細胞工程簡答、論述

1、簡答 1.何為單倍體的培養(yǎng)答:主要是指花藥培養(yǎng),即將花藥在工人培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),從小孢子直接發(fā)育成胚狀體.然后長成單倍體植株;或通過愈傷組織誘導分化出芽與根,最終長成植株.2.植物組織培養(yǎng)基的主要成份包括哪些？植物細胞培養(yǎng)基的組成？答：無機鹽類、碳源、植物生長激素、有機氮源、天然物質(zhì)、支持物質(zhì)3.植物單細胞的制備方法答：機械法、酶解法與愈傷組織誘導法4.植物單細胞培養(yǎng)方法？答：平板培養(yǎng)發(fā)、看護培養(yǎng)法與飼養(yǎng)層培養(yǎng)、液體靜置培養(yǎng)法、細胞懸浮培養(yǎng)法。5.植物細胞的保存方法？答：繼代培養(yǎng)保存法、低溫保存法與冰凍保存法。6.植物懸浮培養(yǎng)細胞的同步方法？答：物理方法：提及選擇法、冷處理法 化學方法：饑餓法

2、、抑制法、有絲分裂法7.植物細胞的特性？答：比微生物細胞大；以非均相集合細胞團存在；生長周期長。8.植物細胞懸浮培養(yǎng)生長與增殖有哪幾個階段？答：延遲期、對數(shù)生長期、直線生長期、減緩期、靜止期與衰亡期。9.影響植物細胞培養(yǎng)的因素？答：細胞遺傳性；培養(yǎng)的環(huán)境條件、PH、通氣、營養(yǎng)鹽、前體、生長調(diào)節(jié)劑、攪拌與混合、光照10.怎樣建立植物細胞的兩相培養(yǎng)？/植物細胞的兩相培養(yǎng)有哪兩相？答：在培養(yǎng)體系中加入水溶性或脂溶性的有機物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培養(yǎng)體系形成上下兩相，細胞在水相中生長，合成的次生代謝物轉移到有機相中。11.簡述（植物細胞）懸浮培養(yǎng)具有的優(yōu)點？答：1）可以增加培養(yǎng)細胞與培養(yǎng)液的

3、接觸面，促進營養(yǎng)的吸收 2）可帶走培養(yǎng)物產(chǎn)生的有害代謝產(chǎn)物，避免高濃度集聚對細胞的傷害。 3）保證良好的單混合狀態(tài)，從而獲得良好的氣體傳遞效果。12.簡述原生質(zhì)體的特征？答：原生質(zhì)體無細胞壁障礙，可以方便的進行有關遺傳操作，并可以對膜、細胞器進行基礎研究；具有全能性，并能進行人工培養(yǎng)發(fā)育成完整植株；原生質(zhì)體適合進行誘導融合形成雜種細胞。13.植物原生質(zhì)體的鑒定與活力測定方法？答：植物原生質(zhì)體的鑒定：1）低滲爆破法；2）熒光染色法。 植物原生質(zhì)體活力測定方法：1）染色法2）胞質(zhì)環(huán)流法3）滲透壓變化；4）氧電極法。14.簡述利用培養(yǎng)的植物細胞誘發(fā)與篩選突變體的優(yōu)點？答：通過植物組織或細胞培養(yǎng)可以獲

4、得大量的可供選擇的各種變異的群體，這些群體的生長容易控制；在很短時間內(nèi)完成突變體的篩選；在變異的細胞中選擇突變體有利于在分子水平上研究突變機制。15.簡述由外植體或單個細胞形成愈傷組織需經(jīng)過的三個步驟？答：啟動期（或誘導期）：主要是指細胞或原生質(zhì)體準備分裂的時期，需要采用合適的誘導劑； 分裂期：即開始分裂并不斷增生子細胞的過程； 分化期：細胞內(nèi)部開始發(fā)生一系列形態(tài)與生理上的變化，分化出形態(tài)與功能不同的細胞16.簡述用于培養(yǎng)與其他細胞工程研究的原生質(zhì)體的主要來源?答：主要來自于各種植物的葉片/根尖;也有來自于花粉,尤其是適合制備單倍體的原生質(zhì)體;也可以從組織培養(yǎng)產(chǎn)生的愈傷組織中獲得.17.體外培

