芽孢桿菌常用培養(yǎng)基配方

1、芽抱桿菌常用培養(yǎng)基配方（按理說，該實(shí)驗的所有培養(yǎng)基都在這了，后紅字更為清楚些摘自百度）一、肉湯瓊脂培養(yǎng)基： 蛋白腺10g，牛肉膏15g , NACL15g,蒸 館水 1000ml，瓊脂 18g。調(diào)節(jié) PH7.2,0.1MPA20min 滅菌。如 果用液體做培養(yǎng)基，則去掉瓊脂即可。100 mL/組，其中20 mL 液體培養(yǎng)基/250 mLA中（內(nèi)裝玻璃珠10顆）；50 mL固體斜面 培養(yǎng)基分裝在試管中：5mL/支，10支。2、或是（J-瓊脂培養(yǎng)基： 胰蛋白腺5g,酵母膏15g,磷酸氫二鉀3g,葡萄糖2g,瓊脂20g,蒸館水1000ml。調(diào)節(jié)PH7.3 7.5Mpa 30min 滅菌。）二、過氧化

2、氫酶測定1、試劑：3-10%±氧化氫2、接種與培養(yǎng)：一般將測試菌種接種于肉湯瓊脂斜面上，30度下 培養(yǎng)1-2天。3、試驗方法：取一干凈載玻片，在上面加一滴3-10%的雙氧水，挑取1環(huán)1-2天的的菌苔，在雙氧水溶液中涂抹，如有氣泡出 現(xiàn)（O2）,作為過氧化氫酶陽性，無泡為陰性。也可以將過氧 化氫液直接加入斜面上，觀察氣泡的產(chǎn)生。三、需氧性測定1、培養(yǎng)基：酪素水解物20g,葡萄糖10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COON 娜 15g，蒸館水 1L。調(diào)節(jié)PH7.2,分裝試管，0.06Mpa, 30min滅菌，培養(yǎng)基不 擺斜面。2、接種與觀察：用一小環(huán)的肉湯菌液，

3、穿刺接種到上述培養(yǎng)基中(穿刺管底)，一般與30度培養(yǎng)3-7天觀察結(jié)果。若芽抱桿 菌在瓊脂柱表面生長為好氧菌，沿穿刺線生長則為厭氧菌。四、酪素水解(用于檢測不同種類的芽抱桿菌是否具有分解酪素的 特點(diǎn))1、 培養(yǎng)基(1) 脫脂牛奶制備 取新鮮牛奶，煮沸后去掉上層油脂，再經(jīng)離心 脫脂(3000r/min,10min )，除去上層油脂，即為脫脂牛奶。(2) 牛奶平板的制備 取50ml的脫脂牛奶放入一只三角瓶中，另外 稱1.5g瓊脂置于含有50ml蒸館水的另外3只三角瓶中，然后 將兩液分開滅菌，0.06Mpa-20min，帶冷至45-50攝氏度時， 速將兩液混勻倒平板，即為牛奶平板。將平板倒置過夜，使表

4、 面水分干燥。2、接種與觀察將測試菌種以三點(diǎn)法點(diǎn)接在牛奶平板上，一般于30度培養(yǎng)1,3,5,7和14天，如菌落周圍和下面呈透明，表明酪素已被分解。培養(yǎng)基1.1 可溶性淀粉 3g/L 蛋白月東 10g/L 酵母膏 3g/L KH2PO41.5g/L K2HP（42g/LMgSO0.1g/LPH7.4 7.6（富集用）1.2肉湯（NA培養(yǎng)基（宮養(yǎng)瓊脂）：蛋白月東10g/L牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.2 7.4 （保存計數(shù)或 分離純化用）營養(yǎng)瓊脂：麥芽汁培養(yǎng)基=1： 1混合使用，菌落不易擴(kuò)散，形態(tài)特征典型1.3 蛋白月東 10g/L 酵母膏 5g/L 葡萄糖 3.5g/L NaCl

5、5g/L K 2HPO0.5g/LMgSO3g/L MnSO4 25mg/LPH 7.2 7.4 （分離純化用）1.4產(chǎn)淀粉酶菌株篩選培養(yǎng)基：可溶性淀粉3-5g/L 蛋白月東10g/L牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L PH7.2 7.4 （用 于淀粉酶產(chǎn)生菌分離篩選）1.5廣蛋白酶菌株篩選培養(yǎng)基1.5.1酪素培養(yǎng)基： 2.1.5.1.1 葡萄糖 1g/L，酵母膏 1g/L，酪素 4-5g/L , K2HPO4g/L , KH2PO4 0.5g/L , MgSO4 0.1g/L 蒸僧水 1000ml,pH7.0-7.2。另：葡萄糖 0.5g/L，酪素 10g/L, NaCl 5g/L K2

6、HPO4 0.5g/L , KH2PO4 0.5g/L, 瓊脂 20g/LpH7.2-7.42.1.5.1.2 牛肉膏 3g/L 或酵母浸粉 5g/L 酪素 10g/L NaCl 4-5g/L PH7.2 7.4 先將酪素用少量2%a氧化鈉潤濕，玻棒攪動，再加適量的蒸僻水，在沸水浴中 加熱攪拌至完全溶解（10-15min ），補(bǔ)足1000mL蒸僻水，加入其他成分，調(diào) PH 分裝滅菌。2.1.5.1.3 酵母膏 0.05g/L 酪素 4g/L KH2PO4 0.36g/L Na 2HPO1.1g/L MgSO 4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO 4 0.002g/L CaCl2

