常見(jiàn)病原菌的滅菌抑菌保藏原理及方法

1、常見(jiàn)病原菌的滅菌、抑菌、保藏原理及方法消毒滅菌 基本概念消毒（disinfection）：殺死物體上或環(huán)境中的病原微 生物,并不一定殺死細(xì)菌芽胞或非病原微生物的方法。 滅菌（sterilization）：殺死 物體上所有微生物的方法(包括芽孢)。 一、消毒滅菌的方法常用的消毒和滅菌方法可分為：1）物理方法：熱力滅菌法輻射殺菌法濾過(guò)除菌法干燥與低溫抑菌法2）化學(xué)方法3）生物滅菌法熱力滅菌 原理： 破壞菌體蛋白質(zhì)與核酸，使其肽鏈斷裂，蛋白質(zhì) 變性凝固，核酸解鏈崩解, 導(dǎo)致細(xì)菌死亡。 火焰灼燒 干熱滅菌法 烘箱熱空氣滅菌 LIH法高溫滅菌 巴氏消毒 HTST法 常壓 下 煮沸消毒 間歇滅菌 濕熱滅菌

2、消毒法 常規(guī)加壓滅菌 加壓 連續(xù)加壓滅菌法 種類(lèi)： 常用熱力滅菌法種類(lèi)方法效果用途干熱焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒灼滅菌接種環(huán)，試管口干烤紅外線干烤箱，熱空氣160-170C 2h電磁波熱效應(yīng)滅菌滅菌玻璃器皿等耐高溫的物品醫(yī)療器械濕熱煮沸法100C，5-10分鐘，沸水消毒飲水和食具高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌器103.4Kpa121.3C15-20分鐘滅菌耐高溫耐濕物品 輻射殺菌法 紫外線（ ultraviolet ray,UV) : 260nm-266nm（最佳殺菌波長(zhǎng)） 殺菌原理：使DNA上相鄰的T堿基通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合成 二聚 體，干擾DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌死亡 特點(diǎn)： 穿

3、透力弱 適用范圍：適于空氣和物體表面消毒濾過(guò)除菌法（filtration） 機(jī)理：用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去, 以達(dá)到除菌目的 器具：濾菌器（filter） 適用物品：不耐高溫物品（血清、毒素、抗生素）以及 空氣等的除菌 低溫抑菌法在低溫狀態(tài)下真空抽去水分在低溫狀態(tài)下真空抽去水分冷凍真空干燥法：冷凍真空干燥法：用途：保存菌種干燥與（二）化學(xué)消毒滅菌法消毒劑殺菌機(jī)理：1.使菌體蛋白變性和凝固 ： 酚、醇、酸鹼、醛類(lèi)，重金屬鹽類(lèi)（高濃度） 2 .干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)（酶失活）： 氧化劑、重金屬鹽類(lèi)（低濃度） 3. 損傷細(xì)菌細(xì)胞膜 酚類(lèi)（低濃度）、表面活性劑 殺菌或抑菌，并無(wú)絕對(duì)界限，常常

4、不易區(qū)分。同一物質(zhì)，濃度高時(shí)可殺菌，而濃度低時(shí)只能抑菌，作用時(shí)間長(zhǎng)可殺菌，作用時(shí)間短則只能抑菌。另外，由于各種微生物性質(zhì)的不同，同一物質(zhì)對(duì)一種微生物具有殺菌作用，而對(duì)另一種微生物可能僅有抑菌作用。 抑菌 采用化學(xué)或物理方法抑制或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程。防腐 利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長(zhǎng)繁殖，即通過(guò)制菌作用防止食品、生物制品等對(duì)象發(fā)生霉腐的措施化療 指利用具有高度選擇毒力，即對(duì)病原菌具高度毒力而對(duì)其宿主基本無(wú)毒的化學(xué)物質(zhì)來(lái)抑制主體內(nèi)病原微生物的生長(zhǎng)繁殖，借以達(dá)到治療該宿主傳染病的一種措施抑菌的方法 1、低溫 2、缺氧 3、干燥 4、高滲 5、高酸度 6、高醇度 7、加防腐劑抑

