組織病理切片制備流程

1、組織病理切片制備流程組織病理切片按照制備方法的不同分為石蠟切片、冰凍切片與振動(dòng)切片。石蠟切片制備過程包括取材、固定、洗滌與脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日。冰凍切片（frozen section）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。制作過程不需要對(duì)組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)，避免組織細(xì)胞中可溶性物質(zhì)的分解，并能保存細(xì)胞形態(tài)的原。與石蠟切片相比，在抗原完整性的保存上有其不可取代的優(yōu)勢，尤其在免疫組化方面。因此冷凍切片也是脂肪染色、酶組織化學(xué)染色以及某些免疫組織化學(xué)染色與原位分子雜交的

2、理想制片方法。不足是組織細(xì)胞的形態(tài)略遜于石蠟切片。 振動(dòng)切片在文獻(xiàn)中討論較少。制備方法是采用的專用振動(dòng)切片機(jī)，利用刀片振動(dòng)原理，將新鮮的活體組織，直接固定在切片槽中切片。該方法能保持樣品活性與細(xì)胞良好形態(tài)，給免疫細(xì)胞化學(xué)研究及脊髓與腦薄片神經(jīng)生物學(xué)研究提供了良好條件，適合做組織電生理學(xué)等研究。 不同切片方法由于制作的工藝流程不同，所需的儀器設(shè)備與工具有差別。一、石蠟切片的制作根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道石蠟切片法包括取材、固定、洗滌與脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。1.固定用適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ航n新鮮材料，凝固或沉淀細(xì)胞與組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過程、防止細(xì)胞自溶

3、或組織變化，使組織硬化，盡可能保持活體時(shí)的結(jié)構(gòu)。固定時(shí)間從1小時(shí)至數(shù)天，通常為數(shù)小時(shí)至24小時(shí)。2.洗滌與脫水組織在固定后要把滲入里面的固定液洗去，否則留在組織中的固定液有的會(huì)妨礙染色，有的會(huì)產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶。固定后或洗滌后的組織內(nèi)充滿水分，如不除去水分就無法進(jìn)行以后的透明、浸蠟與包埋，因?yàn)橥该鲃┒鄶?shù)是苯類，苯類與石蠟均不能與水相融合，水分不脫盡，苯類不能浸入。因此，在透明、浸蠟前必須進(jìn)行脫水。脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入。常用用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。脫水步驟是：80%、90%、95%、100%各種濃度乙醇2小時(shí)，此過程可用脫水機(jī)自控完成。3.透明組織

4、脫水后，因乙醇不溶于石蠟，為使石蠟?zāi)芙虢M織塊，必須經(jīng)過一種既能與酒精相混合，又能溶解石蠟的溶劑的替代過程，通過這種溶劑的媒介作用替換出組織內(nèi)的酒精，而達(dá)到石蠟浸入組織塊的目的。材料塊在這類媒浸液中浸漬，出現(xiàn)透明狀態(tài)，此液即稱透明劑，透明劑浸漬過程稱透明。目前最好的透明劑是二甲苯。通常組織先經(jīng)純酒精與透明劑各半的混合液浸漬12小時(shí)，再轉(zhuǎn)入純透明劑中浸漬。4.浸蠟與包埋組織透明后，放入熔化的石蠟內(nèi)浸漬，使石蠟滲入組織同時(shí)取代組織內(nèi)的二甲苯，這個(gè)過程稱浸蠟。浸蠟用的石蠟熔點(diǎn)在56，浸蠟應(yīng)在高于石蠟熔點(diǎn)3左右的溫箱中進(jìn)行。將熔化好的石蠟倒入包埋框，用加溫的鑷子將浸蠟后的組織材料塊切面朝下放入，待蠟液

5、表層凝固即迅速冷卻，完全凝固后即做成含有組織塊的蠟塊。5.切片包埋好的蠟塊用刀片修整蠟塊成方形或者長方形，在切片機(jī)上切成一片接著一片的47um的蠟帶，用毛筆輕輕托起放在紙上。6. 展片、撈片與烤片展片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在4045的水面上，借水的張力與水的溫度，將略皺的蠟帶自然展平。撈片：待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中1/3與下1/3的中間，傾去載玻片上的余水。烤片：一般在60的溫箱內(nèi)烤片0.51小時(shí)左右，脫去溶化組織間隙的石蠟。7.切片脫蠟及水化干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進(jìn)行染色。如果脫蠟不干凈，切片不易著色或著色不勻，脫蠟用的二甲苯要經(jīng)常更換因此。因此H.E染色前還需用二甲苯脫蠟，再逐級(jí)經(jīng)梯度酒精脫苯、直至蒸餾水復(fù)水。8.染色蘇木精（Hematoxylin）與伊紅（曙紅，Eosin）染色法是組織學(xué)標(biāo)本及病理切片標(biāo)本的常規(guī)染色，簡稱HE染色。H.E染色后還需切片脫水、透明、封固處理。所需儀器設(shè)備：全自動(dòng)染色機(jī) 9.切片