Skp2在膀胱上皮癌中的表達(dá)及意義

1、Skp2在膀胱上皮癌中的表達(dá)及意義作者：李朝爭 趙金媛 張祥宏 王華玖 白杰 關(guān)偉 賈文平【摘要】 目的： 探討細(xì)胞周期蛋白Skp2表達(dá)與膀胱移形細(xì)胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系。方法： 對73例膀胱移形細(xì)胞癌進(jìn)行組織學(xué)分級及分期，另取22例正常膀胱組織作為對照，采用免疫組織化學(xué)方法SP法檢測各例組織中Skp2蛋白表達(dá)水平，并分析其表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果： Skp2蛋白陽性表達(dá)率為50.7%(37/73)， Skp2蛋白表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級、病理分期顯著相關(guān)。結(jié)論： Skp2是評估膀胱移形細(xì)胞癌惡性程度，估計(jì)預(yù)后有價(jià)值的指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 膀胱移行細(xì)胞癌；Skp2;免疫組織化學(xué)；表達(dá) 【AB

2、STRACT】 Objective: To investigate the significance of the protein expression of Skp2 in the progression and prognosis of bladder transitional cell carcinoma.Methods: The pathological stage and histological grade were assessed in the 73 cases with surgically resected bladder transitional cell carcino

3、ma. The normal bladder tissue of twentytwo cases was used as control.The expression of Skp2 was tested by immunohistochemical method, and the related clinical phase and its expression were analyzed.Results: The expression rate of Skp2 was 50.7%. Skp2 expression was related with histological grade an

4、d pathological stage of tumors closely.Conclusion: Skp2 are important prognostic factors for patients with bladder transitional cell carcinoma.2 / 12 【KEY WORDS】 Bladder transitional cell carcinoma; Skp2; Immunohistochemistry; Expression 膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,具有生長緩慢、多發(fā)性、復(fù)發(fā)性等臨床特點(diǎn)。它的發(fā)生發(fā)展受多種基因的調(diào)控，

5、在細(xì)胞周期中，G1S期轉(zhuǎn)換的調(diào)控是一關(guān)鍵點(diǎn)， Skp2和P27是近年來新發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期調(diào)控基因，主要參與G1S期調(diào)控，是細(xì)胞從G1S期轉(zhuǎn)換的主要限速因子之一。Skp2是Fbox蛋白家族中重要的一員，通過泛素化降解P27蛋白，參與細(xì)胞周期調(diào)控，與腫瘤發(fā)生發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)1。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化技術(shù)對P27和Skp2在膀胱移行細(xì)胞癌及其癌旁或正常膀胱粘膜組織中的表達(dá)水平及相互關(guān)系，探討Skp2與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性，評價(jià)對患者預(yù)后的價(jià)值。 1 材料與方法 1.1 一般資料 收集我院19982004年間手術(shù)切除后經(jīng)病理確診為膀胱移行細(xì)胞癌具有完整臨床病理資料及組織標(biāo)本共73例（TURBt 51例、膀胱

6、部分膀胱部分切除15例、根治性膀胱切除7例）病例。另外，選用22例非腫瘤粘膜供對照研究（其中12例為距腫瘤2cm 以上的癌旁正常粘膜，另10例為正常膀胱粘膜）。全部標(biāo)本均進(jìn)行P27和Skp2蛋白檢測。 1.2 試劑與方法 Skp2鼠抗人單克隆抗體（克隆號1G12E9）,P27鼠抗人單克隆抗體（克隆號DCS72.F6）均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。標(biāo)本采用鏈霉卵白素過氧化物（SP）法，具體操作按說明書進(jìn)行，切片常規(guī)脫蠟至水，微波修復(fù)抗原，3%過氧化氫處理10min，抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性。正常羊血清處理15min減少非特異性背景。Skp2和P27單克隆抗體（抗體稀釋比150），一抗4孵育

7、過夜，二抗處理15min鏈霉菌抗生素蛋白過氧化物酶復(fù)合物處理15min，DAB顯色來自水沖洗終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封化。用磷酸鹽緩釋液替代一抗作為陰性對照，用已知乳腺癌作為陰性對照。 1.3 結(jié)果判定 Skp2、P27以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞2，在400倍光鏡下觀察10個(gè)視野，計(jì)數(shù)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。 1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用 SAS統(tǒng)計(jì)分析軟件，進(jìn)行單因素方差分析臨床病理資料與免疫組化結(jié)果以及Skp2和P27之間相關(guān)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。 2 結(jié)果 2.1 Skp2在正常膀胱粘膜與膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

