實(shí)驗(yàn)中常用蛋白檢測(cè)方法PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1實(shí)驗(yàn)中常用蛋白檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)中常用蛋白檢測(cè)方法Western Blot免疫熒光免疫熒光ELISA免疫組化免疫組化第1頁(yè)/共14頁(yè)原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色、化學(xué)發(fā)光或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。n特點(diǎn)：組織、細(xì)胞來(lái)源均可；半定量第2頁(yè)/共14頁(yè)異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來(lái)對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性

2、。第3頁(yè)/共14頁(yè)胞或組織培養(yǎng)上清液，需將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。第4頁(yè)/共14頁(yè)蛋白檢測(cè)方式蛋白檢測(cè)方式免疫組化法免疫組化法Western blotWestern blot法法ELISAELISA試劑盒法試劑盒法相同點(diǎn)相同點(diǎn)抗體-抗原結(jié)合反應(yīng)不同點(diǎn)不同點(diǎn)樣品類型樣品類型組織或細(xì)胞組織或細(xì)胞血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液分析方式分析方式定位、定性及定量的研究(主要是定位，定位敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Western blot法)可以用于定性和半定量，定量較免疫組化法準(zhǔn)確多用于定量分析，其靈敏度非常高觀察結(jié)果觀察結(jié)果

3、免疫組化圖（膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性）電泳圖（著色的位置和著色深度）蛋白濃度應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍組織標(biāo)本，細(xì)胞中蛋白交互作用以及信號(hào)通路。檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)的一種最常用的方法。組織、細(xì)胞。分泌性蛋白檢測(cè)3種蛋白檢測(cè)水平的比較種蛋白檢測(cè)水平的比較第5頁(yè)/共14頁(yè)第6頁(yè)/共14頁(yè)第7頁(yè)/共14頁(yè)第8頁(yè)/共14頁(yè)第9頁(yè)/共14頁(yè)目前多用proreinA預(yù)先結(jié)合固化在瓊脂糖微珠上，Protein A是一種金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁蛋白質(zhì)，能特異性地與人和哺乳動(dòng)物抗體的Fc區(qū)結(jié)合，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，瓊脂糖微珠上的proreinA/G與抗體Fc特異性結(jié)合，由于抗體抗原特異性，沉淀蛋白X；溶液中有和蛋白X相互作用的物質(zhì)，就能沉淀下來(lái)。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。第10頁(yè)/共14頁(yè)第11頁(yè)/共14頁(yè)把其中一個(gè)蛋白