5、養(yǎng)的動物細胞根據(jù)其生長方式,可分為哪幾種類型?答：體外培養(yǎng)的動物細胞根據(jù)其生長方式,可分為貼附型細胞/上皮型細胞/游走型細胞/多形型細胞與非貼附型細胞.18.動物細胞培養(yǎng)的特點?答：1)細胞之間連接復雜2)無細胞壁,比微生物細胞大;3)倍增時間長4)需氧量少5)以聚集體形式存在;6)原代細胞繁殖50袋左右即退化死亡.19.動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)辦法?答：被稱為微量培養(yǎng)法,是現(xiàn)代體外培養(yǎng)技術最為常用的方法之一.具體做法是將培養(yǎng)細胞接種在培養(yǎng)板的孔內(nèi),然后在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng).最常用的培養(yǎng)板有6/24/96孔板,后者最為常用.一般都是一次性使用20.體外培養(yǎng)動物細胞生長的增殖有哪幾個階段?/動物細胞

6、培養(yǎng)過程分哪幾個階段?答：1)原代培養(yǎng)期 2|)傳代期 4)衰退期21.動物細胞體外培養(yǎng)的常用培養(yǎng)基與細胞消化液有幾類?答：常用培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基 細胞消化液：胰蛋白酶溶液與乙二胺四乙酸鈉溶液22.動物細胞培養(yǎng)中貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點？答：1）比較容易更換培養(yǎng)基 2）容易采用灌注培養(yǎng)，從而達到提高細胞密度的目的 3）更有效的表達同一產(chǎn)品 4）可以方便的調(diào)節(jié)培養(yǎng)液與細胞比例 5）易于觀察細胞生長狀況23.無血清培養(yǎng)基根據(jù)其成分分為哪三類？答：1）不含蛋白質(zhì)，只有成分已知的小分子物質(zhì)與帶微粒元素的聚合物，價格便宜，適用于某些確立的細胞系。 2）含有大分子物質(zhì)，使用的細胞株較多，但

7、成本較高，大多無血清培養(yǎng)基屬于此類。 3）所含成分不完全清楚，以成分簡單、成本低而適用于大規(guī)模生產(chǎn)使用。24.動物細胞培養(yǎng)必須的溶液？答：平衡鹽水、培養(yǎng)基pH調(diào)整液、細胞消化液、抗生素溶液25.動物細胞之間的連接形式有哪些？答：緊密連接、間隙連接、隔壁連接、中間連接、橋粒連接26.在細胞分離技術中，常采用的細胞分離技術有哪些？答：1）梯度沉降分離法：主要是根據(jù)細胞大小不同分離細胞。 2）等密度沉降分離法：主要是根據(jù)細胞密度不同來分離細胞。 3）流式細胞儀分離法：主要是根據(jù)細胞免疫熒光法使熒光體與細胞膜表面抗原結合，利用特殊儀器進行檢測分離不同種類的細胞。27.常用抗體檢測方法有哪些？答：1)E

8、LISA 用于可溶性抗原(蛋白質(zhì))、細胞核病毒等抗體檢測. 2)RLA 用于可溶性抗原、細胞抗體檢測。 3)FACS 用于檢查細胞表面抗原的抗體檢測。 4)IFA 用于細胞核病毒抗體的檢測。28.胚胎干細胞的鑒定方法？答：堿性磷酸酶染色；特異性表面抗原（SSEA-1）免疫熒光標記29.簡述制備單克隆抗體的過程答：包括動物免疫、細胞融合、選擇雜交交瘤、檢測抗體、雜交瘤細胞克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產(chǎn)30.單克隆抗體大量生產(chǎn)的方法有哪兩種？答：1）體外使用旋轉培養(yǎng)管大量培養(yǎng)雜交瘤細胞，從上清中獲取單克隆抗體。但此法產(chǎn)量低。一般含量為10-60微克、毫升 2）體內(nèi)接種雜交瘤細胞，制備血清。此

