P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表達(dá)及意義

1、P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表達(dá)及意義 作者：吳穎，劉文勵(lì)，孫漢英，徐惠珍【摘要】 為了探討連環(huán)蛋白P120（P120 catenin，P120ctn）在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表達(dá)及意義，采用免疫組織化學(xué)染色的方法對比分析了40例NHL和10例反應(yīng)性增生（RH）淋巴結(jié)的外科活檢石蠟包埋組織切片中P120ctn的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，在反應(yīng)性增生淋巴結(jié)組織中未檢測到P120ctn的表達(dá)；而在NHL中P120ctn的陽性檢出率為55% (22/40)，其中低度惡性及中高度惡性NHL組中的陽性檢出率分別為16.7(2/12)、71.4(20/28)，兩組之間比較存在顯著性差異( P0.00

2、1 )。另外，在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞上也發(fā)現(xiàn)了p120ctn的陽性表達(dá)。結(jié)論：P120ctn的表達(dá)與NHL的惡性程度密切相關(guān)，提示P120ctn在淋巴瘤的惡性增殖過程中可能發(fā)揮著重要作用，這對淋巴瘤的診斷和治療可能具有一定的意義。 【關(guān)鍵詞】 非霍奇金淋巴瘤Expression of P120ctn in Non-Hodgkins Lymphoma and ItsSignificance1 / 15Abstract To evaluate the expression of P120ctn in non-Hodgkins lymphoma (NHL) and to explore its clin

3、ical significance，immunohistochemistry stain method was applied to comparatively investigate the protein expression of P120ctn in paraffin-embedded lymph node tissue slices from 40 cases of NHL and 10 cases of reactive hyperplasia of lymph node. The results showed that P120ctn was not detected in re

4、active hyperplasia of lymph node，but was detected in 55%(22/40) cases of NHL. P120ctn expression increased with the tumor malignancy of NHL，there was a significant difference between the expression rates of P120ctn in low grade(16.7%，2/12) and intermediate to high grade malignant (71.4%，20/28) NHL (

5、P<0.001). Moreover，P120ctn was also detected in vascular endothelial cells of NHL. It is concluded that the level of P120ctn expression is closely related to the malignant grade of NHL，it suggests that P120ctn possibly plays an important role in the malignant proliferation of lymphoma with a

6、certain significance in diagnosis and therapy of lymphoma.Key words non-Hodgkins lymphoma; P120ctn; immunohistochemistry連環(huán)蛋白（catenin）是一組細(xì)胞內(nèi)糖蛋白，包括、和P120 4大類。它們的分子中均具有重復(fù)的armadillo樣結(jié)構(gòu)，并通過這個(gè)結(jié)構(gòu)與鈣粘蛋白的胞內(nèi)段結(jié)合，形成鈣粘蛋白連環(huán)蛋白復(fù)合體（cadherin-catenin complex，CCC），CCC對維持細(xì)胞的正常信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和粘附功能是必需的。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，這些分子在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和分布發(fā)生異常，即發(fā)生

7、轉(zhuǎn)位1。 P120ctn是新近發(fā)現(xiàn)的連環(huán)蛋白成員，它的一端與E-cadherin的胞內(nèi)段近膜區(qū)結(jié)合，而另一端可能與Kaiso轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，對基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用2，但是兩者在基因轉(zhuǎn)錄中的詳細(xì)作用機(jī)制未明。P120ctn對E-cadherin 介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞黏附起調(diào)節(jié)作用3，4，這些信號分子與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。我們采用免疫組織化學(xué)SP法研究了P120ctn在NHL淋巴結(jié)病理組織中的表達(dá)情況，并以反應(yīng)性增生淋巴結(jié)作為對照，初步探討P120ctn在NHL中的可能作用及意義。材料和方法標(biāo)本采集收集2001年9月-2005年3月同濟(jì)醫(yī)院病理科的NHL存檔蠟塊共40例，所有標(biāo)本

