不同給藥方法對(duì)線蟲藥物吸收效率的影響

1、不同給藥方法對(duì)線蟲藥物吸收效率的影響Drug Absorption Efficiency in Caenorhbditis elegans Delivered by Different MethodsShan-Ofng Zheng Ai-Jun Ding1 ar Guo-Ping Li1r GuikSheng Wu*r |Hluai Rong Luo11 SLite K-ny 由匕7/皿/ < Ftiochrmidry Jind Ptwil Rj?hnjrcrs In WhEKjnninq ImtrEute- atChmier 知.dMny & Scirrwtt-, Kuvnnq

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3、 Chjfi>秀麗隱桿線蟲在許多研究領(lǐng)域被大量用作的模型生物，并經(jīng)常伴隨著不同的給藥方式。 將藥物傳遞給線蟲的方法因研究的不同而不同，因此很難比較研究結(jié)果。研究者用五種常用的低水溶性白藜蘆醇和水溶性5-氟-2'-脫氧尿音(FUDR訥陽(yáng)性化合物對(duì)線蟲的藥物吸收效率進(jìn)行了評(píng)價(jià)。白藜蘆醇和FUDR在線蟲體內(nèi)的濃度逐漸增加，在12小時(shí)至一天內(nèi)達(dá)到最高， 然后緩慢下降。同時(shí)，藥物濃度越高，代謝率越高。在同一時(shí)間點(diǎn)， 喂食死菌的線蟲體內(nèi)的藥物濃度高于活菌。結(jié)果表明，活菌培養(yǎng)基中的藥物濃度比死菌培養(yǎng)基中的藥物濃度下降快得多，在12小時(shí)內(nèi)達(dá)到原來(lái)濃度的一半左右。結(jié)論：低水溶性白藜蘆醇與水溶性FU

4、DR具有相同的吸收代謝模式。線蟲的藥物代謝率與劑量和時(shí)間有關(guān)。NGM dead method和liquid growing method在線蟲中達(dá)到了最佳的吸收效率。線蟲體內(nèi)的藥物濃度與小鼠相當(dāng)，為從線蟲到哺乳動(dòng)物的劑量轉(zhuǎn)化提供了一座橋梁。LE Kdiua (JP5H cjlcn meihodNGM live opsd驢.cohan |- 2lM) mL LB medium methodN(iM desd-method J，"口 7即1 Sion _|12QQ mL LB Mium洶 mL LB medium, 37七Adding Rcs-veraUol tnconccniratio

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6、M plaies p mdhtxi101fls0 signal cokm pDO mL LB mediumFigure 2. The summary of drug adnninistratiem for LB medium method- N<GM Eve melhodL NGM dead method, and spot dead inM-tod.分別是：(1) LB medium method:將白藜蘆醇原液用含有OP50大腸桿菌的LB液體培養(yǎng)基稀釋成最終濃度為100uM , 1.5mL的菌液涂布在100mm NGM板。(最常用的！ ！ ！)(2) NGM live method

7、:白藜蘆醇原液用 NGM(滅菌后低于65C)稀釋至100uM的濃度， 然后將NGM倒入空培養(yǎng)皿中作為線蟲的載體，并將活 OP50涂布在NGM板的表面(65 C 30min)。（3）NGM dead method:白藜蘆醇原液用 NGM（滅菌后低于65C）稀釋至100uM的濃度， 然后將NGM倒入空培養(yǎng)皿中作為線蟲的載體，并將死菌OP50涂布在NGM板的表面（65C30min ）。（4） spot dead method ：在 NGM 平板表面涂1.5mL 的 100uM 白藜蘆醇，然后覆蓋死菌。（5） liquid growing method : 同期化 N2成蟲設(shè)為第1天，在含有 35mL

8、 S培養(yǎng)基的50mL 離心管中培養(yǎng)，白藜蘆醇在S培養(yǎng)基中的濃度為100uM ,死菌加入S培養(yǎng)基中作為食物。五種處理方法中 FUDR 的最終濃度為 50uM 。這里就是已經(jīng)概況絕大部分，下面是細(xì)節(jié)。不看也無(wú)所謂，看了又收費(fèi)。文章題目已經(jīng)有了，可以自己下載羅懷榮教授的文章。高效液相色譜法測(cè)定線蟲體內(nèi)白藜蘆醇和 FUDR 濃度的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)白藜蘆醇和FUDR 的保留時(shí)間分別為 7.2 和 5.2 分鐘（圖略）。接著做了，線蟲體內(nèi)高效液相色譜法檢測(cè)白藜蘆醇和FUDR的重復(fù)性和穩(wěn)定性，白藜蘆醇和FUDR的HPLC檢測(cè)精度研究（圖略）。說(shuō)明方法可行性。（簡(jiǎn)單的說(shuō)就是，按上述五種方法給藥，然后線蟲冷M9 沖洗三

9、次，收集，風(fēng)干，稱重，重懸，超聲破碎，離心取上清， 0.45um 過(guò)濾，上樣、檢測(cè)。）藥物吸收效率的五種給藥方法用五種給藥方法，分別在 10 分鐘、 30 分鐘、 1 小時(shí)、 3 小時(shí)、 6 小時(shí)、 12 小時(shí)、第 1 天、第 2 天、第 4 天、第 7 天、第 14 天和第 20 天的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)了給藥線蟲中白藜蘆醇和 FUDR的濃度。白藜蘆醇和FUDR在線蟲中的濃度隨著時(shí)間的推移而穩(wěn)步積累，并在第一天達(dá)到最高，然后逐漸下降。（這里應(yīng)該不存在所謂的轉(zhuǎn)板情況，沒(méi)看到）在整個(gè)處理過(guò)程中，白藜蘆醇和FUDR在線蟲中的吸收率從高到低依次為NGM dead >liquid growing >