9、法產(chǎn)量較高，是目前常使用的方法。一般含量為1-20毫克/毫升。31.簡述ES細胞體外生長的特點？答：ES細胞在體外分化抑制培養(yǎng)中，呈現(xiàn)克隆狀生長，細胞緊密聚集，形似鳥巢，細胞界限不清晰?？寺≈車袝r會有單個ES細胞核分化的扁平狀上皮細胞。E細胞增殖迅速，一般沒18-24小時分裂增殖一次。32.何為胚胎移植？答：指一母畜發(fā)情排卵并經(jīng)過配種后，在一定時間內(nèi)從其生殖道取出受精卵或胚胎，或者體外培養(yǎng)受精卵發(fā)育至囊胚期，然后把它們移植到另外一頭與供體同時發(fā)情排卵、但沒有經(jīng)配種的母畜的相應部位。這個來自供體的胚胎能夠在受體的子宮著床，并繼續(xù)生長發(fā)育，最后產(chǎn)下供體的后代。33.簡述單倍體的優(yōu)點答：1）由于單

10、倍體只有一套染色體，染色體上的每個基因都能出現(xiàn)相應的性狀，所以極易發(fā)現(xiàn)所產(chǎn)生的突變，尤其是隱形突變，所以，單倍體是研究基因或基因劑量效應，進行染色體遺傳分析的理想實驗材料。 2）由于通過人工方法使單倍體的染色體加倍就可以獲得純合二倍體，因此在育種上具有極高價值。34.簡述細胞重組的集中方式。答：1）胞質(zhì)體與完整細胞重組形成胞質(zhì)雜種 2）為細胞與完整細胞重組形成微細胞異核體 3）胞質(zhì)體與核體重新組合形成重組細胞35.在細胞分離技術中，根據(jù)細胞哪些特性將其分離？答：1）細胞大小 5）細胞中的一個或多個成份的熒光強弱 2）細胞密度 6）細胞對其他介質(zhì)的吸附作用3）細胞便面電荷 4）細胞便面標志 36

11、.常用哺乳動物細胞轉染的方法有哪兩種？答：1）暫時轉染：質(zhì)粒在宿主細胞中不必停留很長時間，DNA被轉錄成mRNA，隨后翻譯成蛋白，并不進入細胞基因組。 2）永久性轉染：反轉錄病毒載體法可以產(chǎn)生永久有效的轉染。37.簡述外源基因?qū)胧荏w細胞所采用點穿孔法的概念、特點及過程？答：這種方法是利用脈沖電場提高細胞膜的通透性，在細胞膜上形成納米級的微孔，從而使外源DNA轉移至細胞中。 特點： 具有簡單、高效，因而廣泛應用于培養(yǎng)細胞的基因轉移。 具體操作過程是將受體細胞懸浮于含有待轉化DNA的溶液中，在含有上述懸浮的電擊池兩端試駕短暫的脈沖電場，是細胞膜產(chǎn)生細小的空洞達到增加通透性的效果。此時，外源DNA

12、片段能不經(jīng)過胞飲作用就能直接進入細胞質(zhì)。38.簡述胚胎工程隊家畜繁殖的意義答：1）可發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力 2）可促進家畜改良的速度 3）可保存遺傳資源 4）作為胚胎操作的基礎39.簡述細胞融合幾個主要步驟答：細胞融合主要經(jīng)過了兩原生質(zhì)體或細胞相互靠近、細胞橋形成、胞質(zhì)滲透、細胞核融合幾個步驟。40.簡述轉基因動物的意義答：利用此技術在建立人類疾病動物模型、加速動物育種、研究真核生物基因表達調(diào)控機制，一級在哺乳動物特意組織系統(tǒng)內(nèi)生產(chǎn)藥用蛋白等方面具有重要的意義。41.用于動物細胞與組織培養(yǎng)的生物反應器應具備哪些要求？答：1)混合系統(tǒng)設計應能均勻、溫與的混合狀態(tài)、剪切力小、保證良好的傳質(zhì)效果。