8、經(jīng)常規(guī)染色和免疫表型研究后確診，其中男18例，女22例，年齡12-68歲，中位年齡42歲。根據(jù)2000年淋巴組織腫瘤WHO分類標(biāo)準(zhǔn)及分類中各類型侵襲性劃分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理分型，其中低度惡性組12例為惰性淋巴瘤，中高度惡性組28例為侵襲性淋巴瘤。免疫組織化學(xué)證實(shí)25例為B細(xì)胞性NHL，15例為T細(xì)胞性NHL。另取同期保存的10例反應(yīng)性增生淋巴結(jié)作為對照。P120ctn蛋白的免疫組織化學(xué)染色石蠟包埋組織連續(xù)切片，厚3-5 m。采用鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶SP法，一抗為鼠抗人P120ctn單克隆抗體（Santa Cruz公司），工作濃度為120，SP試劑盒及DAB顯色劑均購于北京中山生物技術(shù)有限公司。

9、切片脫蠟至水；微波煮沸抗原修復(fù)2次各5分鐘；3% H2O2甲醇溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，37孵育30分鐘；非免疫動物血清室溫封閉30分鐘；滴加一抗，4過夜；滴加二抗，37 孵育30分鐘；滴加酶結(jié)合物，37孵育30分鐘，DAB顯色，蘇木素復(fù)染、分化、促藍(lán)、透明、封片。將已知陽性的乳腺癌切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗，作為陰性對照。免疫著色評估P120ctn蛋白陽性染色定位于胞漿，可伴有胞核著色。每張切片選取5個(gè)有代表性的高倍鏡視野（400×），每個(gè)視野隨機(jī)計(jì)數(shù)300個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算1 500個(gè)腫瘤細(xì)胞中P120ctn陽性細(xì)胞百分率，對濾泡性淋巴瘤只計(jì)數(shù)濾泡內(nèi)腫瘤細(xì)胞

10、，按陽性細(xì)胞百分率分為：<5%為陰性，5%為陽性。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)為0.001。結(jié)果良性淋巴結(jié)組織中P120ctn的表達(dá)情況在反應(yīng)性增生淋巴結(jié)組織中，P120ctn的陽性檢出率為0（0/10）（圖1）。NHL腫瘤細(xì)胞中P120ctn的表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系在NHL病理組織標(biāo)本中，淋巴結(jié)的正常結(jié)構(gòu)被破壞，P120ctn主要在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，陽性染色定位于胞漿，可伴有胞核著色（圖2）。在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞上也出現(xiàn)了P120ctn的陽性表達(dá)（圖3）。P120ctn在NHL中的陽性檢出率為55（22/40），隨著NHL惡性程度的增加

11、，P120ctn的表達(dá)水平增高，在低度惡性組中的陽性表達(dá)率（16.7%，2/12）明顯低于中高度惡性組的陽性表達(dá)率(71.4，20/28)，兩組之間比較有顯著性差異(P0.001 )。不同免疫分型(細(xì)胞性和細(xì)胞性)、首發(fā)部位(結(jié)內(nèi)和結(jié)外)、性別及年齡之間表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見附表。Table . Expression of P120ctn in NHL and the relation with clinical pathological feature（略）討 論P(yáng)120ctn最初是作為src癌蛋白的底物而被發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)被認(rèn)為是一種與癌細(xì)胞侵潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)的連

12、環(huán)蛋白。已證明連環(huán)蛋白是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子和黏附分子，參與由上皮型鈣黏著蛋白（E-cadherin）介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，在細(xì)胞黏附、增殖和細(xì)胞運(yùn)動過程中起重要作用。在細(xì)胞內(nèi)，4種連環(huán)蛋白（、和P120）均能與E-cadherin的胞內(nèi)肽段結(jié)合，和連環(huán)蛋白呈互斥方式與 E-cadherin結(jié)合，它們的另一端與連環(huán)蛋白結(jié)合，后者與肌動蛋白細(xì)胞骨架結(jié)合，這樣就形成了鈣黏著蛋白連環(huán)蛋白復(fù)合體。P120ctn在細(xì)胞內(nèi)也能與E-cadherin結(jié)合，但不同于和連環(huán)蛋白，它的結(jié)合位點(diǎn)在E-cadherin高度保守的近膜區(qū)（JMD），而其另一端并不與連環(huán)蛋白或抑癌蛋白APC（adenomatous polyp

