Ki67、TIAI、GranzymeB鼻腔淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義

1、Ki67、TIAI、GranzymeB鼻腔淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義 【摘要】 目的 探討核抗原Ki67和細(xì)胞毒蛋白TIAI、GranzymeB在鼻腔淋巴瘤（NK/T）的表達(dá)及意義。方法 以NK/T淋巴瘤34例石蠟組織標(biāo)本為研究對(duì)象，同部位B細(xì)胞淋巴瘤8例為對(duì)照，行免疫組織化學(xué)染色（SABC法）。結(jié)果34例NK/T中CD45RO陽(yáng)性20例，CD3陽(yáng)性25例，CD56陽(yáng)性18例，TIAI陽(yáng)性28例，GranzymeB陽(yáng)性20例，Ki67陽(yáng)性率60%95%34例。B細(xì)胞淋巴瘤除Ki67陽(yáng)性率為30%80%者6例以外，各免疫表型均為陰性。背景反應(yīng)性中性粒細(xì)胞和組織細(xì)胞常表達(dá)TIAI，但不表達(dá)Granz

2、ymeB，腫瘤細(xì)胞異型性、Ki67陽(yáng)性率與GranzymeB表達(dá)顯著相關(guān)。結(jié)論Ki67陽(yáng)性率、TIAI、GranzymeB對(duì)NK/T淋巴瘤診斷有很大參考價(jià)值，尤其GranzymeB特異性大于ITIA，NK/T的常規(guī)診斷可聯(lián)合使用CD45RO、CD3、CD56、細(xì)胞毒蛋白、Ki67等免疫組化染色確定。 關(guān)鍵詞 NK/T細(xì)胞淋巴瘤 Ki67 細(xì)胞毒蛋白 免疫組化 1 / 13 Expression and clinical significance of Ki67， TIAI，Granzyme B in nasal lymphoma 【Abstract】 Objective To investig

3、ate the expression and significance of Ki67，cytotoxic proteinsTIAI，GranzymeB in nasal lymphoma（NK/T）.Methods Paraffin-embedded tissues of34cases of nasal NK/T-cell lymphoma，8midline B-cell lymphomawere studied using immunohistochemical method.Results In34NK/T-cell lymphoma，positive immunoreactivity

4、was observed in20forCD45RO，25for CD3，18for CD56，28for TIAI，20for GranzymeB，60%95%in34cases for Ki67.No positive reactivitywasdemonstrated in8midline B-cell lymphoma for these antibodies，except30%80%in6cases for Ki67.The reactive polymorphonuclear leucocytes and histiocytes were positive for TIAI，but

5、 not for Granzyme B;The& nbsp;tumor cell pleomorphism and positive rate of Ki67were significantly associated with Granzyme B expression.Conclusion Positive rate of Ki67，TIAI，GranzymeB are very important to diagnose NK/T lymphoma，especially Granzyme B has higher specificity than TIAI.The immu

6、nostaining using a panelof antibodies including CD45RO，CD3，CD56，cytotoxic proteins and Ki67is helpful in routine pathologic diagnosis of NK/T-cell lymphoma. Key words NK/T-cell lymphoma Ki67 cytotoxic protein immunohistochemistry 鼻腔NK/T細(xì)胞淋巴瘤是一種特殊類(lèi)型外周NK細(xì)胞和T細(xì)胞淋巴瘤，近年來(lái)對(duì)其研究獲新進(jìn)展。NK/T的組織病理學(xué)改變雖已明確，但對(duì)其特異性免疫標(biāo)

7、記、細(xì)胞來(lái)源等問(wèn)題尚需進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。本研究組對(duì)960例惡性淋巴瘤回顧性研究，并對(duì)診斷為鼻腔NK/T細(xì)胞淋巴瘤的34例用Ki67、TIAI和GranzymeB抗體做免疫組化染色，探討用于外檢病理診斷最佳組合，以及Ki67、細(xì)胞毒蛋白在該腫瘤的表達(dá)及其意義。 1 材料與方法 1.1 材料 選自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部病理學(xué)系220實(shí)驗(yàn)室20012003年間鼻腔組織活檢，病理診斷為NK/T的34例。對(duì)照為同時(shí)期連續(xù)病例中同部位B細(xì)胞淋巴瘤8例;另外隨意選4例非特殊性外周T細(xì)胞淋巴瘤作為細(xì)胞毒蛋白對(duì)照。標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色。 1.2 方法 免疫組化采用SABC法，均經(jīng)微波抗原修復(fù)處理。