13、2）反應器內(nèi)空間利用率高，選用合適的載體系統(tǒng)與材料 3）能嚴格保證無菌環(huán)境 4）能夠方便、快速的實現(xiàn)培養(yǎng)液的連續(xù)添加、樣品的采樣與觀察42.簡述細胞融合技術中生物法中的病毒促使細胞融合的主要步驟答：1）兩個原生質(zhì)體活細胞在病毒聯(lián)接作用下彼此靠近 2）通過病毒與原生質(zhì)體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間想與滲透。胞質(zhì)相互滲透 3）兩個原生質(zhì)體的細胞核相互融合，融為一體。 4）進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種子細胞。43.胚胎工程采用的技術主要有哪些？答：體外受精、胚胎移植、胚胎分割與融合、胚胎性別鑒定、胚胎冷凍技術與基因?qū)搿Ｆ渲星皟烧呤桥咛スこ痰暮诵募夹g。44.簡述多倍體產(chǎn)生的途徑

14、有哪些？答：原種或雜種所形成的未減數(shù)配子的受精結合。 原種或雜種的合子的染色體加倍45.簡述胚胎細胞核移植法過程答：將沒有著床的早期胚胎分散成單個的細胞球，在電流的作用下，是單個細胞與去除染色體的沒有受精的卵母細胞融合。發(fā)育成胚胎后，移入受體妊娠產(chǎn)仔。原則上一個早期胚胎有多少個細胞，通過這種方法就可以克隆出多少個個體。還可將細胞反復克隆出更多的胚胎，產(chǎn)生更多克隆動物。46.簡述利用原生質(zhì)體融合培育新植物的過程及意義答：原生質(zhì)體的培養(yǎng)一般經(jīng)過細胞壁再生、細胞分裂成細胞團、愈傷組織、分化成芽與根、完整植株這幾個過程。從而可實現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖，而且當與其它改變遺傳的技術相結合，就有可能實現(xiàn)新品種

15、的培育。47.什么是染色體工程？有何意義？答：是人們按照一定的設計，有計劃的消減、添加或代換同種或異種染色體，從而達到定向改變遺傳性與選育新品種的一種技術。染色體工程在培育抗病新品種上有重要意義，而且也是基因定位與染色體轉移等基礎研究的有效手段。由于染色體數(shù)目上的變異，尤其是染色體組數(shù)目上的改變在動物新品種培育方面也具有重要意義。48.轉然后細胞是如何進行鑒定的？答：可以設計含有抗性藥性基因的外源DNA載體，然后通過選擇性培養(yǎng)基進行轉染細胞的篩選。除此之外，還可以通過提取染色細胞的DNA，以適當限制性內(nèi)切酶酶切后進行Southern轉移分析，檢測細胞中是否有被轉移的外源基因。49.進行胚胎移植

16、時，是如何使受體與供體同步發(fā)情的？答：1）母體加孕酮激素類藥物，并在血液中保持一定量的水平，造成人為的黃體期，使卵巢內(nèi)卵泡的發(fā)育與成熟受到抑制。在卵泡發(fā)育狀態(tài)處于同一時期時，解除人工抑制，墓處即可同步發(fā)情排卵。 2）通過藥物認為的控制黃體技能，促使黃體溶解是孕酮水平下降，導致卵泡發(fā)育一致，母畜就可以比較同期的發(fā)情排卵了。50.簡述基因轉移的生物學方法中反轉錄病毒載體的特點。答：是一種傳染性病毒，含有RNA遺傳物質(zhì)，可將非病毒基因轉移至分裂細胞，（2分）感染進細胞的RNA反轉錄產(chǎn)生DNA互補鏈，該DNA又可作為合成第二條DNA鏈的模板。這兩條DNA鏈可滲入受體細胞的基因組DNA中。（2分）之后，

