試驗(yàn)九蛙心搏期外收縮和蛙類(lèi)離心臟灌流試驗(yàn)報(bào)告

1、華南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)題目：蛙心搏的觀察與描記、期外收縮與代償間歇和蛙類(lèi)離體心臟灌流二、實(shí)驗(yàn)儀器與材料：蛙3只；常規(guī)手術(shù)器械、蛙板、蛙心夾、毀髓針等；秒表（手機(jī)秒表）、兩個(gè)針頭（針灸針）、雙針形露絲刺激電極、張力換能器、支架、滑輪、雙凹夾、PowerLab生理實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、 蛙心插管（斯氏套管）、套管夾藥劑：0.65%NaCl溶液，5%NaCl溶液，2%CaCl2溶液，1%KCl溶液，1:5000腎上腺素，1:10000乙酰膽堿溶液，300U/ml肝素溶液三、實(shí)驗(yàn)方法：（一）蛙的心搏觀察1. 雙毀髓，暴露蛙心臟：小心剪去心包膜。2. 觀察蛙心臟結(jié)構(gòu)3. 觀察心搏過(guò)程，記錄正常心跳次數(shù)4. 斯

2、氏第一結(jié)扎，觀察記錄靜脈竇、心房和心室5. 斯氏第二結(jié)扎，觀察記錄靜脈竇、心房和心室6. 重復(fù)步驟1制備另一個(gè)蛙心暴露，用于下面的心搏曲線(xiàn)實(shí)驗(yàn)（二）蛙的心搏曲線(xiàn)與心電圖記錄1. 連接實(shí)驗(yàn)裝置：PowerLab刺激輸出線(xiàn)接雙針形刺激電極，張力換能器接通道 2,通道3生物電輸入線(xiàn)接針形電極2. 用蛙心夾輕夾心尖連接張力換能器，可用滑輪，棉線(xiàn)適當(dāng)延長(zhǎng)點(diǎn)，角度放低3. 開(kāi)機(jī)，打開(kāi)chart軟件，分別設(shè)置 ch2和ch3放大參數(shù)，設(shè)置刺激為單脈沖。4. 針形電極插入蛙上下肢皮膚，連接通道 35. 觀察正常的蛙心搏曲線(xiàn)和心電圖記錄。（三）期外收縮與代償間歇實(shí)驗(yàn)1. 在方法二的基礎(chǔ)上，將刺激電極放到心室部位

3、，注意盡量不影響心臟的收縮舒張2. 分別在心室的收縮期，舒張?jiān)缙?、中期和晚期給予適當(dāng)強(qiáng)度單脈沖（閾上刺激） 期外收縮和代償間歇的發(fā)生。3. 保存數(shù)據(jù)4. 進(jìn)入方法四，制備蛙的離體心臟灌流裝置（四）蛙離體心臟灌流裝置1. 雙毀髓，暴露蛙的心臟，分辨連接蛙心臟的血管：動(dòng)脈圓錐、左主動(dòng)脈和右主動(dòng)脈，靜 脈與靜脈竇2. 斯氏蛙心插管法：在左主動(dòng)脈下穿線(xiàn)，離左右主動(dòng)脈分支處（近動(dòng)脈圓錐）2mm結(jié)扎左主動(dòng)脈，在左右主動(dòng)脈下再穿一線(xiàn)打活結(jié)備用，準(zhǔn)備好蛙心套管（任氏液 +1滴肝素 溶液），在左主動(dòng)脈的分支上部位剪一小斜口，將套管插入心室（收縮期），當(dāng)看到血液沖進(jìn)套管，液面上下移動(dòng)，即可結(jié)扎動(dòng)脈和套管。（五）離

4、體心臟灌流實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1. 記錄正常心搏曲線(xiàn)，準(zhǔn)備好加藥標(biāo)記，以下實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持chart連續(xù)不停的記錄2. 滴加0.65%NaCl溶液并標(biāo)記，觀察到心搏明顯變化后，吸去套管內(nèi)溶液并同時(shí)做沖洗標(biāo)記，用新鮮的任氏液清洗23次，待心搏曲線(xiàn)恢復(fù)正常。注意，換液時(shí)切勿碰套管，保持灌流液面一致。（以下實(shí)驗(yàn)同）。保持Chart連續(xù)采樣直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。3. 滴加 5%NaCl26 滴。4. 滴加2%CaCl2溶液13滴實(shí)驗(yàn)5. 滴加1%KCl溶液12滴實(shí)驗(yàn)6. 滴加12滴腎上腺素溶液（1:5000）實(shí)驗(yàn)7. 滴加12滴1:10000乙酰膽堿溶液實(shí)驗(yàn)8. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，保存數(shù)據(jù)，回放記錄，卸下實(shí)驗(yàn)裝置，清理儀器、桌面衛(wèi)