5、菌的原理 1、低溫低溫：利用4以下的各種低溫（0， -20，-70，-196等）保藏食物等 2、缺氧缺氧：采用抽真空、沖氮或二氧化碳、加除氧劑等方法來(lái)有效防止食品和糧食等的霉腐、變質(zhì)而達(dá)到保鮮的目的 3、干燥干燥：采用曬干、烘干或紅外線干燥等方法對(duì)糧食、食品等進(jìn)行干燥保藏 在密封條件下，也用生石灰，無(wú)水氯化鈣干燥抑菌的原理 4、高滲高滲：通過(guò)鹽腌和糖漬等高滲措施來(lái)保護(hù)食物，是在民間早就流傳的有效防霉腐方法。 5、高酸度高酸度：在我國(guó)具有悠久歷史的泡菜，就是利用乳酸菌的厭氧發(fā)酵使新鮮蔬菜產(chǎn)生大量乳酸，借這種高酸度而達(dá)到抑制雜菌和防霉腐的目的。 6、高純度高純度：用白酒或黃酒保存食品，在我國(guó)有悠久

6、傳統(tǒng)，如醉蟹、醉麩、醉筍和黃泥螺等產(chǎn)品，都是特色風(fēng)味食品。 7、加防腐劑加防腐劑：有些食品、調(diào)味劑、飲料、果汁或工業(yè)器材中，可加入可加入適量的防腐劑或防霉劑來(lái)達(dá)到防霉腐的目的，如丙酸（0.32%）或乙二酸（0.32%）來(lái)做面包等的防腐劑?；瘜W(xué)因素 1、表面消毒劑：隨濃度遞增相繼出現(xiàn)制菌和殺菌作用，形成一個(gè)連續(xù)的作用譜 2、磺胺類(lèi)藥物：抗代謝 3、抗生素：在低濃度能抑制和干擾他種生物的生命活動(dòng)殺菌殺菌抑菌抑菌含義消毒劑對(duì)微生物的殺滅能力生物制劑抑制妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及活性的能力作用時(shí)間殺菌時(shí)間可為2min、5min、10min、20min相同條件下作用時(shí)間越短，殺菌率越低，所以選擇最短的作用時(shí)間來(lái)

7、檢測(cè)殺菌性能更具有代表性抑菌時(shí)間可為2min、5min、10min、20min相同條件下作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌率越低，所以選擇最長(zhǎng)的作用時(shí)間來(lái)檢測(cè)抑菌性能更具有代表性殘留消殘留消毒劑的毒劑的去除方去除方法不同法不同中和劑法（化學(xué)中和劑法（化學(xué)中合法）中合法）稀釋法（酸堿平衡稀釋法（酸堿平衡法）法）評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)殺菌率90%，產(chǎn)品有殺菌作用。抑菌率50%90%，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率90%產(chǎn)品有較強(qiáng)的抑菌作用殺菌殺菌抑菌抑菌菌種保藏基本原則1、保藏菌種時(shí)首先要選擇它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等，并創(chuàng)造一個(gè)低溫、干燥、缺氧、避光和缺少營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境條件，以利于休眠體能較長(zhǎng)時(shí)間維持其休眠狀態(tài)。2、對(duì)于不產(chǎn)孢子的

8、微生物，也要使其新陳代謝處于最低水平，又不會(huì)死亡，從而達(dá)到長(zhǎng)期保藏的目的。常用菌種保藏方法1 常用的簡(jiǎn)易保藏法：斜面?zhèn)鞔２胤?、半固體穿刺保藏法（適用于細(xì)菌和酵母菌）、石蠟油封法2 甘油保藏法3 干燥保藏法4 真空冷凍干燥保藏法5 液氮超低溫保藏法1 簡(jiǎn)易保藏法基本原理：利用低溫來(lái)抑制微生物生命活動(dòng)。通常將在斜面或半固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好時(shí)培養(yǎng)物直接放到210 冰箱中保藏，當(dāng)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡后再重新移植到新的 培養(yǎng)基上，故又稱定期移植保藏法或傳代培養(yǎng)保藏法。1 簡(jiǎn)易保藏法 定期移植時(shí)間間隔： 一般不產(chǎn)芽孢的細(xì)菌約2周至1個(gè)月； 放線菌、酵母菌和絲狀真菌46個(gè)月； 石蠟油封法一般可保藏1年。