17、病毒利用宿主細胞的酶體系自行轉錄與復制，從而可以是病毒拷貝基因組穩(wěn)定的進入宿主細胞。反轉錄病毒載體可以獲得穩(wěn)定、有效的轉染。可用于不易轉化的細胞或原代培養(yǎng)細胞。51.簡述胚胎干細胞核移植法。答：將胚胎或胎兒的原始生殖細胞經(jīng)過抑制分代培養(yǎng)后，細胞與單細胞數(shù)量增多，（1分）因此，每個細胞仍然具有細胞全能性而發(fā)育成個體的能力，這稱為胚胎干細胞系。（2分）在利用細胞核移植技術可以比胚胎核移植產(chǎn)生更多的動物個體。目前僅成功克隆出成體鼠。52.何為脂質(zhì)體包埋？答：脂質(zhì)體為人工膜泡，可作為體內(nèi)外物質(zhì)傳送的載體。將需轉移的外源DNA或RNA包埋于脂質(zhì)體內(nèi)，由于脂質(zhì)體具有磷脂雙層結構，與細胞膜類似。因此可以與受

18、體細胞膜融合，從而將外源DNA轉入宿主細胞。53.簡述梯度沉降分離法答：根據(jù)細胞大小不同分離細胞。細胞在單位重力的作用下，在密度介質(zhì)或在低離心力作用下通過梯度密度溶液沉降。由于細胞大小不同，沉降速度不同，細胞大，沉降快。54.簡述染色體在數(shù)目與結構變異時可能出現(xiàn)的幾種情況答：結構變異；染色體易位；染色體缺失；染色體倒拉；染色體重復。 數(shù)目變異：正被踢；非整倍體。55.簡述染色體分離時采用的流式細胞分類器法的原理答：利用不同染色體上，基因堿基不同對DNA特異性染料結合量的不同，從而產(chǎn)生不同熒光波長，這樣就可以將相同的染色體收集在一起而分離。56.何謂胚胎性別鑒定？胚胎性別鑒別采用的方法主要有哪些

19、？答：胚胎性別鑒別是通過細胞生物學與分子生物學的方法識別胚胎性狀，有效地控制動物后代的性別比例，從而達到提高畜禽生產(chǎn)力的一種技術。一般有細胞遺傳分析、X染色體關聯(lián)酶測定、胚胎發(fā)育速率的差異性分析、雄性特異性抗原檢測、Y染色體特異性DNA探針雜交等。57.簡述細胞核移植的定義與主要技術要點答：細胞核移植是一種利用顯微操作技術，將一種動物的細胞核移入同種動物的去核成熟卵內(nèi)的精細技術。主要包供體與受體的準備、去卵膜與卵核、供體細胞制備、移核等步驟。58.簡述單倍體育種的優(yōu)越性有哪些？答：1）可以克服雜種分離的困難，縮短雜交育種時間，一般只需一年就可迅速獲得自交系，兩年就可獲得純系。 2）大大提高選育

20、效率3）能克服遠緣雜交的不孕性，創(chuàng)造出新物種。論述題1.試說明細胞工程的主要研究內(nèi)容?答: 細胞工程涉及的領域相當廣泛,根據(jù)研究對象不同,可以將細胞工程分為微生物細胞工程、植物細胞工程與動物細胞工程三大類。就其技術范圍而言，既有長期以來得到了廣泛引用的動物細胞與組織培養(yǎng)技術，又有近20年來才發(fā)展起來的細胞融合技術、細胞拆合技術、染色體導入技術、胚胎與細胞核移植技術，更有與基因工程技術結合以基因轉移技術為核心的細胞遺傳工程。從研究水平來劃分，細胞工程可分為細胞水平、組織水平、細胞器水平與基因水平等幾個不同研究層次。具體內(nèi)容如下：動植物細胞與組織培養(yǎng)細胞融合染色體工程胚胎工程細胞遺傳工程2.試綜述