5、生，并關(guān)PowerLab 和電腦電源四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（一）蛙的心搏觀察從心臟的腹面可看到一個(gè)心室，其上方有兩個(gè)：心房，房室之間有房室溝。心室右上方有一動(dòng)脈圓錐，是動(dòng)脈根部的膨大，動(dòng)脈干向上分成左右兩分支用蛙心夾夾住少許心尖部肌 肉，輕輕提起蛙心夾，將心臟倒吊，可以看到心臟背面有節(jié)律搏動(dòng)的靜脈竇。在心房與靜脈竇之間有一條白色半月形界線(xiàn)，稱(chēng)為竇房溝。前、后腔靜脈與左、右肝靜脈的血液流人靜脈竇。記錄正常水平下，靜脈竇、心房和心室的跳動(dòng)頻率如表一表斯氏結(jié)扎記錄表（頻率:次/1min )靜脈竇心房心室對(duì)照525250第一結(jié)扎474141第二結(jié)扎423932（二）蛙的心搏曲線(xiàn)圖一蛙的心搏曲線(xiàn)由圖一可觀察到本

6、實(shí)驗(yàn)所用的蛙心每收縮一次形成的波形有兩個(gè)波峰，一個(gè)峰值較低， 而且上部較為鈍圓，另一個(gè)峰較為高，上部較尖，則可以推測(cè)出本實(shí)驗(yàn)所記錄的第一個(gè)較低 的波峰是由心房收縮而形成，第二個(gè)較高的波峰為心室收縮產(chǎn)生。（三）期外收縮與代償間歇實(shí)驗(yàn)圖二 蛙的期外收縮與代償間歇曲線(xiàn)10文件102012-05-07 16:10:46.828期外收縮代償間歇道通由圖二可觀察到在舒張?jiān)缙谝院?，?duì)心室給予一次刺激， 使心室在正常竇房結(jié)的沖動(dòng)到達(dá)之前，因額外的刺激引起一次提前收縮，即期前收縮。心室在期前收縮之后出現(xiàn)較長(zhǎng)的舒張時(shí)間，稱(chēng)為代償間歇。（四）蛙離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)圖三滴加5%NaCl2溶液后蛙的心搏曲線(xiàn)圖當(dāng)任氏液中加入

7、Na+后，蛙的心搏曲線(xiàn)的基線(xiàn)明顯下降，說(shuō)明 Na+對(duì)蛙類(lèi)心 臟的收縮性起抑制作用，使心臟的收縮力降低。圖四 滴加2%CaCl2溶液后蛙的心搏曲線(xiàn)圖圖五滴加2%CaCl2溶液后加入新鮮的任氏液后蛙的心搏曲線(xiàn)圖艾件1空0g1:Kl：a1:40土”由圖四、五，可觀察到當(dāng)任氏液中加入Ca2+后，心搏曲線(xiàn)的基線(xiàn)上移。當(dāng)加入新鮮的任氏液后蛙的心搏曲線(xiàn)圖漸漸恢復(fù)正常，心搏曲線(xiàn)基線(xiàn)逐漸下移恢復(fù)正常水平。圖六滴加1%KCl溶液溶液后蛙的心搏曲線(xiàn)圖文件1如圖六所示，當(dāng)任氏液中加入 K+后，蛙的心搏曲線(xiàn)呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明K+對(duì)蛙類(lèi)心臟的收縮性起抑制作用， 使心臟的收縮力降低。同時(shí)心搏曲線(xiàn)由密變疏，說(shuō)明心率減慢。當(dāng)加入

8、 新鮮的任氏液后蛙的心搏曲線(xiàn)圖漸漸恢復(fù)正常，心搏曲線(xiàn)基線(xiàn)逐漸下移恢復(fù)正常水平。五、分析與討論（一）蛙的心搏觀察1. 斯氏第一結(jié)扎后，房室搏動(dòng)都減慢原因在于斯氏結(jié)扎第一次是分離靜脈竇與心臟之間的傳遞，心臟的自律性完全靠靜脈竇來(lái)提供， 如果截?cái)囔o脈竇與心臟之間的傳遞， 因?yàn)殪o 脈竇對(duì)異位起博點(diǎn)有抑制作用， 則心臟會(huì)停止跳動(dòng)一段時(shí)間， 而后異位起博點(diǎn)開(kāi)始起跳， 應(yīng) 該是房室交界處開(kāi)始搏動(dòng)， 因?yàn)榉渴医唤绲淖詣?dòng)頻率與靜脈竇的頻率之間的差距最小，但它比靜脈竇的搏動(dòng)頻率要慢，所以心跳減慢。2. 斯氏第二結(jié)扎后，房室搏動(dòng)頻率減慢，而且比斯氏第一結(jié)扎更慢，原因是斯氏結(jié)扎第二次是阻斷方式交界處，那則由浦肯野纖維