8、采用抗體:B細(xì)胞標(biāo)記CD79a、CD20;T細(xì)胞和NK細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD45RO、CD3;細(xì)胞毒顆粒相關(guān)蛋白TIAI，Granzyme;同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞增殖活性Ki67。抗體均購(gòu)自Dako公司，染色結(jié)果按陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞半定量分析，05%為（-）:6%10%為（+/-）;11%20%為（+）;21%50%為（+）;>50%為（+）。（+）以上為陽(yáng)性標(biāo)記，以下為陰性。 2 結(jié)果 2.1 臨床資料 34例NK/T細(xì)胞淋巴瘤中男26例，女8例。年齡1474歲。其中鼻腔20例，鼻咽8例，口咽4例，會(huì)厭2例。臨床表現(xiàn)為鼻塞、咽痛、頭痛或伴發(fā)熱。大體檢查:病變部位多隆起，界限不清，常見(jiàn)潰瘍及壞死，表面

9、常附白苔或干痂。對(duì)照組中面部B細(xì)胞淋巴瘤8例，其中男4例，女4例，年齡3275歲，平均56歲;鼻腔2例，咽部4例，會(huì)厭2例。 2.2 病理檢查 &n bsp; 34例NK/T腫瘤細(xì)胞均有不同程度的凝固性壞死，異型細(xì)胞彌漫增生并穿插于腺體與表皮之間，細(xì)胞體積中等偏大，胞漿寬、透明，核大，異型明顯，染色質(zhì)粗細(xì)不等，有時(shí)可見(jiàn)核仁。血管增生較明顯，可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)血管和浸潤(rùn)神經(jīng)現(xiàn)象。背景炎細(xì)胞可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和組織細(xì)胞。 8例B細(xì)胞淋巴瘤中4例可見(jiàn)凝固性壞死，腫瘤細(xì)胞彌漫分布，需與NK/T細(xì)胞淋巴瘤鑒別。 2.3 免疫組化 陽(yáng)性表達(dá)詳見(jiàn)表1，其中28例TI

10、AI（+）以上，20例GranzymeB（+）以上，背景反應(yīng)性細(xì)胞表達(dá)TIAI，不表達(dá)GranzymeB。腫瘤細(xì)胞體積稍大、異型明顯者11例，其TIAI、GranzymeB均陽(yáng)性;而腫瘤細(xì)胞體積稍小、異型較小的 23例中TIAI16例（+），7例性（P>0.05），而與GranzymeB表達(dá)相關(guān)（P<0.05）。Ki67陽(yáng)性率為80%95%者15例，其中表達(dá)TIAI（+）11例，GranzymeB（+）11例;而Ki67陽(yáng)性率60%79%者為19例，其中表達(dá)TIAI（+）17例，TIAI（-）2例，GranzymeB（+）9例，GranzymeB（-）10例，經(jīng)統(tǒng)計(jì)

11、學(xué)處理腫瘤細(xì)胞Ki67陽(yáng)性率的高低與TIAI表達(dá)無(wú)相關(guān)性（P>0.05），而與GranzymeB表達(dá)有相關(guān)性（P<0.05）（見(jiàn)表2）。表1 34例鼻NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞毒蛋白的表達(dá)細(xì)胞毒蛋白 陽(yáng)性程度（%） n - +/- + + +TIAI 34（100.0） 1（2.9） 5（14.7） 9（26.5） 9（26.5） 10（29.4） GranzymeB 34（100.0） 8（23.5） 6（17.6） 7（20.6） 6（17.6） 7（20.6）表2 34例鼻NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞毒蛋白的表達(dá)和腫瘤細(xì)胞的異型性及Ki67的相關(guān)性n TIAI + -