21、細胞工程的重要應用？答: 1） 優(yōu)質(zhì)植物的快速繁殖2） 動物胚胎工程快速繁殖優(yōu)良、瀕危品種。3） 利用動、植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)活性產(chǎn)物、藥品4） 新型動植物品種的培育5） 供醫(yī)學器官修復或移植的組織工程6） 轉基因動植物的生物反應器工程7） 珍稀動植物資源的保存與保護8） 在遺傳學、發(fā)育學等領域的理論研究9） 在能源、環(huán)境保護等領域的應用3.請寫出細胞工程的定義？并試談細胞工程的重要應用？答: 細胞工程是指應用細胞生物學與分子生物學的方法，通過類似于工程學的步驟，在細胞整體水平或細胞器水平上，按照人們的意愿來改變細胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)以獲得新型生物或細胞產(chǎn)品的一門綜合性科學技術。應用:細胞工程利用基因工

22、程的一些技術實現(xiàn)轉基因動物的制備，實現(xiàn)轉基因生物反應器、人體器官的動物來源培養(yǎng)、基因重組細胞的培養(yǎng)等。細胞工程技術為微生物工程、生物化學工程提供經(jīng)過遺傳性改良的微生物、融合細胞、篩選出穩(wěn)定的動植物細胞系等培養(yǎng)對象。細胞工程可以通過國細胞融合、轉基因等技術改變生物的遺傳性狀或?qū)崿F(xiàn)新型生物的構建，這樣就為蛋白質(zhì)藥物或酶制劑生產(chǎn)提供可能的途徑。4.試寫出植物組織培養(yǎng)的分類及基本步驟？答: 分類：根據(jù)外植體不同，可分為植株培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)。 根據(jù)培養(yǎng)方式不同，可分為固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)。液體培養(yǎng)又可分為振蕩培養(yǎng)、旋轉培養(yǎng)與靜止培養(yǎng)。 基本步驟: 1) 培養(yǎng)材料的選擇 2) 培養(yǎng)材料的消毒 3)

23、制備外植體 4) 接種與培養(yǎng) 5) 根的誘導 6) 組織苗的聯(lián)苗移栽5.試說明為什么植物細胞工程成為植物新品種選育的重要技術手段?答: 與傳統(tǒng)大田育種相比,利用組織培養(yǎng)技術進行新品種選育具有效率高、周期短、純度高等優(yōu)點。 1、突變育種：所謂突變是指植物遺傳物質(zhì)DNA堿基數(shù)目的改變。突變可以由自然環(huán)境的改變而引起，也可由人為改變環(huán)境因素而引起。前者叫自發(fā)突變，后者稱誘發(fā)突變。誘發(fā)突變可以大大提高突變率。 2、原生質(zhì)體融合核細胞雜交：通過原生質(zhì)體融合與細胞雜交可以克服遠源有性雜交中的不親核性，提供新的核質(zhì)組合，從而獲得新物種。 3、花藥、花粉培養(yǎng)與單倍體植株：花藥培養(yǎng)因其取材培養(yǎng)的是植物雄性生殖器

24、官的一部分花藥而得名。由于單倍體植物沒有顯性基因的掩蓋作用，易于選擇，并能在很短時間內(nèi)獲得純合二倍體植株，因此在育種實踐中具有獨特的優(yōu)越性。6.植物細胞培養(yǎng)的意義并舉例說明其應用？答: 1） 植物細胞代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)在可控條件下生產(chǎn)，可提高產(chǎn)物產(chǎn)量，而且不受季節(jié)、地域等限制 2） 無菌條件下生產(chǎn)，排除病菌與害蟲的影響。 3） 可以通過特定的生物轉化途徑獲得均一的有效成分 4） 可以探索新的生物合成路線，獲得新產(chǎn)物。舉例：藥用代謝物生產(chǎn) 人參天然資源有限，而且人工栽培周期長，可以在生物反應器中懸浮培養(yǎng)人參細胞或毛狀根，從中生產(chǎn)人參皂苷。7.試述傳代培養(yǎng)技術的概念、關鍵與主要步驟？答: 當原代培養(yǎng)成