8、情況 在正常22例粘膜中Skp2陽性表達(dá)率13.6%（3/33）。在73例膀胱移行細(xì)胞癌組織中，Skp2蛋白陽性表達(dá)率50.7%(37/73)，顯著高于正常粘膜（P<0.05）。 2.2 Skp2蛋白表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌臨床病理的特殊關(guān)系 Skp2蛋白表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌腫瘤組織分級顯著相關(guān)(211.55, P<0.05), 與臨床分期顯著相關(guān)（210.5,P<0.05）, 有淋巴轉(zhuǎn)移組Skp2蛋白水平顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組（P<0.05）。 3 討論 P27是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的周期素激酶抑制因子，P27mRNA在正常細(xì)胞周期中是恒定的，蛋白水

9、平在G0，G1期最高，在S、M期較低。P27對細(xì)胞周期G1S節(jié)點(diǎn)有重要的調(diào)控作用，抑制細(xì)胞的增殖。當(dāng)腫瘤細(xì)胞受到癌性生長信號刺激時(shí)，P27水平降低促進(jìn)G1期的進(jìn)展，增加細(xì)胞增殖的速度，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。低表達(dá)的P27已在多種腫瘤中觀察到，如：淋巴瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、食管癌、前列腺癌、肝癌等。在非小細(xì)胞肺癌、口腔磷狀細(xì)胞癌、大腸癌和前列腺癌以及乳腺癌的研究中證實(shí)，P27水平越低預(yù)示著腫瘤預(yù)后越差37。 Skp2基因染色體5p113，是Fbox蛋白家族中成員之一，在泛素蛋白酶體途徑中能特異性識別底物，并與之結(jié)合使之進(jìn)入泛素化降解。Skp2通過對多種靶蛋白的泛素化降解與細(xì)胞周期調(diào)控及腫瘤發(fā)生發(fā)展和

10、預(yù)后密切相關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)P27蛋白水解主要是通過泛素化蛋白水解體途徑完成8，P27的水平取決于Skp2依賴的蛋白水解，細(xì)胞由靜止?fàn)顟B(tài)進(jìn)入增殖狀態(tài)需要P27的降解。Skp2是正常或異常細(xì)胞進(jìn)入S期必須的， Skp2首先在G1S期之間出現(xiàn)，在SG2期升高，在M期快速下降。呂增會等9用免疫組化方法，在對69例胃癌組織28例正常胃粘膜組織檢測Skp2的表達(dá)水平時(shí)發(fā)現(xiàn)正常粘膜組織中Skp2表達(dá)水平極低，而在胃癌組織中表達(dá)水平明顯增加。兩者有顯著差異（P<0.05）， 且Skp2高表達(dá)患者預(yù)后較差。Yang等10發(fā)現(xiàn)Skp2在正常的前列腺腺上皮和基底細(xì)胞中較低，而在癌前病變和前列腺癌標(biāo)本中

11、顯著增高，且Skp2的表達(dá)與臨床分期、轉(zhuǎn)移正相關(guān)。鄭祥毅等11應(yīng)用同樣方法檢測41例前列腺癌和20例良性前列腺增生組織Skp2表達(dá)情況亦有同樣發(fā)現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn)Skp2在正常膀胱粘膜中呈低表達(dá)，在膀胱移行細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，與腫瘤分級、臨床分期呈正相關(guān)，差異有顯著性。浸潤型、有淋巴轉(zhuǎn)移組中Skp2表達(dá)明顯高于表淺型和無淋巴轉(zhuǎn)移組（P<0.05）。提示Skp2與膀胱癌的發(fā)生有關(guān)，檢測其蛋白表達(dá)水平對判斷腫瘤惡性程度、轉(zhuǎn)移情況、估計(jì)預(yù)后有一定意義。 本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在BTCC中P27表達(dá)隨Skp2的上升而降低，兩者呈負(fù)相關(guān)。兩者在細(xì)胞周期進(jìn)展中的平衡失調(diào)，導(dǎo)致膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展。聯(lián)

12、合檢測其蛋白表達(dá)水平對判斷腫瘤惡性程度、轉(zhuǎn)移情況、估計(jì)預(yù)后具有重要意義。靶向Skp2的抗癌治療預(yù)防膀胱癌復(fù)發(fā)具有廣泛前景。表1 Skp2在BTCC和正常膀胱粘膜組織中的表達(dá)表2 Skp2在、BTCC中的表達(dá)【參考文獻(xiàn)】 1 Carrano AC,Eytan E,Hershko A,et al.Skp2 is required for ubiquitin mediated degradation of the CDK inhibitor P27J.Nat Cell Boil,1999,1(4):1931992 Yang G, Agala G, Marzo AD, et al. Elevated

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