10、 spot dead > the NGM live > LB medium method因此，線蟲的最佳吸收效率是NGM dead 。B)ME £un-EHRENGM dead tnahod* Liquid growing wthadSpot tkiid method NGM li*c niLihiid .B medium method10 mm 301 min I hr 3 M 6 hr 12 hr day I dliy 2 day 4 day 7 My 14 chiy 20Culturin£ time NCrM dead imihad-Liquid grow

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12、 of 日明：s in erms was prcwned 則 ugfg The showed th* *>>*構(gòu) thrt# rwind uperfntinro for each fnedhod. The dec虱$ of 由3 w呼喏 wiTwn時(shí)蔚d In Tat* Si ind SrtrHrt 1 >T1 內(nèi)產(chǎn)3為了探討吸收效率與藥物劑量的關(guān)系，用藥物50、100、150um三個(gè)濃度，給藥7天后，比 較了 NGM dead 和 liquid growing 的吸收效率。Ti>bh 3. The absorption 雨Eiency of wormscompared

13、 bpfww th* NM 加d method and the liquid growing mHhod.cvncv«Ttir«lwn制iWO Mi» jiMF* iwwwmrql ggncwtifllipfitiwivwrwtirol cpownlrttign |耳8n4«mrmiQn 加3皆NGM d.«d mUbod注二14%勢(shì)了J”和J D4脛就二1立卻Uqvld groiHngi mmhM194M 時(shí) MJB5M3JK49SLX 二 1 女"The。7 mkm CT£*d 7內(nèi) 限就 ihre? ooirencra

14、iorrscufcured 場(chǎng)r usingckddmeihod arid liquid 中m秋 eHkk! Th吟 table shewed rh« 加版gge oftfH史"e nd $ 心e.i.p mefits lor each cDFMntrdan m wMh meLhod.MIO.1571小甘網(wǎng) M Wt"白藜蘆醇和FUDR在線蟲中的代謝為了測(cè)定線蟲體內(nèi)白藜蘆醇和FUDR的代謝，白藜蘆醇和 FUDR的濃度從 400um到12.5um不等，給藥6小時(shí)，在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定。相鄰時(shí)間間隔之間的斜率表示代謝速率。白藜蘆醇和FUDR具有相同的代謝物模式。隨著時(shí)間的

15、推移，代謝速率逐漸增加，在 812小時(shí)的時(shí)間間隔內(nèi)達(dá)到最高，且隨著降低給 藥濃度降低而降低。OOOOQOQnoou OOOQn O8 52 9 6307 4IX520 634 4 4 3 333222 1II二)SUJPSU 一一400 jiM +200 pM *100 gM50pM -25 pM- 12.5 |1MIC nun 30 min I hr 2 hr 1 hr 4 hr 6 hr 8 hr 12 hr 16 hrTime3 * a 3 TH ? m 11111M瓦二二 Em/ 三 ManTOO pM-200 pM-lOOpM-5UpM25 pM-12.5 rM10min 30mm

16、1 hr 2hr 3 hr4hr6 hr 8hr 12hr 16hrTime代謝率一般為劑量應(yīng)答，較高濃度的藥物在同一時(shí)間間隔內(nèi)具有較高的代謝率?；畹拇竽c桿菌OP50降低了 LB medium method 和theNGM live 的總藥物濃度。研究者懷疑活的 OP50大腸桿菌會(huì)代謝藥物，降低培養(yǎng)基中的總藥物濃度，為了驗(yàn)證這個(gè)假設(shè)，研究者測(cè)定了白藜蘆醇和FUDR在LB medium method、 NGM livemethod > NGM dead method的濃度。隨著時(shí)間的推移，含有死菌的培養(yǎng)基中的藥物濃 度緩慢降解。然而，與活菌孵育12小時(shí)的培養(yǎng)基中藥物濃度僅為原濃度的一半。活

17、菌培養(yǎng)基中的藥物濃度比死菌下降快得多。以上結(jié)果表明，活菌可以代謝藥物，降低線蟲對(duì)藥物吸收率。I耳100 5 hrt lir3 hrCdllutiriH TlnwNGM dei ui-iiKjdNGM Iiyu Tiietluxi LB mcdliiaci tndlK'dB)S三 EEaPE-二占 Han*卜 dead incthodN(3V le rierkulLB mediiin tnetbod結(jié)論：HPLC法測(cè)定線蟲體內(nèi)藥物的濃度是有效的。白藜蘆醇和 FUDR用NGM dead method 和liquid growing method 對(duì)線蟲的吸收效率最 好。spot dead method能以較少的總藥物量達(dá)到相當(dāng)大的吸收效率?；罹軌蛳糠炙幬?，導(dǎo)致藥物吸收效率降低。低水溶性白藜蘆醇和水溶性FUDR在線蟲中具有相同的鐘形積累模式和相同的代謝模式。線蟲體內(nèi)的藥物濃度與小鼠