25、功后，細胞分裂增殖擴展成片，沾滿器皿表面。這是需要對其分離重新培養(yǎng)，這一操作過程稱之為傳代。根據(jù)細胞的特點，適度掌握細胞消化時間與選擇適宜的方法很關鍵。步驟如下：吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)舊的培養(yǎng)液；加入胰蛋白酶與EDTA混合液蓋滿瓶底；25min后檢查，如有細胞間隙變大或細胞間質(zhì)回縮現(xiàn)象。終止消化；吸出消化液，加入Hanks液，輕輕轉動一面細胞流失，洗去殘留的消化液。如果單用胰蛋白酶，可直接加入培養(yǎng)液；用吸管輕輕吹打瓶壁，使細胞脫落制成懸液，技術后記錄其濃度；重新接種培養(yǎng)。8.什么是干細胞？幾類干細胞分化功能有什么不同？干細胞培養(yǎng)有什么意義？答: 干細胞是一類具有自我更新與分化潛能的細胞。 從具有的分化功

26、能上講，干細胞可分為單能干細胞、多能干細胞、與全能干細胞。 意義：組織與器官修復 基因治療9.簡述基因?qū)胧荏w細胞的化學方法的主要原理與類型?答: 主要原理:改變細胞膜透性,增加DNA與細胞的吸附。類型： 1） DEAE-葡聚糖法：這是最早的動物轉染方法，主要是將外源DNA片段與DEAE葡聚糖等高分子碳水化合物混合，這樣DNA鏈上帶負電的磷酸骨架便被吸附于DEAE的正電荷基團上，從而形 成DNA大顆粒。后者粘附于受體細胞表面，并通過胞飲作用進入細胞內(nèi)。該方法的轉化率較低 2） 磷酸鈣DNA共沉淀法：這種方法是受二價金屬離子能促進細胞吸收外源DNA的啟發(fā)而發(fā)展 起來的。當核酸以磷酸鈣DNA共沉淀

27、的形式存在時，細胞攝取DNA的能力顯著加強。3） 脂質(zhì)體載體包埋法：脂質(zhì)體為人工膜泡，可作為體內(nèi)外物質(zhì)傳送的載體。將需要轉移的外源DNA或RNA包裹于脂質(zhì)體內(nèi)，由于脂質(zhì)體具有磷脂雙層結構，與細胞膜類似，因此可以與受體細胞膜融合，從而將外源DNA轉入宿主細胞。10.試說明動物細胞生物反應器的特點、類型及其應用？答:特點：剪切力??；空間利用率高；無菌；溫度、溶解氧、酸堿度與二氧化碳濃度控制；實現(xiàn)培養(yǎng)液的連續(xù)添加、樣品的采樣與觀察。類型：微載體式；中空纖維式；灌注培養(yǎng)式；旋轉壁式等應用：生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價值的酶、生長因子、疫苗、激素與抗體等。11.簡述不同轉基因生物反應器的特點比較？答: 微生物反應

28、器：1）優(yōu)點：可以利用發(fā)酵工程技術大規(guī)模生產(chǎn)；胞外活性物質(zhì)制備容易。2）不足：哺乳動物或人類的基因往往不能表達。有些表達了，卻沒有活性，需要進一步修飾；真核生物蛋白質(zhì)翻譯后加工的精確性有限；需要大型發(fā)酵設備與車間；細胞菌發(fā)酵常形成不溶聚合物，使下游加工成本增加。 植物反應器：1）優(yōu)點可大規(guī)模種植，上游成本較低。作為食物可省去下游加工步驟；轉基因植物自交后可得到穩(wěn)定遺傳的遺傳性狀；可利用植物細胞與細胞培養(yǎng)技術實現(xiàn)大量制備。2）不足：植物種植受季節(jié)、環(huán)境影響；需要專門的活性物質(zhì)分離設備與技術；植物細胞培養(yǎng)需要發(fā)酵罐等設備與技術支持，成本較高。 動物細胞反應器：1）優(yōu)點：易培養(yǎng)，實現(xiàn)大規(guī)模制備；通過

