蟲時(shí)，每天統(tǒng)計(jì)果蠅形狀并填寫表格如下，并當(dāng)天統(tǒng)計(jì)完成后，轉(zhuǎn)移出培養(yǎng)瓶，直至培養(yǎng)瓶中再無(wú)成蟲產(chǎn)生。表型表型

8、正交后代數(shù)目正交后代數(shù)目 合計(jì)灰長(zhǎng)紅卷xxxxxxxx總計(jì)F1代果蠅性狀、數(shù)量觀察統(tǒng)計(jì)表代果蠅性狀、數(shù)量觀察統(tǒng)計(jì)表 正正(反反)交交 xx月月xx日日（五）（五）F1代處女蠅與雄果蠅的收集代處女蠅與雄果蠅的收集 在開始統(tǒng)計(jì)F1代果蠅性狀數(shù)量起第三天，開始收集F1代處女蠅，累計(jì)收集正(反)交F1代處女蠅10只，雄果蠅10只，分裝置兩只以裝培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并貼上標(biāo)簽： 五(七)號(hào)瓶 六(八)號(hào)瓶 F1代處女蠅 正(反)交 F1代雄果蠅 正(反)交 第六小組 第六小組（六）（六）F1代果蠅的雜交與培養(yǎng)代果蠅的雜交與培養(yǎng) 將六(八)號(hào)瓶中的雄果蠅轉(zhuǎn)移到五(七)號(hào)培養(yǎng)瓶中，比用標(biāo)簽如下，覆蓋于五(七)

9、號(hào)培養(yǎng)瓶原標(biāo)簽，并置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待培養(yǎng)瓶中蛹變黑時(shí)，將成蟲轉(zhuǎn)移出培養(yǎng)瓶。 九號(hào)瓶 十號(hào)瓶 F1代正交組 F1代反交 組 灰長(zhǎng)紅直灰長(zhǎng)紅直 灰長(zhǎng)紅直灰短白卷 (e+/+mwsn3e+/+YYY) (+mwsn3/e+mwsn3/eYYY) xx月xx日 xx月xx日 第六小組 第六小組（七）（七）F2代果蠅性狀與數(shù)量統(tǒng)計(jì)代果蠅性狀與數(shù)量統(tǒng)計(jì) 與F1代果蠅的方法相同實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的總合分析與實(shí)驗(yàn)預(yù)期 分離定律的驗(yàn)證分離定律的驗(yàn)證 6品種與e品種進(jìn)行雜交僅關(guān)注其體色性狀，灰色對(duì)黑色為顯性,可分析其遺傳樹狀圖如下： 正反 P 檀 黑體() 灰體 () e/e +/+ F1 灰體 +/e F2 灰體

10、檀黑體 1+/+,2+/e e/e 比例 3 ： 1通過實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，運(yùn)用2檢驗(yàn)，來驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否符合分離定律 反交 P 灰體() 檀黑體 () +/+ e/e F1 灰體 +/e F2 灰體 檀黑體 1+/+,2+/e e/e 比例 3 ： 1 伴性遺傳規(guī)律的驗(yàn)證伴性遺傳規(guī)律的驗(yàn)證以果蠅的眼色作為研究對(duì)象，決定果蠅眼色的基因w位于果蠅的X染色體上，故應(yīng)符合伴性遺傳規(guī)律，分析其遺傳樹狀圖如下通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用2檢驗(yàn)驗(yàn)證是否符合伴性遺傳規(guī)律 正交 P 紅眼() 白眼 () +/+ w/Y F1 紅眼 +/w、+/Y F2 紅眼 白眼 1+/+,1+/w,1+/Y 1w/w 比例 3 ; 1

11、 反交 P 白眼() 紅眼 () w/w +/Y F1 紅眼、 白眼 1+/w,1w/Y F2 紅眼 白眼 1+/w,1+/y 1w/w,1w/Y 比例 1 ： 1 自由組合定律的驗(yàn)證自由組合定律的驗(yàn)證選取6品種與e品種的體色與眼色為研究對(duì)象，決定果蠅體色的基因位于第染色體上，決定果蠅眼色的基因?yàn)榕cx染色體上，故兩基因在遺傳過程中互不影響，應(yīng)符合自由組合定律。分析其遺傳圖譜如下： 正交正交 P 檀黑紅() 灰白() e+/e+ +w/+Y F1 灰紅 1+w/e+，1e+/+Y F2 灰紅 灰白 黑紅 黑白1+/+,1+/+w 1+w /+Y 1e+/ew 1e+/+Y,1e+/+w 1+w

12、/eY 1e+/ey 1ew /ey 2+/e+,2+/eY 1ew/=Y 1ew/e+ 9 ： 3 ： 3 ： 1 其中正交灰眼：黑眼=3:1，紅眼：白眼=3:1,反交灰眼：黑眼=3:1，紅眼:白眼=1:1眼色性狀符合分離定律，眼色遺傳符合伴性遺傳規(guī)律，兩者在遺傳過程中互不干擾，符合自由組合定率，通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用2檢驗(yàn)來驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)是否符合自由組合定律 反反交交 P 灰白() 檀黑紅() +w/+w e+/eY F1 灰紅 灰白 1+w/e+，1+w/eY F2 灰紅 黑紅 灰白 黑白 1+/+w,1+/ew 1e+/ew 2+w/ew,1+w/+w 1+/+Y,1e+/+w 1e+

13、/ey 1+w/eY,1+W/+y 1ew /ey 1e+/+Y+,+1+/eY 1ew/+Y 1ew/ew 6 ： 2 ： 6 ： 2 連鎖互換定律的驗(yàn)證連鎖互換定律的驗(yàn)證 以果蠅的眼色和翅形這兩對(duì)性狀為研究對(duì)象，決定果蠅這兩對(duì)性狀的基因均位于果蠅的X染色體上，故應(yīng)符合連鎖互換定律,其遺傳理論分析如下： 由于在果蠅遺傳過程中，雄性果蠅完全連鎖，所以只能通過計(jì)算雌果蠅的重組值來對(duì)連鎖互換定律進(jìn)行驗(yàn)證 正交組中，由于伴性遺傳的影響，在F2代中對(duì)與眼色與翅形這兩對(duì)相對(duì)性狀來說雌果蠅只有一種表現(xiàn)型，故不能用來對(duì)連鎖互換定律進(jìn)行驗(yàn)證，具體分析如下。 正交租F1代基因型為：+/YY 和 +/mw 其自交過程中產(chǎn)生+,YY兩種配子 通過連鎖互換規(guī)律產(chǎn)+m,+w,+,mw四種配子，雌雄配子組合產(chǎn)生后代F2的雌性基因型為+/+m,+/+w,+/+,+/mw,其表現(xiàn)性均為長(zhǎng)翅紅眼。故不能通過F2代的表現(xiàn)性統(tǒng)計(jì)出F1代不同配子的數(shù)目，故不能用正交組數(shù)據(jù)驗(yàn)證連鎖互換定律。 故此實(shí)驗(yàn)