7、 0.002g/L ZnCl 2 0.014g/LpH6.5-7.04%酪素母液制備：4g酪素溶解于0.1N的30-35mL的氫氧化鈉溶液中，水浴溶 解20min,溶解完畢后加入 60-70 C熱水定溶到100mL.200mLS養(yǎng)基加20mL. 2.1.5.2脫脂奶培養(yǎng)基：牛肉膏3g/L （酵母浸粉5g/L ）蛋白月東10g/L NaCl5g/L脫脂奶粉10-12g/L ,PH7.2 （用于蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選）將脫脂奶（粉）加水溶解制成10%溶液，于115C加熱滅菌20-30min,與牛膏 蛋白月東固體培養(yǎng)基1: 9混合均勻倒平板。2.1.6纖維素產(chǎn)生菌培養(yǎng)基：CMCNa2g/L 蛋白月東 1

8、0g/L 酵母膏 5g/L NaCl5g/L PH7.2-7.4（用于纖維素產(chǎn)生菌的篩選）2.1.7促芽胞形成培養(yǎng)基：土壤浸出液1000mL蛋白豚5g/L牛肉膏6g/L PH7.2 7.4蛋白豚 1g/L 酵母膏 0.7g/L 葡萄糖 1g/L （NH4） 2SO40.2g/L MgSC0.2g/L K 2HPQ 1g/LPH7.2 7.4 （分離純化用）產(chǎn)芽抱培養(yǎng)基：蛋白豚10g/L牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L .玉米粉0.5g/L 酵母 膏 0.1g/LPH7.2 7.42.1.8產(chǎn)蛋白酶發(fā)酵培 養(yǎng)基：玉米粉30g/L 豆餅粉20g/L 款皮10g/L 磷酸二氫鈉4g 磷酸二氫鉀0

9、.3g/L碳酸鈉1.0g/LPH7.4 7.6 八層紗布塞，牛皮紙扎好。2.1.9產(chǎn)淀粉酶發(fā)酵培 養(yǎng)基：玉米粉40g/L 豆餅粉20g/L 蛋白豚5g/L硫酸鉉4g/L 磷酸二氫鈉8g/L 磷 酸二氫鉀3g/L PH7.4 7.6八層紗布塞，牛皮紙扎好。產(chǎn)酶培養(yǎng)基（蛋白淀粉酶）：蛋白豚10g/L酵母膏5g/L葡萄糖1g/L可溶性淀 粉 5g/L 磷酸二氫鉀 2g/L MgSO4 0.5g/LCaCl2 0.2g/LPH7.0-7.42.2分離純化（或復(fù)壯）2.2.1凍干管的活化及菌種復(fù)壯：活化：用無菌吸管吸取0.5mL無菌水滴入安管中，輕蕩使干菌體溶解成菌懸液， 做梯度稀釋后取0.1-0.2m

10、L涂布或直接劃線丁肉湯（麥芽汁）培養(yǎng)基平血，或轉(zhuǎn) 接丁斜面（活化）37C 24-36h。復(fù)壯：挑取選擇生長快，菌落大的菌落丁 4.5mL無菌水試管中，振蕩搖勻后置丁 80 C水浴加熱15-20min,梯度稀釋后涂布丁促芽胞形成培養(yǎng)基平皿或蘸取菌懸 液直接劃線，37C 24h。反復(fù)二至三次，選取平皿上菌落大而且生長快的菌落轉(zhuǎn) 接丁斜面37 C 18-20h , 4 C冰箱保存。2.2.2商品微生物制劑中菌種選育1g （1ml）商品制劑加入99mL無菌（生理鹽）水/250mL三角瓶（帶玻璃珠）,置 丁搖床振蕩20-30min, 80-85 C水浴加熱15-20min,進(jìn)行梯度稀釋成10-3、10-

11、4、 10-5、10-6、10-7，根據(jù)活菌含量選取兩至三個梯度進(jìn)行混菌或涂布35C -37 C 24h,挑取一環(huán)生長快，菌落大的不同典型菌落分別轉(zhuǎn)接5mL無菌水試管中，混合器混合5-10min,做成菌懸液梯度稀釋后混菌或涂布，或直接 蘸取菌懸液直接劃 線，37C 18-20h。結(jié)合鏡檢直到菌落大小基本一致，轉(zhuǎn)接丁斜面 37C 18-20h , 丁4C冰箱保存?；?qū)⑻荻染?mL加入平板，然后分別注入淀粉和 酪素培養(yǎng)基 中，30-37 C 24-48h，挑取D/d大的（淀粉培養(yǎng)基加碘液，觀察透明圈）轉(zhuǎn)接丁 斜面?zhèn)溆没蛴脛澗€法進(jìn)行純化。并通過染色鏡檢觀察，從菌落形態(tài)和細(xì)胞形態(tài)進(jìn) 行鑒別。2.2.

12、3自然篩選2.2.3.1富集培養(yǎng)：取5g底泥或腸道內(nèi)溶物0.5g，加入45 （50） mL無菌水/250mL三角瓶（帶玻珠） 中，振蕩15-20min,取5mL菌懸液或5mL水樣加入45mL促芽培養(yǎng)基/250mL三角 瓶中，75C -80 C水浴 15-20min,降至 35 C -37 C 150-200r/min 振蕩 24h,染色 鏡檢，連續(xù)兩至三次培養(yǎng)備用。或取1g底泥（土）置丁 20mL肉湯培養(yǎng)基/250mL 三角瓶，八層紗布封口， 75C -80 C水浴處理15-20min,然后150-200r/min振 蕩24ho鏡檢形成芽抱情況，挑取具有芽抱的菌落進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，獲得單菌 落。2.2.3.2分離純化取富集菌液置于 75C -80C水浴 15-20min,梯度稀釋 10-3、10-4、10-5、10-6、10-7, 選擇三個合適的梯