29、乳腺與血液制備活性物質(zhì)簡單易行；可以通過動物細胞培養(yǎng)實現(xiàn)大量制備。2）不足：細胞培養(yǎng)需要昂貴的培養(yǎng)基與設備；轉基因動物制備成本昂貴；轉基因動物易產(chǎn)生一些倫理問題。12.多倍體育種的技術方法有哪些？答: 1） 生物學方法主要包括利用胚乳培養(yǎng)、體細胞雜交等。 2） 物理學方法主要包括溫度激變、機械創(chuàng)傷、電離輻射、離心、水靜壓法與高鹽高減法。其中溫度激變法包括冷休克法與熱休克法兩種，該法廉價、易操作，是誘導動物細胞多倍體的常用手段，也適合大規(guī)模生產(chǎn)使用。水靜壓法，就是采用較高的水靜壓抑制第二極體的放出或第一次卵裂來產(chǎn)生多倍體，該法有誘導率高，處理時間短，對受精卵損失小、成活率高的特點。 3）化學方法

30、主要是利用一些化學物質(zhì)可阻止第二極體的排出或受精卵的有絲分裂而產(chǎn)生三倍體或四倍體，主要有細胞松弛素B與秋水仙素兩種化學試劑。13.動物細胞融合過程中，哪些因素影響其融合過程？答: 在動物細胞融合過程中，除促溶劑外，其他如細胞性質(zhì)、溫度、pH、離子強度及離子種類等均會影響細胞融合效率。1） 首先，親本細胞表面性質(zhì)影響較大，表面覆蓋絨毛而不規(guī)則者較易融合，而表面光滑者較難融合2） 細胞種類瑣，融合效果也不同，如腹水癌及株化細胞較易融合，而淋巴細胞或血球細胞幾乎不融合3） 細胞融合時需要適宜溫度與運動狀態(tài)4） 細胞融合過程中，通常耗氧量較大，缺氧時經(jīng)常不融合5） 有些細胞融合時需要Ca2+，否則不融

31、合，細胞蛋白質(zhì)也發(fā)生變化6） 最適合的pH為7.4-7.8之間，在此范圍之外，融合率均較低14.請述細胞破碎的方法有哪些種類？答: 1） 超聲波破碎法：原理是超聲波發(fā)生器產(chǎn)生高強度超聲信號，經(jīng)換能器傳至與其接觸的細胞溶液中，有聲波沖擊與振動產(chǎn)生的剪切力是細胞破碎，不足是破碎過程中會產(chǎn)熱，應該注意冷卻，有些生物大分子不宜采用。2） 反復凍融法：可使細胞溶液或組織細胞漿在超低溫冰箱或液氮罐內(nèi)凍結后，在37°C復溫融化,重復3-4次操作使細胞壁破碎.3） 化學裂解法:在細胞懸浮液中加入某些化學物質(zhì)如十二烷基硫酸鈉等實使細胞膜裂解.在使用該方法的同時經(jīng)常要輔助以一些機械的方法才能使細胞在短時間內(nèi)完全破碎,由于化學裂解劑會干擾分析,在細胞裂解后應注意清除化學裂解劑.4） 高速組織搗碎法:主要是借助高速使組織細胞被高速旋轉的葉片破碎,由于也會發(fā)熱,可能導致分離物的降解,因此不能時間過長,必要時可使用循環(huán)水冷卻. 15.簡述原核胚胎期顯微注射法的基本原理及主要步驟？答: 是通過顯微操作儀將外源基因直接用注射器注入受精卵，利用受精卵繁殖中DNA的復制過程，將外源基因整合到DNA中，在發(fā)育成轉基因動物。主要步驟如下：1）DNA的制備與純化2）動物的挑選、超排卵與取卵3）DNA的顯微注射4）卵的轉移5）轉基因動物的獲得16.簡述試管動物與胚胎移植的區(qū)別在何處？答: 試管動物是從供體獲