9、 優(yōu)缺點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，可隨時(shí)觀察菌種生長(zhǎng)狀況，但較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因經(jīng)常移植傳代，微生物物易發(fā)生變異。1 簡(jiǎn)易保藏法 定期移植時(shí)間間隔： 一般不產(chǎn)芽孢的細(xì)菌約2周至1個(gè)月； 放線菌、酵母菌和絲狀真菌46個(gè)月； 石蠟油封法一般可保藏1年。 優(yōu)缺點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，可隨時(shí)觀察菌種生長(zhǎng)狀況，但較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因經(jīng)常移植傳代，微生物物易發(fā)生變異。1.1斜面?zhèn)鞔２胤?貼標(biāo)簽：菌種 菌株 接種日期 接種：對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期 成熟的孢子 培養(yǎng)： 細(xì)菌37，1824h 酵母2830 ，3660h 放線菌和絲狀真菌28 ，47d 收藏：管口面塞用牛皮紙包扎，或用融化的固體石蠟封棉塞后置4冰箱保存。1.2半固體穿刺保藏法 貼標(biāo)簽 穿

10、刺接種：將菌種直刺入直立柱中央 培養(yǎng)：同傳代保藏法 收藏：待菌長(zhǎng)好后，用浸有石蠟的無(wú)菌軟木塞或橡皮塞代替面塞并塞緊，置4 冰箱中保藏，保藏0.51年。1.3石蠟油封法 石蠟油滅菌：將石蠟油裝入三角瓶中，裝量不超過(guò)總體積的1/3，塞上面塞，外包牛皮紙，加壓蒸汽滅菌（121 ，30min），連續(xù)滅菌2次。然后在40 溫箱中放置2周或置105110 烘箱中烘2h，除去石蠟油中的水分。 培養(yǎng) 加石蠟油：以無(wú)菌吸管吸石蠟油加至菌種管中，加入量以高出斜面頂端或直立柱培養(yǎng)基表面約1cm為宜。 收藏：面塞外包牛皮紙或用無(wú)菌橡皮塞，把菌種管直立放置于4 冰箱中。 放線菌、霉菌及產(chǎn)芽孢細(xì)菌一般可保2年，酵母菌及不

11、產(chǎn)芽孢細(xì)菌可保1年。2 甘油保藏法 期長(zhǎng)，保存期間取樣測(cè)試方便，在基因工程中常用于保存含質(zhì)粒的菌株，一般可保35年。保護(hù)劑： 40%左右的甘油 機(jī)理：適當(dāng)濃度甘油中，少量甘油分子進(jìn)入細(xì)胞，使菌種細(xì)胞在冷凍過(guò)程中緩解了其由于強(qiáng)烈脫水及胞內(nèi)形成冰晶而引起的破壞。 保藏溫度：-20 左右或-70 特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單，保藏2 甘油保藏法 方法步驟： 無(wú)菌甘油的制備：80%的甘油在121滅菌20min 保藏培養(yǎng)物的制備：活化 純化 性能檢測(cè) 制備菌種培養(yǎng)物 保藏菌懸液的制備：液體法 菌苔法 -20 保藏 快速冷凍；乙醇-干冰 液氮 超低溫保藏：-70 一般細(xì)菌、酵母保存期為35年。3 干燥保藏法 基本原理：

12、將微生物賴以生存的水分蒸發(fā)掉，使細(xì)胞處于休眠和代謝停滯狀態(tài)，從而達(dá)到較長(zhǎng)期保藏的目的。低溫條件下，保藏期可達(dá)數(shù)年至十幾年之久。 砂土管保藏法、明膠片保藏法、硅膠保藏法、麩皮保藏法 砂土管保藏法產(chǎn)生芽孢的細(xì)菌及形成孢子的霉菌和放線菌。 方法：處理砂土 裝沙土管 制備菌液 加孢子液 干燥 收藏 恢復(fù)培養(yǎng) 明膠片保藏法細(xì)菌 制備菌懸液 制備菌液 制備蠟紙 加菌液 干燥 收藏 恢復(fù)培養(yǎng)3干燥保藏法 硅膠保藏法絲狀真菌。 方法：制備硅膠 制備菌液 加菌液 干燥 收藏 恢復(fù)培養(yǎng) 麩皮保藏法產(chǎn)孢子的絲狀真菌。 制備麩皮培養(yǎng)基 培養(yǎng)菌種 干燥 收藏 恢復(fù)培養(yǎng)3干燥保藏法4冷凍真空干燥保藏法 該法集中了菌種保藏中低溫、缺氧、干燥和添加保護(hù)劑等多種有利條件，是微生物代謝處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)。 該法可同時(shí)用于細(xì)菌、放線菌、絲狀真菌、（除少數(shù)不產(chǎn)孢子或只產(chǎn)生絲狀體真菌外）、酵母菌及病毒的保藏。 該方法保藏菌種范圍廣、保藏時(shí)間長(zhǎng)（一般可達(dá)