9、開(kāi)始搏動(dòng)進(jìn)行異位起博，他的搏動(dòng)頻率比房室交界更慢，所以心臟跳動(dòng)會(huì)更加緩慢。（二）蛙的心搏曲線(xiàn)在蛙心材料和實(shí)驗(yàn)條件理想的條件下，蛙的理想的心搏曲線(xiàn)如圖七，出現(xiàn)三個(gè)峰值，分別是竇房結(jié)的搏動(dòng)、心室的搏動(dòng)以及心房的搏動(dòng)。相比此次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果（圖一），竇房結(jié)的搏動(dòng)波峰沒(méi)有出現(xiàn)，可能原因是：1、實(shí)驗(yàn)儀器的靈敏度不足，未能測(cè)出竇房結(jié)的搏動(dòng)；2、由于蛙心暴露在空氣中已久，在解剖過(guò)程中損傷較大，竇房結(jié)搏動(dòng)受到影響。圖六蛙的心搏理想曲線(xiàn)心房的搏動(dòng)心室的搏動(dòng)竇房結(jié)的搏動(dòng)（三）期外收縮與代償間歇實(shí)驗(yàn)心肌興奮后，興奮性會(huì)發(fā)生周期性的變化，其有效不應(yīng)期特別長(zhǎng)，相當(dāng)于整個(gè)收縮期和舒張?jiān)缙凇Ｒ虼耍谛呐K的收縮期和舒張?jiān)缙趦?nèi)，任

10、何刺激均不能引起心肌興奮與收縮，但在舒張?jiān)缙谝院?，?duì)心室給予一次閾上刺激，使心室肌在正常竇房結(jié)的沖動(dòng)到達(dá)之前，因額外的刺激引起一次提前收縮，即期前收縮。期前收縮也有自己的有效不應(yīng)期，如果正常的竇房結(jié)的沖動(dòng)到達(dá)心室時(shí)，正好落在心室期前收縮的有效不應(yīng)期內(nèi)，因而不能引起心室的興奮和收縮，需等到正常的竇房結(jié)的沖動(dòng)再次到達(dá)時(shí)，心室才能產(chǎn)生收縮。心室在期前收縮之后出現(xiàn)較長(zhǎng)的舒張時(shí)間，稱(chēng)為代償間歇。若竇性心律較慢，下一次竇房結(jié)的興奮也可在期前興奮的有效不應(yīng)期結(jié)束后才傳到心 室，在這種情況下，代償間歇將不會(huì)出現(xiàn)。（四）蛙離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)1. 由圖三可以看出，當(dāng)任氏液中加入 Na+后，蛙的心搏曲線(xiàn)的基線(xiàn)明顯下降

11、，說(shuō)明Na+對(duì)蛙類(lèi)心臟的收縮性起抑制作用，使心臟的收縮力降低。同時(shí)心搏曲線(xiàn)由密變疏，說(shuō)明心率減慢。原因：心肌細(xì)胞的興奮 -收縮偶聯(lián)在很大程度上依賴(lài)于胞外內(nèi)流的Ca2+,而當(dāng)Na+濃度升高時(shí)，由于Na+與Ca2+競(jìng)爭(zhēng)性地與肌鈣蛋白結(jié)合，使得Ca2+與肌鈣蛋白的結(jié)合能力降低，從而使得鈣內(nèi)流減少，因此心肌收縮力減弱，同時(shí)也使心率變慢。2. 如圖四、五所示，當(dāng)任氏液中加入Ca2+后，蛙的心搏曲線(xiàn)的基線(xiàn)明顯上升，說(shuō)明 Ca2+對(duì)蛙類(lèi)心臟的收縮性起促進(jìn)作用，使心臟的收縮力增強(qiáng)。而心搏曲線(xiàn)疏密程度變化不大，說(shuō)明對(duì)心率的影響不大。原因：心肌興奮 -收縮偶聯(lián)的媒介與骨骼肌一樣也是 Ca2+,但 是鈣的來(lái)源不同，由于心肌細(xì)胞的終末池很不發(fā)達(dá)，所貯存的Ca2+極少，因而胞內(nèi)的 Ca2+主要來(lái)源于細(xì)胞外液，即心肌細(xì)胞的興奮 -收縮偶聯(lián)在很大程度上依賴(lài)于胞外內(nèi)流的 Ca2+, 故細(xì)胞外液中的 Ca2+濃度對(duì)心肌收縮力的影響較大。在一定范圍內(nèi)，細(xì)胞外液中的Ca2+濃度升高時(shí)，興奮過(guò)程中 Ca2+內(nèi)流量增多，心肌收縮力就強(qiáng)；反之，心肌收縮力就弱。3. 如圖六所示，當(dāng)任氏液中加入K+后，蛙的心搏曲線(xiàn)呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明K+對(duì)蛙類(lèi)心臟的收縮性起抑制作用，使心臟的收縮力降低。同時(shí)心搏曲線(xiàn)由密變疏，說(shuō)明心率減慢。原因：當(dāng)K+濃度升高時(shí)，由于K+與Ca2+競(jìng)爭(zhēng)性地與肌鈣蛋白結(jié)合，使得Ca2+與肌鈣蛋白的結(jié)合能力降低