13、osis coli）結(jié)合。P120ctn的缺失并沒有明顯影響E-cadherin的合成率，卻促進(jìn)了E-cadherin的降解5，它是E-cadherin穩(wěn)定停留在細(xì)胞膜上所必需的6。E-cadherin表達(dá)及功能的調(diào)節(jié)在腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移中起著重要作用7。P120ctn可能與連環(huán)蛋白一樣，作為一種癌基因影響著基因轉(zhuǎn)錄；也可能以抑癌基因樣作用干預(yù)E-cadherin 介導(dǎo)的細(xì)胞黏附和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活動8，9。P120ctn可因不同的剪接方式而具有32種同工蛋白之多，它廣泛表達(dá)于上皮組織、內(nèi)皮組織、心肌細(xì)胞和神經(jīng)系統(tǒng)中10，并存在組織特異性。近年來，國外已有不少文獻(xiàn)報(bào)道了在多種惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了P120c

14、tn的異常表達(dá)，但對它在惡性淋巴瘤中的研究卻很少。 本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法對40例不同惡性程度NHL的P120ctn進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示P120ctn的表達(dá)與NHL免疫分型以及患者的臨床病理特征如性別、年齡、首發(fā)部位等無明顯相關(guān)性。P120ctn在低度惡性組的表達(dá)率明顯低于中高度惡性組，提示P120ctn在淋巴瘤的侵襲浸潤及發(fā)展中可能起到重要作用，可作為判斷淋巴瘤惡性程度高低的參考指標(biāo)之一。在正常淋巴組織中，P120ctn不表達(dá)，此結(jié)果與Mo等11的研究結(jié)果基本相符，由于P120ctn特異性表達(dá)于淋巴瘤組織而在正常淋巴組織不表達(dá)的特點(diǎn)，可能成為淋巴瘤治療的新靶標(biāo)。但P120ctn對NHL

15、預(yù)后判斷的意義，還有待今后進(jìn)一步結(jié)合臨床觀察和隨訪證實(shí)。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)P120ctn在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有表達(dá)，提示P120ctn在血管形成中可能具有一定作用。Xiao等人12研究發(fā)現(xiàn)，P120ctn能調(diào)節(jié)VE-cadherin在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)和功能，從而成為血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附的調(diào)節(jié)因子，但這是否是P120ctn在腫瘤血管形成中的作用還有待進(jìn)一步研究。 在正常上皮組織中，P120ctn表達(dá)以細(xì)胞膜尤其是細(xì)胞細(xì)胞連接處為主，胞漿表達(dá)微弱，胞核不表達(dá)，而在其癌組織和癌細(xì)胞中則表現(xiàn)為胞漿或（和）胞核表達(dá)，胞膜表達(dá)減弱或消失，說明癌細(xì)胞中信號分子已出現(xiàn)轉(zhuǎn)位或重新分布，即失去正常的信號傳遞和黏附功能

16、，可能會表現(xiàn)出轉(zhuǎn)移行為。而這一機(jī)制并不能完全說明P120ctn在惡性淋巴瘤中的作用機(jī)制。在我們的研究中，可以認(rèn)為P120ctn是腫瘤轉(zhuǎn)移的促進(jìn)因子，但其作用機(jī)制并不清楚。至于表達(dá)缺失P120ctn的癌細(xì)胞，這些分子是如何消失的或如何“跑到”別的部位如胞核的，尚有待今后進(jìn)一步探討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1農(nóng)朝贊，郭凌霄，黃華藝. 正常肝組織和肝細(xì)胞系、肝癌組織及細(xì)胞系中連環(huán)蛋白P120的表達(dá). 四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2003; 34: 80-832Daniel JM，Reynolds AB. The catenin P120 (ctn) interacts with Kaiso，a novel BTB

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