12、P GranzymeB + - P異型性 34 + 11 0 11 0 - 16 7 >0.05 9 14 <0.05 Ki67 34 60%79% 80%95% 17 11 2 4 >0.05 9 11 10 4<0.05對(duì)照組中面部B細(xì)胞淋巴瘤8例，CD20和CD79a（+），而，CD54RO、CD3、CD56、TIAI、GranzymeB（-）;頸淋巴結(jié)外周T細(xì)胞淋巴瘤4例，全部CD20（-）、CD79a（-）、CD56（-），CD45RO（+）、TIAI（+），1例GranzymeB（+）。 3 討論 T/NK細(xì)胞淋巴瘤較B細(xì)胞淋

13、巴瘤低，常發(fā)生在結(jié)外。目前認(rèn)為，T/NK細(xì)胞淋巴瘤是一種特殊類(lèi)型的腫瘤。但難以確定其細(xì)胞來(lái)源是真性NK細(xì)胞還是表達(dá)NK相關(guān)標(biāo)記的細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL）。NK/T的一般特征為:（1）組織學(xué)呈血管中 心性浸潤(rùn)、凝固性壞死、細(xì)胞異型性;（2）免疫學(xué)表現(xiàn)CD45RO、CD3、CD56;（3）臨床上較結(jié)內(nèi)T細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后差。由于該腫瘤常表現(xiàn)細(xì)胞大小、形態(tài)不一，CD56表達(dá)常不理想，另外因取材受限、壞死、炎癥背景等影響診斷。具有細(xì)胞毒功能的NK細(xì)胞和CTL胞質(zhì)中存在一組特化的溶解蛋白，在介導(dǎo)細(xì)胞毒過(guò)程中起關(guān)鍵作用，其主要成分有T細(xì)胞內(nèi)抗原（TIAI）、孔形成蛋白-穿孔素和絲氨酸蛋白酶-粒酶B（Granzy

14、meB），前者存在于所有細(xì)胞毒細(xì)胞，后兩者存在于活化的細(xì)胞毒細(xì)胞。TIAI除標(biāo)記NK和CTL細(xì)胞以外，還可以標(biāo)記中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。本研究中端粒酶B陽(yáng)性率為60%，較TIAI陽(yáng)性率80%為低。但特異性強(qiáng)，與TIAI聯(lián)合使用對(duì)NK/T診斷幫助大。目前認(rèn)為，CD3、CD56、細(xì)胞毒性蛋白，以及EBV原位雜交的表達(dá)有利于診 斷NK/T細(xì)胞淋巴瘤。而細(xì)胞毒蛋白比EBV更有參考價(jià)值。本研究中，GranzymeB的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的異型性及Ki67表達(dá)程度相關(guān)。近來(lái)研究表明，GranzymeB陽(yáng)性的CTL淋巴瘤在組織學(xué)上可見(jiàn)更明顯的血管侵襲、壞死、細(xì)胞異型 1 ，也有人認(rèn)為，GranzymeB陽(yáng)性病例易復(fù)

15、發(fā)，生存率下降，GranzymeB可作為預(yù)后不良的指標(biāo) 2 。Ki67陽(yáng)性程度與GranzymeB表達(dá)相關(guān)需進(jìn)一步研究。 綜上所述，TIAI和GranzymeB對(duì)NK/T細(xì)胞淋巴瘤的診斷有較好的特異性和敏感性，后者的特異性大于前者。診斷NK/T細(xì)胞淋巴瘤時(shí)，聯(lián)合使用CD45RO、CD3、CD56、TIAI或GranzymB等免疫組化染色為HE形態(tài)學(xué)診斷提供重要參考。 參考文獻(xiàn) 1 De-Bruin PC，Kummer JA，Van der Valk P，et al.GranzymeB expressing peripheral T-cell lymphomas:neoplastic equivalents of activated cytotoxic T cel